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文档简介
分子生物学实验A(343006)实验教学大纲
01.教学单位名称:生命科学学院
02.实验中心名称:吉林大学国家级生物实验教学示范中心
03.课程名称:分子生物学实验A
04.课程代码:343006
05.课程类别:学科基础课
06.课程性质:必修
07・课程学时:64
08.课程学分:2
09.面向专业:生物科学、生物技术、理科实验班
10.实验课程的教学任免.要求和教学目的
10.1教学任尧:
是让学生运用已学过的知识验证一些结论、结果和现象,及综合运用已学过的理论知
识设计实验或进行综合性的实验,巩固和加深对分子生物学课程中基本理论知识的理解,
使学生对分子生物学方法的应用和意义有具体而全面的理解,训练学生理论知识的运用能
力、实验操作技能'仪器仪表的使用能力、实验数据的处理和分析能力。
10.2教学要求:
要求学生在实验前认真听教师讲解,认真预习,掌握实验的基本原理、主要操作步骤和
注意事项。实验中操作正确,观察细致,记录认真,能及时发现、分析和解决实验中出现
的问题。正确书写实验报告,并对实验结果进行分析讨论,从而将理论与实际联系起来,
全面提高学生的综合素质。
10.3教学目的:
通过本课程的教学,使学生掌握现代分子生物学研究的基本知识、理论、方法、技术
和技能。通过质粒载体与目的基因双酶切,琼脂糖凝胶电泳、琼脂糖凝胶回收,质粒载体与
目的基因的连接,感受态细胞的CaCI2法制备,重组DNA的转化,重组子的筛选和质粒
DNA的抽提以及PCR法鉴定阳性克隆等实验过程,使学生掌握基因工程的核心内容、基本
过程与实验技术,训练并培养学生的实际动手能力及发现、分析和解决问题的能力。利用
分子生物学实验理论、技术与方法(含查资料获得的新知识),自己独立设计实验方案并
完成填报设计实验申请书的全过程,培养学生查阅文献、手册、工具书和其它信息源的能
力及各种文献整理的能力。从而促进学生对生命科学探索的兴趣和爰好、创新思维和科研
素养的培养及综合素质的提高,为今后的毕业论文设计和从事专业相关领域工作奠定良好
的基础。
11.学生应掌握的实验技术及实验能力
11.1掌握DNA双酶切'连接,琼脂糖凝胶电泳'琼脂糖凝胶回收、CaCb法制备感受
态细胞、重组DNA的转化和质粒抽提以及PCR法鉴定阳性克隆等实验技术和方法;
11.2掌握核酸芯片设计与制作'微阵列芯片检测与数据分析等实验技术与方法;
113DNA和RNA提取技术;PGR-RFLP法鉴定基因型技术;Southern印记杂交技
术;动物转基因技术的实验原理;核酸探针制备技术。
12.开设实验项目
重组人白介素78(「hIL-18)基因工程菌的构建。主要内容包括:限制性内切酶EcoR
I和PstI双酶切pUC18质粒和IL78目的基因,琼脂糖凝胶电泳检测,凝胶回收两个
基因片段,在T4-DNAIigase作用下将两个回收片段连接,获得重组pUC18-IL-18;
CaCI2法制备E.coliJM109感受态细胞,转化pUC18-IL78,用PCR法鉴定重组阳
性克隆。
头发中抽提DNA并用PCR-RFLP法鉴定CYP2C9基因型。主要内容包括:从头发中
抽提DNA,并用PCR扩增目的DNA片段,电泳检测后,进行限制性内切酶酶切,检测酶切
位点,用PCR-RFLP法鉴定CYP2C9基因型。
蛋白质印迹分析。主要内容包括:主要内容包括:将目的蛋白进行SDS电泳,
目的蛋白质转移到纤维素膜上,考马斯亮蓝染色后观察'染色结果分析。
DNA探针的制备和标记。主要内容包括:利用大肠杆菌DNA聚合酶的3,外切核酸酶
活性从5,末端切除核酸,同时在DNA聚合酶的5,聚合酶活性的催化下将dNTP添加到切
口的3,末端,5,末端核苜酸的去除与3,末端核苜酸的加人同时进行,导致切口随着DNA
链移动由具有荧光素标记的核苜酸置换了原来的核首酸,可合成具有荧光素标记的DNA探
针。
Southern印迹法。主要内容包括:将待检测的DNA样品固定在固相载体上,与标记
