分子生物学实验A343006实验教学大纲

分子生物学实验A（343006）实验教学大纲

01.教学单位名称：生命科学学院

02.实验中心名称：吉林大学国家级生物实验教学示范中心

03.课程名称：分子生物学实验A

04.课程代码：343006

05.课程类别：学科基础课

06.课程性质:必修

07・课程学时：64

08.课程学分：2

09.面向专业：生物科学、生物技术、理科实验班

10.实验课程的教学任免.要求和教学目的

10.1教学任尧：

是让学生运用已学过的知识验证一些结论、结果和现象，及综合运用已学过的理论知

识设计实验或进行综合性的实验，巩固和加深对分子生物学课程中基本理论知识的理解，

使学生对分子生物学方法的应用和意义有具体而全面的理解，训练学生理论知识的运用能

力、实验操作技能'仪器仪表的使用能力、实验数据的处理和分析能力。

10.2教学要求：

要求学生在实验前认真听教师讲解,认真预习，掌握实验的基本原理、主要操作步骤和

注意事项。实验中操作正确，观察细致，记录认真，能及时发现、分析和解决实验中出现

的问题。正确书写实验报告，并对实验结果进行分析讨论，从而将理论与实际联系起来，

全面提高学生的综合素质。

10.3教学目的：

通过本课程的教学，使学生掌握现代分子生物学研究的基本知识、理论、方法、技术

和技能。通过质粒载体与目的基因双酶切，琼脂糖凝胶电泳、琼脂糖凝胶回收，质粒载体与

目的基因的连接，感受态细胞的CaCI2法制备，重组DNA的转化，重组子的筛选和质粒

DNA的抽提以及PCR法鉴定阳性克隆等实验过程，使学生掌握基因工程的核心内容、基本

过程与实验技术，训练并培养学生的实际动手能力及发现、分析和解决问题的能力。利用

分子生物学实验理论、技术与方法（含查资料获得的新知识），自己独立设计实验方案并

完成填报设计实验申请书的全过程，培养学生查阅文献、手册、工具书和其它信息源的能

力及各种文献整理的能力。从而促进学生对生命科学探索的兴趣和爰好、创新思维和科研

素养的培养及综合素质的提高，为今后的毕业论文设计和从事专业相关领域工作奠定良好

的基础。

11.学生应掌握的实验技术及实验能力

11.1掌握DNA双酶切'连接，琼脂糖凝胶电泳'琼脂糖凝胶回收、CaCb法制备感受

态细胞、重组DNA的转化和质粒抽提以及PCR法鉴定阳性克隆等实验技术和方法；

11.2掌握核酸芯片设计与制作'微阵列芯片检测与数据分析等实验技术与方法；

113DNA和RNA提取技术；PGR-RFLP法鉴定基因型技术；Southern印记杂交技

术；动物转基因技术的实验原理；核酸探针制备技术。

12.开设实验项目

重组人白介素78（「hIL-18）基因工程菌的构建。主要内容包括：限制性内切酶EcoR

I和PstI双酶切pUC18质粒和IL78目的基因，琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶回收两个

基因片段，在T4-DNAIigase作用下将两个回收片段连接，获得重组pUC18-IL-18;

