OLC1在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

OLC1在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义目的检测OLC1在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测48例喉鳞状细胞癌组织中OLC1的表达情况，并分析OLC1与喉鳞状细胞癌临床病理特征及预后的关系。结果OLC1在喉鳞状细胞癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织。OLC1蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、肿瘤分型无关，而与组织学分级、淋巴结转移、临床分期正相关。结论OLC1高表达可能与喉鳞状细胞癌发展的恶性进程有关，提示喉鳞状细胞癌患者预后不良。标签：喉鳞状细胞癌；OLC1；临床意义喉鳞状细胞癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，近年来流行病学资料显示喉鳞状细胞癌的发病率在我国呈上升趋势，患者发病年龄呈年轻化趋势。虽然外科手术治疗及术后化疗使病人的术后生存率有了较大提高，然而总体预后仍不容乐观。喉鳞状细胞癌具有高侵袭性，其发生、发展是一个多基因多阶段的演进过程。OLC1（overexpressedinlungcancer）基因是我国学者在肺癌组织中通过高发量实验筛选出的一个肺癌相关新基因，研究发现OLC1具有癌基因的属性，参与肿瘤的发生发展。本研究采用免疫组织化学方法检测OLC1蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达，探讨OLC1在喉癌鳞状细胞发生、发展中的作用及临床意义。1资料与方法1.1临床病例选取赣南医学院第一附属医院2011年1月～2013年12月间行喉鳞状细胞癌根治术且随访资料完整的48例病例，术前均未进行放、化疗及免疫治疗，且术后均在本院根据NCCN指南进行放疗。其生存期从手术之日起开始计算，终止日期为死亡期或末次随访日期2014年12月15日。男43例、女5例、年龄46～75岁、淋巴结转移19例、无淋巴结转移29例。48例喉鳞状细胞癌组织中组织学分级：高分化例9，中分化31例，低分化8例。根据国际抗癌协会TNM分期方案分为Ⅰ期10例、Ⅱ期8例、Ⅲ期20例、Ⅳ期8例。另外随机选取远离肿瘤（﹥1cm）的肿瘤旁正常组织（镜下无癌）20例作对照组。1.2方法1.2.1检测方法所有患者的手术标本离体后迅速投入10%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4μm连续切片，分别行HE染色及免疫组化染色。所有病例均由两位病理医师确诊。主要试剂OLC1兔抗人多克隆抗体，稀释比例为1：2000，武汉三鹰生物技术有限公司；采用免疫组织化学法，实验步骤严格按照实验说明书进行，每批实验均设对照组。1.2.2结果判定分别由2名高年资的病理科主治医师进行独立阅片，根据其评分的平均值采用VOLM双评分法进行判定。①按阳性细胞百分率评分：光镜10×20倍下，随机选择5个染色均匀视野，阳性细胞百分率≤25%为1分，阳性细胞百分率26%～50%为2分，阳性细胞百分率>50%为3分；②按染色强度评分：无显色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将上述两项得分相加：0～2分判为+，3～4分判为++，5～6分判为+++。++和+++为阳性表达，+为阴性表达。1.2.3统计学方法应用SPSS13.0统计软件，组间比较采用χ2检验，P≤0.05为差异有统计学意义。2结果2.1OLC1蛋白在喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织中的表达OLC1蛋白染色阳性定位于细胞浆，棕黄色粗颗粒状。