的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过
Southern杂交判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。
RNA的Northern杂交。主要内容包括:RNA分离;将RNA固定到支持物上;固相
RNA与探针分子杂交;对特异结合的探针分子的图像进行检测、捕获和分析。
真核生物cDNA文库的构衡口分析。主要内容包括以生物细胞的总mRNA为模板,用
逆转录酶合成互补的双链cDNA,然后接到载体上,转入到宿主后建立的基因文库就是
cDNA文库。
电穿孔法转染哺乳动物细胞。主要内容包括:将盛有细胞和DNA混合液的特制小容器
置于电泳冲仪的正负电极之间,在0℃下加高压(2.0~4.0kV)电脉冲10分钟后,将处理
的细胞转移到新鲜培养基中生长2天,再行筛选。
聚合酶链式反应-单链构象多态性检测(PCR-SSCPI主要内容包括:以总RNA为模板
进行PCR扩增,将PCR扩增出特异性好的产物,在聚丙熔酰胺凝胶上进行电泳*染色后观
察电泳结果。
'PLPR启击*表达载薪表达目的基因。主要内容包括:将IL基因以5,端EcoRI和3,
端BamHI酶切位点插入pBV220载体多克隆位点中,转化到大肠杆菌JMI09内,便能通过
温度的变换控制CI蛋白的活性,继而调节启动子的活性,使IL基因连同其5,端上游带
SD序列转录成mRNA并转录终止于rmB位点。
微生物基因组学分析。主要内容包括:在核酸芯片上固定不同细菌的探针,通过PCR
扩增待测细菌的特定基因,并对PCR产物进行荧光标记,标记后的PCR产物与基因芯片进
行杂交用微阵列芯片CCD扫描仪对基因芯片进行扫描和数据分析,明确芯片上检测出的基
因,进而推测出待测细菌类型。
荧光定量PCR法鉴定CYP2c9基因型。主要内容包括:从口腔抽提DNA并进行检测
并用采用PCR法扩增CYP2c9DNA片段甩泳检测后,最后采用Real-timePCR法进行突
变位点的检测,鉴定CYP2C9基因型。
荧光定量PCR检测液体发酵杂菌污染。主要内容包括:对微生物进行液体发酵培养,
取发酵液并对微(生物进行分离。提取微生物DNA并进行荧光定量PCR。根据反应曲线判定
染菌程度。
琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段。主要内容包括:配制琼脂糖凝胶,利用水平电泳对不
同分子量DNA片段进行分离。
PCR扩增目的DNA片段。主要内容包括:PCR使用技术。
蓝白斑筛选。主要内容包括:将含有重组DNA的大肠杆菌的涂布与培养、重组克隆的
筛选,重组率的计算。
感受态细胞的制备。主要内容包括:大肠杆菌液体培养与化学处理。
设计实验。主要内容包括:人胰岛素基因在大肠杆菌中的克隆表达;采用重鎏延伸PCR
获得植物密码子优化的霍乱弧菌CTB基因;霍乱弧菌CTB基因一人胰岛素融合基因植物
表达载体的构建及其转化;按植物偏爰空码子合成降钙素基因及重组表达载体的构建;中
国人群CYP2E1基因的主要多态性类别与抗结核药物代谢的关系;毕赤酵母的cDNA文库的
构建及分析;重组人胸腺肽al在大肠杆菌中的表达;SRAS膜蛋白基因工程菌的构建及表
达;用毕赤酵母表达人铜、锌SOD。
开设实验项目一览表
每组人首次开出
实蛤项目名称实验类型实验性质实验学时
实验项目编号数年月
重组人白介素
-18(rhlL-18)基因_|_综合性必做422200803
程
头发中抽提DNA并用
PCR-RFLP法鉴定综合性202200403
CYP2C9基因型
蛋白质印迹分析综合性42200603
DNA探针的制备和标记
综合性162200403
Southern印迹法综合性腼162200403
RNA的Northern杂
综合性腼162200603
交
真核生物cDNA文库的构
综合性202200603
建和分析
电穿孔法转染哺乳动物细
综合性162200603
胞
聚合酶链式反应-单链构
象多态性检测综合性162200603
(PCR-SSCP)