CaCI2法制备E.coliJM109感受态细胞，转化pUC18-IL78,用PCR法鉴定重组阳

性克隆。

头发中抽提DNA并用PCR-RFLP法鉴定CYP2C9基因型。主要内容包括：从头发中

抽提DNA,并用PCR扩增目的DNA片段，电泳检测后，进行限制性内切酶酶切，检测酶切

位点，用PCR-RFLP法鉴定CYP2C9基因型。

蛋白质印迹分析。主要内容包括：主要内容包括：将目的蛋白进行SDS电泳，

目的蛋白质转移到纤维素膜上，考马斯亮蓝染色后观察'染色结果分析。

DNA探针的制备和标记。主要内容包括：利用大肠杆菌DNA聚合酶的3,外切核酸酶

活性从5,末端切除核酸，同时在DNA聚合酶的5,聚合酶活性的催化下将dNTP添加到切

口的3,末端，5,末端核苜酸的去除与3,末端核苜酸的加人同时进行，导致切口随着DNA

链移动由具有荧光素标记的核苜酸置换了原来的核首酸，可合成具有荧光素标记的DNA探

针。

Southern印迹法。主要内容包括：将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记

的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过

Southern杂交判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。

RNA的Northern杂交。主要内容包括：RNA分离；将RNA固定到支持物上；固相

RNA与探针分子杂交；对特异结合的探针分子的图像进行检测、捕获和分析。

真核生物cDNA文库的构衡口分析。主要内容包括以生物细胞的总mRNA为模板，用

逆转录酶合成互补的双链cDNA，然后接到载体上，转入到宿主后建立的基因文库就是

cDNA文库。

电穿孔法转染哺乳动物细胞。主要内容包括：将盛有细胞和DNA混合液的特制小容器

置于电泳冲仪的正负电极之间，在0℃下加高压(2.0~4.0kV)电脉冲10分钟后，将处理

的细胞转移到新鲜培养基中生长2天，再行筛选。

聚合酶链式反应-单链构象多态性检测(PCR-SSCPI主要内容包括：以总RNA为模板

进行PCR扩增，将PCR扩增出特异性好的产物，在聚丙熔酰胺凝胶上进行电泳*染色后观

察电泳结果。

'PLPR启击*表达载薪表达目的基因。主要内容包括：将IL基因以5,端EcoRI和3,

端BamHI酶切位点插入pBV220载体多克隆位点中，转化到大肠杆菌JMI09内，便能通过

温度的变换控制CI蛋白的活性，继而调节启动子的活性，使IL基因连同其5,端上游带

SD序列转录成mRNA并转录终止于rmB位点。

微生物基因组学分析。主要内容包括：在核酸芯片上固定不同细菌的探针，通过PCR

扩增待测细菌的特定基因，并对PCR产物进行荧光标记，标记后的PCR产物与基因芯片进

行杂交用微阵列芯片CCD扫描仪对基因芯片进行扫描和数据分析，明确芯片上检测出的基

因，进而推测出待测细菌类型。

荧光定量PCR法鉴定CYP2c9基因型。主要内容包括：从口腔抽提DNA并进行检测

并用采用PCR法扩增CYP2c9DNA片段甩泳检测后，最后采用Real-timePCR法进行突

变位点的检测，鉴定CYP2C9基因型。

荧光定量PCR检测液体发酵杂菌污染。主要内容包括：对微生物进行液体发酵培养，

取发酵液并对微(生物进行分离。提取微生物DNA并进行荧光定量PCR。根据反应曲线判定

染菌程度。

琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段。主要内容包括：配制琼脂糖凝胶，利用水平电泳对不

同分子量DNA片段进行分离。

PCR扩增目的DNA片段。主要内容包括：PCR使用技术。

蓝白斑筛选。主要内容包括：将含有重组DNA的大肠杆菌的涂布与培养、重组克隆的

筛选，重组率的计算。

感受态细胞的制备。主要内容包括：大肠杆菌液体培养与化学处理。

设计实验。主要内容包括：人胰岛素基因在大肠杆菌中的克隆表达；采用重鎏延伸PCR

获得植物密码子优化的霍乱弧菌CTB基因；霍乱弧菌CTB基因一人胰岛素融合基因植物

表达载体的构建及其转化；按植物偏爰空码子合成降钙素基因及重组表达载体的构建；中

国人群CYP2E1基因的主要多态性类别与抗结核药物代谢的关系;毕赤酵母的cDNA文库的

构建及分析；重组人胸腺肽al在大肠杆菌中的表达；SRAS膜蛋白基因工程菌的构建及表

达;用毕赤酵母表达人铜、锌SOD。

开设实验项目一览表

每组人首次开出

实蛤项目名称实验类型实验性质实验学时

实验项目编号数年月

重组人白介素

-18(rhlL-18)基因_|_综合性必做422200803

程

头发中抽提DNA并用

PCR-RFLP法鉴定综合性202200403

CYP2C9基因型

蛋白质印迹分析综合性42200603

DNA探针的制备和标记

综合性162200403

Southern印迹法综合性腼162200403

RNA的Northern杂

综合性腼162200603

交

真核生物cDNA文库的构

综合性202200603

建和分析

电穿孔法转染哺乳动物细

综合性162200603

胞

聚合酶链式反应-单链构

象多态性检测综合性162200603

(PCR-SSCP)