OLC1蛋白在癌旁组织中呈阴性表达，在喉鳞状细胞癌组织呈阳性表达（图1），超过70%的喉鳞状细胞癌细胞有不同程度OLC1表达，40.8%的肿瘤呈中等程度表达，31%的肿瘤呈强阳性表达，见图1。2.2OLC1蛋白与喉鳞状细胞癌临床病理因素的关系OLC1蛋白在喉癌组织中的表达与淋巴结转移、临床分期、病理分级有关（P均<0.05），与临床分型、肿瘤大小、年龄和性别无关，见表1。3讨论OLC1基因是我国学者在肺癌组织中通过高通量实验筛选出的一个肺癌相关新基因。OLC1的全长cDNA长度为2383bp，其编码一条长度为360氨基酸的多肽，含有DUF292和Proline-rieh两个保守结构域。Yuan等研究发现OLC1基因在肺鳞状细胞癌中的表达量要显著高于正常肺泡上皮细胞，随后的研究发现OLC1不仅在肺鳞状细胞癌中过度表达，在肺腺癌及小细胞肺癌中也呈过度表达，而且在肺鳞状细胞癌发生的早期，OLC1的表达量就已经升高；稳定高表达OLC1的NIH/3T3细胞能在裸鼠皮下形成肿瘤，说明OLC1具有癌基因的属性；若沉默OLC1的表达能引起肺癌细胞系H520和H1299生长变缓，集落形成减少和细胞凋亡发生；通过构建OLC1稳定高/低表达的食管鳞癌细胞系，研究细胞表型的改变，发现OLC1过表达可以促进细胞增殖、抑制凋亡，而OLC1被敲除之后可得到相反的结果[1，2]。对OLC1的生物学功能进一步研究发现，OLC1能在报告基因水平激活肿瘤细胞中NF-kappaB通路。在人食管鳞癌细胞研究中发现，OLC1过表达可下调BRCA1的表达，从而引起其下游靶基因Bcl-2的活化，进而抑制凋亡蛋白酶Caspase-3的激活，最终抑制细胞凋亡的发生[3，4]。在乳腺癌与卵巢癌的研究中发现OLC1的过表达提示乳腺癌与卵巢癌患者预后不良[5，6]。但目前对于OLC1在喉鳞状细胞癌中的作用研究尚少。本研究发现OLC1在喉鳞状细胞癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织，有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者，Ⅲ～Ⅳ期者高于Ⅰ～Ⅱ期，低分化者高于高分化者和中分化者。提示在喉癌的发生发展过程中，OLC1可能起重要作用。随着OLC1蛋白表达的增强，喉鳞状细胞癌细胞侵袭性和转移能力明显增强，表明OLC1在喉鳞状细胞癌的发生、发展、恶性进展、侵袭转移中起重要作用，这可能与一些相关的抑癌基因作用被抑制，致癌通路的異常激活及肿瘤转移因子作用增强有关。总之，喉鳞状细胞癌组织中OLC1蛋白呈高表达，通过测定OLC1蛋白的表达量及研究其与临床病理特征之间的关系，可进一步深入了解相关调节机制有助于人们更好地了解喉鳞状细胞发生发展的分子机制，有望为其诊断、治疗技术的进一步发展奠定理论基础。图1OLC1在低分化喉鳞状细胞癌组织呈强阳性表达SP法参考文献：[1]YuanJ，MaJ，ZhengH，ShiT，etal.OverexpressionofOLC1，cigarettesmoke，andhumanlungtumorigenesis[J].JNatlCancerInst，2008，100（22）：1592-1605.[2]杨龙海，肖汀，谭金晶，等.OLC1蛋白在非小细胞肺癌患者外周血血浆中的水平及其临床意义[J].中华肿瘤杂志，2014，36（5）：362-365.[3]陈玮.OLC1的泛素化降解机制研究以及β-catenin在人食管鳞癌中的表达和预后分析[D].中国优秀硕士学位论文全文数据库，2011，（04）.[4]李潇.OLC1过表达对人食管鳞癌细胞的生物学作用及其分子机制研究[D].中国优秀硕士学位论文全文数据库，2008，（02）.[5]Ou-YangQH，DuanZX，JinZ，etal.OLC1isoverexpressedinbreastcanceranditsexpressioncorrelateswithpoorpatientsurvival[J].TumourBiol.2014，35（9）：8823-7.[6]Jiac，