PLPR启动子表达载体
综合性202200603
表达目的基因
微生物基因组学分析综合性162200703
荧光定量PCR法鉴定
综合性162201409
CYP2C9基因型
荧光定量PCR检测液
综合性162201409
体发酵杂菌污染
琼脂糖凝胶电泳分离
验证性41200903
DNA片段
验证性腼41200903
PCR扩增目的DNA片段
蓝白斑筛选验证性41200903
感受态细胞的制备验证性41200903
设计实验必做21200603
13.实验教材或指导书或主要参考资料
1)滕利荣等,生物学基础实验教程口(第三版),科学出版社,2008年。
2)周俊宜等,分子生物学基本技能与策略,科学出版社,2003年;
3)魏群主编,分子生物学实验指导,高等教育出版社,1999年;
4)J.萨姆布鲁克,分子克隆实验指南,科学出版社,2005年;
5)郝福英等,分子生物学实验技术,北京大学出版社,2003年;
6)梁国栋主编,最新分子生物学实验技术,科学出版社,2007年。
14.考核要求,考核方式及成绩评定标准
14.1考核要求:以培养学生的科学态度、科学思维和实验操作能力为前提,注重训
练学生的独立动手能力'思考能力,发现问题、分析问题和解决问题的能力,实验设计能
力及创新能力,教师应及时、客观、公正、如实评价每名学生实验情况及评阅试卷、实验
报告和设计实验。
14.2考核方式:采取考核与考试相结合的方式综合评定实验成绩,按百分制方式计
分。
14.3成绩评定标准:根据生物基础实验教学中心制定的《学生实验成绩考评方法》
进行评定。实验习惯成绩,10%;预习考试成绩"0%;实验操作成绩,40%;实验报告成
绩,20%;设计实验成绩,20%„
15.执笔人
崔银秋教授
林凤教授
姜大志副教授
汤海峰工程师
16.制定日期
17.宙核人
周慧教授
崔银秋教授
18.宙核日期
19.学院宙定程序说明
2013年10月1。日接到学校通知后成立《生命科学学院实践教学大纲(2013版)》
修订专项工作组并进行前期筹备工作。2013年10月14日至2013年10月16日各门课
程梯队召开《生命科学学院实践教学大纲(2013版)》修订工作会议,分配修订任务。
2013年10月21日前各门课程梯队提交《生命科学学院实践教学大纲(2013版)》修订
稿。2013年10月25日生命科学学院教学委员会召开第一次会议审议《生命科学学院实
践教学大纲(2013版)》修订稿并提出整改意见。2013年10月26日至10月28日各门
课程梯队按照〃整改意见”进行整改。2013年10月30日生命科学学院教学委员会召开
第二次会议审定通过《生命科学学院实践教学大纲(2013版大
20.学院审定日期
分子生物学实验A(343006)实验项目卡1
No字段名填写内容
1课程名称分子生物学实验A
2课程编号343006
3实睑项目名称重组人白介素78(rhlL-18)基因,程菌的构建
4实验项目编号
5网络实验1
6每组人数2
7计划学时数42
8实验性质必做
掌握利用T7噬菌体启动子的的表达系统构建基因工程菌的技术路
线和实验流程;双酶切、琼脂糖凝胶电泳'琼脂糖凝胶回收、CacL
9实验目的
法制备感受态细胞、重组DNA的转化以及PCR法鉴定阳性克隆等
实验方法和技能;
限制性内切酶EcoRI和PstI双酶切pUC18质粒和ILT8目的
基因,琼脂糖凝胶电泳检测,凝胶回收两个基因片段,在T4-DNA
10实验内容Iigase作用下将两个回收片段连接,获得重组pUC18-IL-
18;CaCI2法制备£co//JM109感受态细胞,转化pUC18-IL-
18,用PCR法鉴定重组阳性克隆。
PCR是在模板DNA、弓I物和dNTPs的存在下依赖于DNA聚合酶
11实验原理的酶促反应;业克隆的基本过程:目的DNA片段和载体的制备'
目的DNA片段和载体的连接、连接产物的转化'重组子筛选。
1.演示性口;2验证性口;3.综合性回;4.设计性口;5.研究
12实验类型
性口。
13实睑者层次本科生
高速冷冻离心机(2台),可调式微量移液器(16套),凝胶成像