PLPR启动子表达载体

综合性202200603

表达目的基因

微生物基因组学分析综合性162200703

荧光定量PCR法鉴定

综合性162201409

CYP2C9基因型

荧光定量PCR检测液

综合性162201409

体发酵杂菌污染

琼脂糖凝胶电泳分离

验证性41200903

DNA片段

验证性腼41200903

PCR扩增目的DNA片段

蓝白斑筛选验证性41200903

感受态细胞的制备验证性41200903

设计实验必做21200603

13.实验教材或指导书或主要参考资料

1）滕利荣等，生物学基础实验教程口（第三版），科学出版社，2008年。

2）周俊宜等，分子生物学基本技能与策略，科学出版社，2003年；

3）魏群主编，分子生物学实验指导，高等教育出版社，1999年；

4）J.萨姆布鲁克，分子克隆实验指南，科学出版社，2005年；

5）郝福英等，分子生物学实验技术，北京大学出版社，2003年；

6）梁国栋主编，最新分子生物学实验技术，科学出版社，2007年。

14.考核要求,考核方式及成绩评定标准

14.1考核要求：以培养学生的科学态度、科学思维和实验操作能力为前提，注重训

练学生的独立动手能力'思考能力，发现问题、分析问题和解决问题的能力，实验设计能

力及创新能力，教师应及时、客观、公正、如实评价每名学生实验情况及评阅试卷、实验

报告和设计实验。

14.2考核方式：采取考核与考试相结合的方式综合评定实验成绩，按百分制方式计

分。

14.3成绩评定标准：根据生物基础实验教学中心制定的《学生实验成绩考评方法》

进行评定。实验习惯成绩，10%;预习考试成绩"0%;实验操作成绩，40%;实验报告成

绩，20%;设计实验成绩，20%„

15.执笔人

崔银秋教授

林凤教授

姜大志副教授

汤海峰工程师

16.制定日期

17.宙核人

周慧教授

崔银秋教授

18.宙核日期

19.学院宙定程序说明

2013年10月1。日接到学校通知后成立《生命科学学院实践教学大纲（2013版）》

修订专项工作组并进行前期筹备工作。2013年10月14日至2013年10月16日各门课

程梯队召开《生命科学学院实践教学大纲（2013版）》修订工作会议，分配修订任务。

2013年10月21日前各门课程梯队提交《生命科学学院实践教学大纲（2013版）》修订

稿。2013年10月25日生命科学学院教学委员会召开第一次会议审议《生命科学学院实

践教学大纲（2013版）》修订稿并提出整改意见。2013年10月26日至10月28日各门

课程梯队按照〃整改意见”进行整改。2013年10月30日生命科学学院教学委员会召开

第二次会议审定通过《生命科学学院实践教学大纲（2013版大

20.学院审定日期

分子生物学实验A（343006）实验项目卡1

No字段名填写内容

1课程名称分子生物学实验A

2课程编号343006

3实睑项目名称重组人白介素78（rhlL-18）基因，程菌的构建

4实验项目编号

5网络实验1

6每组人数2

7计划学时数42

8实验性质必做

掌握利用T7噬菌体启动子的的表达系统构建基因工程菌的技术路

线和实验流程；双酶切、琼脂糖凝胶电泳'琼脂糖凝胶回收、CacL

9实验目的

法制备感受态细胞、重组DNA的转化以及PCR法鉴定阳性克隆等

实验方法和技能；

限制性内切酶EcoRI和PstI双酶切pUC18质粒和ILT8目的

基因，琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶回收两个基因片段，在T4-DNA

10实验内容Iigase作用下将两个回收片段连接，获得重组pUC18-IL-

18;CaCI2法制备£co//JM109感受态细胞，转化pUC18-IL-

18，用PCR法鉴定重组阳性克隆。

PCR是在模板DNA、弓I物和dNTPs的存在下依赖于DNA聚合酶

11实验原理的酶促反应；业克隆的基本过程：目的DNA片段和载体的制备'