系统(1台),超净工作台(8台),电动助吸器(8台),可见
14实验仪器设备
光透射仪(8台),PCR仪(2台),核酸电泳系统(16套),全
温摇床(2台),全温培养箱(2台\
15实验套数16
16开出时间200803
17教学单位名称生命科学学院
18教学单位编号1113
19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心
20实验中心编号111301
21实验地名称现代生物学基础实验室
22实验地编号唐敖庆楼C区445
IPTG(0.01),X-gal(0.01g),氨芳青霉素(0.01g),pUC18
23一次性材料品名(10uL)fBgin(luL)zBamHI(luL)fPstl(luL)f
T4DNAIigase(0.7uIJ.SybrGreen(IuI)ztaq酶
24一次性材料125元
25而向专业生物科学、生物技术、理科实验班
26实验项目卡制定人崔银秋
27实验项目卡审核人周慧
分子生物学实验A(343006)实验项目卡2
No字段名填写内容
1课程名称分子生物学实验A
2课程编号343006
3实验项目名称头发中抽提DNA并用PCR-RFLP法鉴定CYP2c9基因型
4实验项目编号
5网络实验0
6每组人数2
7计划学时数20
8实验性质W
了解头发中抽提DNA并用PCR-RFLP法鉴定CYP2c9基因型的
9实验目的
实验原理;掌握头发中抽提DNA并用PCR-RFLP法鉴定CYP2c9
基因型的操作方法。
从头发中抽提DNA,并用PCR扩增目的DNA片段,电泳检测后,进
10实验内容
行限制性内切酶酶切,检测酶切位点,用PCR-RFLP法鉴定
CYP2c9基因型。
从毛囊中抽提全基因组DNA;PCR反应;限制性片段长度多
11实验原理
态性分析(RFLP)
1.演示性口;2验证性口;3.综合性回;4.设计性=i;5.研究性
12实验类型
□o
13实验者层次本科生
高速冷冻离心机(2台),可调式微量移液器(16套),凝胶成像
系统(1台),超净工作台(8台),酸度计(2台),可见光透
14实验仪器设备
射仪(8台),PCR仪(2台),核酸电泳系统(16套),全温摇
床(2台),全温培养箱(2台工
15实验套数16
16开出时间200403
17教学单位名称生命科学学院
18教学单位编号1113
19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心
20实验中心编号111301
21实验地名称现代生物学基础实验室
22实验地编号唐敖庆楼C区445
琼脂糖(1g),蛋白腺2.5g)TaqS§(10uL),无水乙醺
10ml),CHELEX700树脂(2.5g),记号笔(1支),脱脂棉球
23一次性材料品名
(10g),100-10003蓝吸头(96个)107003黄吸头(96
个),0.5703白吸头(96个工
24一次性材料29.7元
25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班
26实验项目卡制定人崔银秋
27实验项目卡审核人周慧
分子生物学实验A(343006)实验项目卡3
No字段名填写内容
1课程名称分子生物学实验A
2课程编号343006
3实验项目名称蛋白质印迹分析
4实验项目编号
5网络实验0
6每组人数2
7计划学时数4
8实验性质W
应用Westernblot分析技术,分析SDS电泳分离后并转移
9实验目的
到硝酸纤维素建膜卜的基因丁程产物的成分。
将目的蛋白进行SDS电泳,然后将凝胶上的蛋白质通过电转
10实验内容移,转移到纤维素膜上,考马斯壳蓝染色后观察、分析染色结果。
将蛋白质样品转移到固相载体上以固相载体上的蛋白质或多肽作
为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗
11实验原理
体起反应度过底物显色或放射自显影以检查电泳分离的特异性目
的基因表达的蛋白成分。
1.演示性口;2.3就正性口;3.综合性回;4.设计性工;5.
12实验类型
研究性口。
13实验者层次本科生
高速冷冻离心机(2台),可调式微量移液器(16套),凝胶成像
系统(1台),超净工作台(8台),酸度计(2台),可见光透
14实验仪器设备
射仪(8台),PCR仪(2台),核酸电泳系统(16套),全温摇
床(2台),全温培养箱(2台工
15实验套数16
16开出时间200603
17教学单位名称生命科学学院
18教学单位编号1113
19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心
20实验中心编号111301
21实验地名称现代生物学基础实验室
22实验地编号唐敖庆楼C区445
硝酸纤维素膜20cmX20cm(1张),抗人a干扰素(0.OSmg),
第一抗体(0.05mg),酶标第二抗体(0.05mg),0.5%氨基
23一次性材料品名黑染液(25mL),0.2mlPGR®(96个),脱脂棉(10g),
100-10003蓝吸头(96个),10-100川黄吸头(96个),0.5
-103白吸头(96个工
24一次性材料49.2元
25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班
26实验项目卡制定人崔银秋
27实验项目卡审核人周慧
分子生物学实验A(343006)实验项目卡4
No字段名填写内容
1课程名称分子生物学实验A
2课程编号343006
3实验项目名称DNA探针的制备和标记
4实验项目编号
5网络实验0
6每组人数2
7计划学时数16
8实验性质W
制备可用于序列分析,Southernblot和NouthemBlot等的核
9实验目的
酸探针。
利用大肠杆国DNA聚合酶的3'外切核酸酶活性从5'末端切除核
酸,同时在DNA聚合酶的5,聚合酶活性的催化下将dNTP添加到切
口的3'末端,5'末端核甘酸的去除与3'末端核甘酸的加入同时
10实验内容
进行,导致切口随着DNA链移动由具有荧光素标记的核苜酸置换了
原来的核苜酸,可合成具有荧光素标记的DNA探针。
探针是一种分子。带有供反应后检测用的合适标记物,并仅与特异
11实验原理
靶分子反应;该实验采用切口平移法。
1.演示性口;2.3钻正性口;3.综合性回4设计性口乃.研究
12实验类型
性口。
13实验者层次本科生
高速冷冻离心机(2台),可调式微量移液器(16套),凝胶成像
系统(1台),超净工作台(8台),酸度计(2台),可见光透
14实验仪器设备
射仪(8台),PCR仪(2台),核酸电泳系统(16套),全温摇
床(2台),全温培养箱(2台,
15实验套数16
16开出时间200403
17教学单位名称生命科学学院
18教学单位编号1113
19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心
20实验中心编号111301
21实验地名称现代生物学基础实验室
22实验地编号唐敖庆楼C区445
SephadexG-50葡聚糖凝胶柱(1支),琼脂糖(1g),无水乙
醇(10mL),大肠杆围DNA聚合酶(luL),胰DNA醐luL),
23一次性材料品名
牛血清日雷日V(0.2g),DTT(0.2g),0.2mlPCR管(96
个),1.5ml刻度离心管(96个),0.5-10pl白吸头(96个
24一次性材料43.6元
25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班
26实验项目卡制定人崔银秋
27实验项目卡审核人周慧
分子生物学实验A(343006)实验项目卡5
No字段名填写内容
1课程名称分子生物学实验A
2课程编号343005
3实验项目名称Southern印迹法
4实验项目编号
5网络实验0
6每组人数2
7计划学时数16
8实验性质W
学习并掌握Southern印记杂交技术;检验重组质粒中是否含有外
9实验目的
源DNA,并检测其分子量大小。
将待检测的DNA样品固定在固相载体上,与标记的核酸探针进行
杂交,在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。
10实验内容
通过Southern杂交判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源