目的DNA片段和载体的连接、连接产物的转化'重组子筛选。

1.演示性口；2验证性口；3.综合性回；4.设计性口；5.研究

12实验类型

性口。

13实睑者层次本科生

高速冷冻离心机（2台），可调式微量移液器（16套），凝胶成像

系统（1台），超净工作台（8台），电动助吸器（8台），可见

14实验仪器设备

光透射仪（8台），PCR仪（2台），核酸电泳系统（16套），全

温摇床（2台），全温培养箱（2台\

15实验套数16

16开出时间200803

17教学单位名称生命科学学院

18教学单位编号1113

19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心

20实验中心编号111301

21实验地名称现代生物学基础实验室

22实验地编号唐敖庆楼C区445

IPTG(0.01),X-gal(0.01g),氨芳青霉素(0.01g),pUC18

23一次性材料品名(10uL)fBgin(luL)zBamHI(luL)fPstl(luL)f

T4DNAIigase(0.7uIJ.SybrGreen(IuI)ztaq酶

24一次性材料125元

25而向专业生物科学、生物技术、理科实验班

26实验项目卡制定人崔银秋

27实验项目卡审核人周慧

分子生物学实验A(343006)实验项目卡2

No字段名填写内容

1课程名称分子生物学实验A

2课程编号343006

3实验项目名称头发中抽提DNA并用PCR-RFLP法鉴定CYP2c9基因型

4实验项目编号

5网络实验0

6每组人数2

7计划学时数20

8实验性质W

了解头发中抽提DNA并用PCR-RFLP法鉴定CYP2c9基因型的

9实验目的

实验原理；掌握头发中抽提DNA并用PCR-RFLP法鉴定CYP2c9

基因型的操作方法。

从头发中抽提DNA,并用PCR扩增目的DNA片段，电泳检测后，进

10实验内容

行限制性内切酶酶切，检测酶切位点，用PCR-RFLP法鉴定

CYP2c9基因型。

从毛囊中抽提全基因组DNA;PCR反应；限制性片段长度多

11实验原理

态性分析(RFLP)

1.演示性口；2验证性口；3.综合性回；4.设计性=i;5.研究性

12实验类型

□o

13实验者层次本科生

高速冷冻离心机（2台），可调式微量移液器（16套），凝胶成像

系统（1台），超净工作台（8台），酸度计（2台），可见光透

14实验仪器设备

射仪（8台），PCR仪（2台），核酸电泳系统（16套），全温摇

床（2台），全温培养箱（2台工

15实验套数16

16开出时间200403

17教学单位名称生命科学学院

18教学单位编号1113

19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心

20实验中心编号111301

21实验地名称现代生物学基础实验室

22实验地编号唐敖庆楼C区445

琼脂糖（1g），蛋白腺2.5g）TaqS§（10uL）,无水乙醺

10ml）,CHELEX700树脂（2.5g），记号笔（1支），脱脂棉球

23一次性材料品名

（10g）,100-10003蓝吸头（96个）107003黄吸头（96

个），0.5703白吸头（96个工

24一次性材料29.7元

25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班

26实验项目卡制定人崔银秋

27实验项目卡审核人周慧

分子生物学实验A（343006）实验项目卡3

No字段名填写内容

1课程名称分子生物学实验A

2课程编号343006

3实验项目名称蛋白质印迹分析

4实验项目编号

5网络实验0

6每组人数2

7计划学时数4

8实验性质W

应用Westernblot分析技术,分析SDS电泳分离后并转移

9实验目的

到硝酸纤维素建膜卜的基因丁程产物的成分。

将目的蛋白进行SDS电泳，然后将凝胶上的蛋白质通过电转

10实验内容移,转移到纤维素膜上，考马斯壳蓝染色后观察、分析染色结果。

将蛋白质样品转移到固相载体上以固相载体上的蛋白质或多肽作

为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗

11实验原理

体起反应度过底物显色或放射自显影以检查电泳分离的特异性目

的基因表达的蛋白成分。

1.演示性口；2.3就正性口；3.综合性回；4.设计性工；5.

12实验类型

研究性口。

13实验者层次本科生

高速冷冻离心机（2台），可调式微量移液器（16套），凝胶成像

系统（1台），超净工作台（8台），酸度计（2台），可见光透

14实验仪器设备

射仪（8台），PCR仪（2台），核酸电泳系统（16套），全温摇

床（2台），全温培养箱（2台工

15实验套数16

16开出时间200603

17教学单位名称生命科学学院

18教学单位编号1113

19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心

20实验中心编号111301

21实验地名称现代生物学基础实验室

22实验地编号唐敖庆楼C区445

硝酸纤维素膜20cmX20cm（1张），抗人a干扰素（0.OSmg）,

第一抗体（0.05mg）,酶标第二抗体（0.05mg）,0.5%氨基

23一次性材料品名黑染液（25mL）,0.2mlPGR®（96个），脱脂棉（10g）,

100-10003蓝吸头（96个）,10-100川黄吸头（96个）,0.5

-103白吸头（96个工

24一次性材料49.2元

25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班

26实验项目卡制定人崔银秋

27实验项目卡审核人周慧

分子生物学实验A（343006）实验项目卡4

No字段名填写内容

1课程名称分子生物学实验A

2课程编号343006

3实验项目名称DNA探针的制备和标记

4实验项目编号

5网络实验0

6每组人数2

7计划学时数16

8实验性质W

制备可用于序列分析，Southernblot和NouthemBlot等的核

9实验目的

酸探针。

利用大肠杆国DNA聚合酶的3'外切核酸酶活性从5'末端切除核

酸,同时在DNA聚合酶的5,聚合酶活性的催化下将dNTP添加到切

口的3'末端，5'末端核甘酸的去除与3'末端核甘酸的加入同时

10实验内容

进行,导致切口随着DNA链移动由具有荧光素标记的核苜酸置换了

原来的核苜酸，可合成具有荧光素标记的DNA探针。

探针是一种分子。带有供反应后检测用的合适标记物，并仅与特异

11实验原理

靶分子反应；该实验采用切口平移法。

1.演示性口；2.3钻正性口；3.综合性回4设计性口乃.研究

12实验类型

性口。

13实验者层次本科生

高速冷冻离心机（2台），可调式微量移液器（16套），凝胶成像

系统（1台），超净工作台（8台），酸度计（2台），可见光透

14实验仪器设备

射仪（8台），PCR仪（2台），核酸电泳系统（16套），全温摇

床（2台），全温培养箱（2台，

15实验套数16

16开出时间200403

17教学单位名称生命科学学院

18教学单位编号1113

19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心

20实验中心编号111301

21实验地名称现代生物学基础实验室

22实验地编号唐敖庆楼C区445

SephadexG-50葡聚糖凝胶柱（1支），琼脂糖（1g）,无水乙

醇（10mL）,大肠杆围DNA聚合酶（luL），胰DNA醐luL）,

23一次性材料品名

牛血清日雷日V（0.2g）,DTT（0.2g）,0.2mlPCR管（96

个），1.5ml刻度离心管（96个），0.5-10pl白吸头（96个

24一次性材料43.6元

25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班

26实验项目卡制定人崔银秋

27实验项目卡审核人周慧

分子生物学实验A（343006）实验项目卡5

No字段名填写内容

1课程名称分子生物学实验A

2课程编号343005

3实验项目名称Southern印迹法

4实验项目编号

5网络实验0

6每组人数2

7计划学时数16

8实验性质W

学习并掌握Southern印记杂交技术；检验重组质粒中是否含有外

9实验目的

源DNA，并检测其分子量大小。

将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行

杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。