的片段以及该片段的长度。
具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下,按碱基互补原则形
11实验原理成双链,此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及
检测方法的灵敏性,综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析结果,便
可绘制出DNA分干的限制图谱。
1.演示性口;2.3钻正性口;3.综合性回;4.设计性口乃.研究
12实睑类型
性口。
13实验者层次本科生
高速冷冻离心机(2台),可调式微量移液器(16套),凝胶成像
系统(1台),超净工作台(8台),酸度计(2台),可见光透
14实验仪器设备
射仪(8台),PCR仪(2台),核酸电泳系统(16套),全温摇
床(2台),全温培养箱(2台)
15实验套数16
16开出时间200403
17教学单位名称生命科学学院
18教学单位编号1113
19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心
20实验中心编号111301
21实验地名称现代生物学基础实验室
22实验地编号唐敖庆楼C区445
硝酸纤维素膜(1张);32P-DNA探针,(0.25mg),记号笔(1
支);脱月箭帛(10g),10070003蓝吸头(96个),10-
23一次性材料品名
100川黄吸头(96个),0.5-103白吸头(96个),0.2mlPCR
管(96个),1.5ml刻度离心管(96个),PE手套(10只)
24一次性材料50.1元
25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班
26实验项目卡制定人林凤
27实验项目卡审核人周慧
分子生物学实验A(343006)实验项目卡6
No字段名填写内容
1课程名称分子生物学实验A
2课程编号343006
3实验项目名称RNA的Northern杂交
4实验项目编号
5网络实验0
6每组人数2
7计划学时数16
8实验性质W
学习用标记探针杂父分析RNA样品中特定的mRNA的大小及壬
9实验目的
度。
用来测量真核生物RNA的量和大小估计其峰度的实验方法,可
以从大量的RNA样本同时获得这些信息。基本内容包括:RNA分
10实验内容
离;将RNA固定到支持物上;固相RNA与探针分子杂交;对特异
结合的探针分子的图像进行检测、捕获和分析。
Northern杂交是将RNA分子在变性琼脂糖凝胶中相互分离后,
将RNA转移至硝酸纤维素滤膜上,用放射性标记的探针进行
11实验原理
DNA-RNA杂交,此法是研究RNA(特别是mRNA)的主要方法之
可测量RNA的含量和大小。
1.演示性口;2.3钻正性口;3.综合性回;4.设计性口乃.研
12实睑类型
究性口。
13实验者层次本科生
高速冷冻离心机(2台),可调式微量移液器(16套),凝胶成像
系统(1台),超净工作台(8台),酸度计(2台),可见光透
14实验仪器设备
射仪(8台),PCR仪(2台),核酸电泳系统(16套),全温摇
床(2台),全温培养箱(2台)
15实验套数16
16开出时间200603
17教学单位名称生命科学学院
18教学单位编号1113
19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心
20实验中心编号111301
21实验地名称现代生物学基础实验室
22实验地编号唐敖庆楼C区445
硝酸纤维素膜(1张);32P-DNA探针,(0.25mg),记号笔(1
支);脱月箭帛(10g),10070003蓝吸头(96个),10-
23一次性材料品名
100川黄吸头(96个),0.5-103白吸头(96个),0.2mlPCR
管(96个),1.5ml刻度离心管(96个),PE手套(10只)
24一次性材料43.5元
25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班
26实验项目卡制定人林凤
27实验项目卡审核人周慧
分子生物学实验A(343006)实验项目卡7
No字段名填写内容