10实验内容

通过Southern杂交判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源

的片段以及该片段的长度。

具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下,按碱基互补原则形

11实验原理成双链，此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及

检测方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析结果，便

可绘制出DNA分干的限制图谱。

1.演示性口;2.3钻正性口；3.综合性回;4.设计性口乃.研究

12实睑类型

性口。

13实验者层次本科生

高速冷冻离心机（2台），可调式微量移液器（16套），凝胶成像

系统（1台），超净工作台（8台），酸度计（2台），可见光透

14实验仪器设备

射仪（8台），PCR仪（2台），核酸电泳系统（16套），全温摇

床（2台），全温培养箱（2台）

15实验套数16

16开出时间200403

17教学单位名称生命科学学院

18教学单位编号1113

19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心

20实验中心编号111301

21实验地名称现代生物学基础实验室

22实验地编号唐敖庆楼C区445

硝酸纤维素膜（1张）；32P-DNA探针，（0.25mg），记号笔（1

支）；脱月箭帛（10g）,10070003蓝吸头（96个），10-

23一次性材料品名

100川黄吸头（96个），0.5-103白吸头（96个），0.2mlPCR

管（96个），1.5ml刻度离心管（96个），PE手套（10只）

24一次性材料50.1元

25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班

26实验项目卡制定人林凤

27实验项目卡审核人周慧

分子生物学实验A（343006）实验项目卡6

No字段名填写内容

1课程名称分子生物学实验A

2课程编号343006

3实验项目名称RNA的Northern杂交

4实验项目编号

5网络实验0

6每组人数2

7计划学时数16

8实验性质W

学习用标记探针杂父分析RNA样品中特定的mRNA的大小及壬

9实验目的

度。

用来测量真核生物RNA的量和大小估计其峰度的实验方法，可

以从大量的RNA样本同时获得这些信息。基本内容包括：RNA分

10实验内容

离;将RNA固定到支持物上；固相RNA与探针分子杂交；对特异

结合的探针分子的图像进行检测、捕获和分析。

Northern杂交是将RNA分子在变性琼脂糖凝胶中相互分离后，

将RNA转移至硝酸纤维素滤膜上，用放射性标记的探针进行

11实验原理

DNA-RNA杂交，此法是研究RNA（特别是mRNA）的主要方法之

可测量RNA的含量和大小。

1.演示性口；2.3钻正性口；3.综合性回;4.设计性口乃.研

12实睑类型

究性口。

13实验者层次本科生

高速冷冻离心机（2台），可调式微量移液器（16套），凝胶成像

系统（1台），超净工作台（8台），酸度计（2台），可见光透

14实验仪器设备

射仪（8台），PCR仪（2台），核酸电泳系统（16套），全温摇

床（2台），全温培养箱（2台）

15实验套数16

16开出时间200603

17教学单位名称生命科学学院

18教学单位编号1113

19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心

20实验中心编号111301

21实验地名称现代生物学基础实验室

22实验地编号唐敖庆楼C区445

硝酸纤维素膜（1张）；32P-DNA探针，（0.25mg），记号笔（1

支）；脱月箭帛（10g）,10070003蓝吸头（96个），10-

23一次性材料品名

100川黄吸头（96个），0.5-103白吸头（96个），0.2mlPCR

管（96个），1.5ml刻度离心管（96个），PE手套（10只）

24一次性材料43.5元

25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班