1课程名称分子生物学实验A
2课程编号343006
3实验项目名称真核生物cDNA文库的构建和分析
4实验项目编号
5网络实验0
6每组人数2
7计划学时数20
8实验性质W
掌握将已制备的cDNA连接到构建乂库的人教体上;将有外源DNA
的重组入DNA在体外包装重组入噬菌体颗粒;将重组入噬菌体感
9实验目的
染宿主菌,得到由单个噬菌斑组合而成的cDNA义库;掌握对cDNA
乂库构建的评估方法。
以生物细胞的总mRNA为模板,用逆转录酶合成互补的双链cDNA,
然后接到载体上,转入到宿主后建立的基因文库就是cDNA义库。
10实验内容步骤包括:(1)mRNA的提取及其完整性的确定;(2)cDNA
的合成和克隆;(3)目的cDNA的鉴XE等步骤。
从真核生物的组织或细胞中提取的mRNA,在逆转录酶的作用卜,
在体外被反向转录合成单链DNAz称之为互补DNA(cDNA1以单
11实验原理链cDNA为模板,由DNA聚合酶I合成双1cDNA。将双链cDNA
和载体连接,然后转化扩增,即可莪得cDNA义电
1.演示性口;2.3就正性口;3.综合性回;4.设计性n;5.研究
12实验类型
性口。
13实验者层次本科生
局速冷冻渴心机(2台),可调式微量移液器(16套),凝胶成像
系统(1台),超净工作台(8台),酸度计(2台),可见光透
14实验仪器设备
射仪(8台),PCR仪(2台),核酸电泳系统(16套),全温摇
床(2台),全温培养箱(2台)
15实验套数16
16开出时间200603
17教学单位名称生命科学学院
18教学单位编号1113
19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心
20实验中心编号111301
21实验地名称现代生物学基础实验室
22实验地编号唐敖庆楼C区445
IPTG(0.1g),X-gal(0.1g),氨茉青霉素(0.1g),T4
DNAIigase(0.7uL),sybrGreen
23一次性材料品名
(luL)fTaqg§(10uL),PCR引物对(2uL),DNAMarker
(IOpI),琼脂糖凝胶回收试剂盒(2次),普通质粒小提试剂盒(1
24一次性材料47.2元
25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班
26实验项目卡制定人林凤
27实验项目卡审核人周慧
分子生物学实验A(343006)实验项目卡8
No字段名填写内容
1课程名称分子生物学实验A
2课程编号343006
3实验项目名称电穿孔法转染哺乳动物细胞
4实验项目编号
5网络实验0
6每组人数2
7计划学时数16
8实验性质
9实验目的了解电穿孔法转染的基本原理及影响因素。
将盛有细胞和DNA混合液的特制小容器置于电泳冲仪的正负电极
10实验内容之间,在0℃下加高压(2.0~4.0kV)电脉冲10分钟后,将处理
的细胞转移到新鲜培养基中生长2天,再行筛选。
电穿孔法应用高压电击短暂或稳定地将DNA导入细胞,它适用于
11实验原理多数类型的细胞,既可产生高频率的稳定转染,又可产生短暂的基
因表达,并且由于其所需步骤少,因而比其他技术更为容易。
1.演示性口;2验证性口;3.综合性回;4.设计性=i;5.研究性
12实验类型
口。
13实验者层次本科生
高速冷冻离心机(2台),可调式微量移液器(16套),凝胶成像
系统(1台),超净工作台(8台),酸度计(2台),可见光透
14实验仪器设备
射仪(8台),PCR仪(2台),核酸电泳系统(16套),全温摇
床(2台),全温培养箱(2台)
15实验套数16
16开出时间200603
17教学单位名称生命科学学院
18教学单位编号1113
19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心
20实验中心编号111301
21实验地名称现代生物学基础实验室
22实验地编号唐敖庆楼C区445
胰酶(luL),电穿孔缓冲液(5ml),10%FBS组织培养基(25ml),
23一次性材料品名筛选培养基(25mL),10070003蓝吸头(96个),10-100
川黄吸头(96个),0.5-103白吸头(96个),0.2mlPCR管(96
个),1.5ml刻度离心管(96个),透气封口膜,(4个1