26实验项目卡制定人林凤

27实验项目卡审核人周慧

分子生物学实验A（343006）实验项目卡7

No字段名填写内容

1课程名称分子生物学实验A

2课程编号343006

3实验项目名称真核生物cDNA文库的构建和分析

4实验项目编号

5网络实验0

6每组人数2

7计划学时数20

8实验性质W

掌握将已制备的cDNA连接到构建乂库的人教体上;将有外源DNA

的重组入DNA在体外包装重组入噬菌体颗粒；将重组入噬菌体感

9实验目的

染宿主菌，得到由单个噬菌斑组合而成的cDNA义库；掌握对cDNA

乂库构建的评估方法。

以生物细胞的总mRNA为模板，用逆转录酶合成互补的双链cDNA,

然后接到载体上，转入到宿主后建立的基因文库就是cDNA义库。

10实验内容步骤包括：（1）mRNA的提取及其完整性的确定；（2）cDNA

的合成和克隆；（3）目的cDNA的鉴XE等步骤。

从真核生物的组织或细胞中提取的mRNA，在逆转录酶的作用卜，

在体外被反向转录合成单链DNAz称之为互补DNA（cDNA1以单

11实验原理链cDNA为模板，由DNA聚合酶I合成双1cDNA。将双链cDNA

和载体连接，然后转化扩增，即可莪得cDNA义电

1.演示性口；2.3就正性口；3.综合性回；4.设计性n;5.研究

12实验类型

性口。

13实验者层次本科生

局速冷冻渴心机（2台），可调式微量移液器（16套），凝胶成像

系统（1台），超净工作台（8台），酸度计（2台），可见光透

14实验仪器设备

射仪（8台），PCR仪（2台），核酸电泳系统（16套），全温摇

床（2台），全温培养箱（2台）

15实验套数16

16开出时间200603

17教学单位名称生命科学学院

18教学单位编号1113

19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心

20实验中心编号111301

21实验地名称现代生物学基础实验室

22实验地编号唐敖庆楼C区445

IPTG(0.1g),X-gal(0.1g),氨茉青霉素(0.1g),T4

DNAIigase(0.7uL),sybrGreen

23一次性材料品名

(luL)fTaqg§(10uL),PCR引物对(2uL),DNAMarker

(IOpI),琼脂糖凝胶回收试剂盒(2次)，普通质粒小提试剂盒(1

24一次性材料47.2元

25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班

26实验项目卡制定人林凤

27实验项目卡审核人周慧

分子生物学实验A(343006)实验项目卡8

No字段名填写内容

1课程名称分子生物学实验A

2课程编号343006

3实验项目名称电穿孔法转染哺乳动物细胞

4实验项目编号

5网络实验0

6每组人数2

7计划学时数16

8实验性质

9实验目的了解电穿孔法转染的基本原理及影响因素。

将盛有细胞和DNA混合液的特制小容器置于电泳冲仪的正负电极

10实验内容之间，在0℃下加高压(2.0~4.0kV)电脉冲10分钟后,将处理

的细胞转移到新鲜培养基中生长2天，再行筛选。

电穿孔法应用高压电击短暂或稳定地将DNA导入细胞，它适用于

11实验原理多数类型的细胞,既可产生高频率的稳定转染，又可产生短暂的基

因表达，并且由于其所需步骤少，因而比其他技术更为容易。

1.演示性口；2验证性口；3.综合性回；4.设计性=i;5.研究性

12实验类型

口。

13实验者层次本科生

高速冷冻离心机（2台），可调式微量移液器（16套），凝胶成像

系统（1台），超净工作台（8台），酸度计（2台），可见光透

14实验仪器设备

射仪（8台），PCR仪（2台），核酸电泳系统（16套），全温摇

床（2台），全温培养箱（2台）

15实验套数16

16开出时间200603

17教学单位名称生命科学学院

18教学单位编号1113

19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心

20实验中心编号111301

21实验地名称现代生物学基础实验室

22实验地编号唐敖庆楼C区445

胰酶（luL）,电穿孔缓冲液（5ml）,10%FBS组织培养基（25ml）,