24一次性材料49.6元
25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班
26实验项目卡制定人林凤
27实验项目卡审核人周慧
分子生物学实验A(343006)实验项目卡9
No字段名填写内容
1课程名称分子生物学实验A
2课程编号343006
3实验项目名称聚合酶链式反应-单链构象多态性检测(PCR-SSCP)
4实验项目编号
5网络实验0
6每组人数2
7计划学时数16
8实验性质W
学习从细胞或组织的总RNA中用RT-PCR扩增目的基因的技术及
9实验目的
操作。
以总RNA为模板进行PCR扩增,将PCR扩增出特异性好的产物,
10实验内容
仕聚内烯酰胺凝胶上进行电泳,染色后观祭电泳结果。
PCR扩增后的DNA片段经变性成单链DNA,单链DNA在中性聚内
烯酰胺凝胶中电泳时形成不同的立体构象,其构象直接影响泳动速
11实验原理率相同长度的DNA单链其核甘酸顺序仅有单个碱基的差别,就可
以产生立体构象的不同,造成泳动速率的不同,产生不同的泳动
-'Hr4h-'o
1.演示性口;2.3就正性口;3.综合性回;4.设计性二i;5.
12实验类型
研究性口。
13实验者层次本科生
全温培养箱(2台),局温灭国锅(2台),怛温水浴箱(2台),
鼓风干燥箱(2台),微波炉(2台),电子大平(2台),漩涡混
14实验仪器设备
合器(2台),磁力搅拌器(2台),型冰箱(2台),通用型电
泳仪(2台1
15实验套数16
16开出时间200603
17教学单位名称生命科学学院
18教学单位编号1113
19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心
20实验中心编号111301
21实验地名称国家级生物实验教学小氾中心
22实验地编号唐敖庆楼C445
甲酰胺(Iml)z甘油(1ml),甲醛(2.5ml),水饱和的漠酚蓝
(0.05ml),过硫酸镀(1g),TEMED(0.5ml),100-1000
23一次性材料品名
3蓝吸头(96个),10T003黄吸头(96个),0.570阳吸
头(96个),0.2mlPCR®(96个'
24一次性材料48.3元
25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班
26实验项目卡制定人崔银秋、林凤
27实验项目卡审核人崔银秋
分子生物学实验A(343006)实验项目卡10
No字段名填写内容
1课程名称分子生物学实验A
2课程编号343006
3实验项目名称PLPR启动子表达载体表达目的基因
4实验项目编号
5网络实验0
6每组人数2
7计划学时数20
8实验性质W
掌握将目的基因插入到PLPR启动子表达载体中表达完整目的蛋白
9实验目的
的技术路线和实验流程。
将IL基因以5'端EcoRI和3'端BamHI酶切位点插入pBV220载
体多克隆位点中,转化到大肠杆菌JMI03内,便能通过温度的变
10实睑内容换控制CI蛋白的活性,继而调节启动子的活性,使IL基因连同其
5'端上游带SD序列转录成mRNA并转录终止于rrnB位点。
PLPR启动子是大肠杆菌]噬菌体中控制早期转录的启动子,具有
极强的起始RNA转录的功能,受抑制物CI蛋白的负调控。CI在
11实验原理30℃时具有抑制启动子的活性,在42℃时失沽而失去抑制启动子
的活性,因此,改变工程菌的培养温度即可控制目的基因的表达。
1.演示性口;2.3钻正性口;3.综合性回4设计性口乃.研究
12实验类型
性口。
13实验者层次本科生
全温培养箱(2台)।局温火国锅(2台),恒温水浴箱(2台),
14实验仪器设备鼓风干燥箱(2台),微波炉(2台),电子大平(2台),漩涡
混合器(2台),磁力搅拌器(2台),型冰箱(2台),通用型电
泳仪(2台X
15实验套数20
16开出时间200603
17教学单位名称生命科学学院
18教学单位编号1113
19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心
20实验中心编号111301
21实验地名称现代生
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