23一次性材料品名筛选培养基（25mL）,10070003蓝吸头（96个），10-100

川黄吸头（96个）,0.5-103白吸头（96个），0.2mlPCR管（96

个），1.5ml刻度离心管（96个），透气封口膜，（4个1

24一次性材料49.6元

25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班

26实验项目卡制定人林凤

27实验项目卡审核人周慧

分子生物学实验A（343006）实验项目卡9

No字段名填写内容

1课程名称分子生物学实验A

2课程编号343006

3实验项目名称聚合酶链式反应-单链构象多态性检测（PCR-SSCP）

4实验项目编号

5网络实验0

6每组人数2

7计划学时数16

8实验性质W

学习从细胞或组织的总RNA中用RT-PCR扩增目的基因的技术及

9实验目的

操作。

以总RNA为模板进行PCR扩增，将PCR扩增出特异性好的产物，

10实验内容

仕聚内烯酰胺凝胶上进行电泳，染色后观祭电泳结果。

PCR扩增后的DNA片段经变性成单链DNA，单链DNA在中性聚内

烯酰胺凝胶中电泳时形成不同的立体构象，其构象直接影响泳动速

11实验原理率相同长度的DNA单链其核甘酸顺序仅有单个碱基的差别，就可

以产生立体构象的不同，造成泳动速率的不同，产生不同的泳动

-'Hr4h-'o

1.演示性口；2.3就正性口；3.综合性回；4.设计性二i;5.

12实验类型

研究性口。

13实验者层次本科生

全温培养箱（2台），局温灭国锅（2台），怛温水浴箱（2台），

鼓风干燥箱（2台），微波炉（2台），电子大平（2台），漩涡混

14实验仪器设备

合器（2台），磁力搅拌器（2台），型冰箱（2台），通用型电

泳仪（2台1

15实验套数16

16开出时间200603

17教学单位名称生命科学学院

18教学单位编号1113

19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心

20实验中心编号111301

21实验地名称国家级生物实验教学小氾中心

22实验地编号唐敖庆楼C445

甲酰胺（Iml）z甘油（1ml）,甲醛（2.5ml），水饱和的漠酚蓝

（0.05ml）,过硫酸镀（1g）,TEMED（0.5ml）,100-1000

23一次性材料品名

3蓝吸头（96个），10T003黄吸头（96个），0.570阳吸

头（96个），0.2mlPCR®（96个'

24一次性材料48.3元

25面向专业生物科学、生物技术、理科实验班

26实验项目卡制定人崔银秋、林凤

27实验项目卡审核人崔银秋

分子生物学实验A（343006）实验项目卡10

No字段名填写内容

1课程名称分子生物学实验A

2课程编号343006

3实验项目名称PLPR启动子表达载体表达目的基因

4实验项目编号

5网络实验0

6每组人数2

7计划学时数20

8实验性质W

掌握将目的基因插入到PLPR启动子表达载体中表达完整目的蛋白

9实验目的

的技术路线和实验流程。

将IL基因以5'端EcoRI和3'端BamHI酶切位点插入pBV220载

体多克隆位点中，转化到大肠杆菌JMI03内，便能通过温度的变

10实睑内容换控制CI蛋白的活性，继而调节启动子的活性，使IL基因连同其

5'端上游带SD序列转录成mRNA并转录终止于rrnB位点。

PLPR启动子是大肠杆菌］噬菌体中控制早期转录的启动子，具有

极强的起始RNA转录的功能，受抑制物CI蛋白的负调控。CI在

11实验原理30℃时具有抑制启动子的活性,在42℃时失沽而失去抑制启动子

的活性，因此，改变工程菌的培养温度即可控制目的基因的表达。

1.演示性口；2.3钻正性口；3.综合性回4设计性口乃.研究

12实验类型

性口。

13实验者层次本科生

全温培养箱（2台）।局温火国锅（2台），恒温水浴箱（2台），

14实验仪器设备鼓风干燥箱（2台），微波炉（2台），电子大平（2台），漩涡

混合器（2台），磁力搅拌器（2台），型冰箱（2台），通用型电

泳仪（2台X

15实验套数20

16开出时间200603

17教学单位名称生命科学学院

18教学单位编号1113

19实验单位名称吉林大学国家级生物实验教学小范中心

20实验中心编号111301

21实验地名称现代生