医学遗传学课件：遗传病的诊断

遗传病的诊断

遗传病的诊断第一节症状和体征分析OMIM(OnlineMendelianInheritanceinMan)/omim/OMIM号临床特征、诊断、鉴别诊断、治疗与预防致病基因及其染色体定位、连锁关系、结构和功能、动物模型等资料，并附有参考文献。/entry/310200?search=310200&highlight=310200#310200MUSCULARDYSTROPHY,DUCHENNETYPE;DMD第二节系谱分析第三节染色体检查显带技术、荧光原位杂交染色体检查的指征第四节生化检测分子病、先天性代谢缺陷第五节基因诊断(genediagnosis)

利用分子生物学技术，检测体内DNA或RNA在结构或表达水平上的变化，从而对疾病做出诊断。一、基因诊断的策略（一）DNA水平的诊断（1）直接诊断（2）间接诊断连锁分析遗传标记STR、SNP

例肝豆状核变性AR示图16-2从D13S314、D13S313位点结果推断胎儿正常（二）基因产物水平的诊断

mRNA或蛋白质二、基因诊断的技术（一）核酸分子杂交点杂交DNA印记杂交示图16-3①限制酶酶切DNA②电泳分离③碱变性④Southern印迹转移⑤与标记探针杂交⑥放射自显影（二）聚合酶链式反应（PCR）PCR、实时荧光定量PCR（三）DNA芯片技术大规模集成的固相杂交多种探针固定于芯片（四）荧光原位杂交(FISH)（五）比较基因组杂交患者和正常人基因组DNA探针两重荧光强度比值（六）多重探针连接扩增（MLPA）多重探针杂交、连接及PCR扩增（七）单链构象多态性（SSCP）纯合型正常2条带与纯合型突变2条带位置不同，杂合型突变有4条带。图变性高效液相色谱（DHPLC）杂合型突变的扩增产物变性再复性，形成2种异源杂合双链和2种同源纯合双链，2种异源杂合双链（部分错误配对）较2种同源纯合双链（全部正确配对）更容易变性，先从色谱柱上被洗脱，故呈现早些4个单链峰和晚些4个单链峰。纯合型正常2个单链峰与纯合型突变2个单链峰不同。高分辨率溶解曲线HRM杂合型突变的扩增产物变性再复性，形成2种异源杂合双链和2种同源纯合双链，4种分子复性速度不同。（八）DNA测序第一代测序双脱氧测序法第二代测序高通量基因组测序第三代测序单分子实时测序（九）甲基化检测甲基化特异性PCR(MSP)、亚硫酸氢钠处理后测序（BSP）（十）反转录PCR(RT-PCR)和Northern印迹杂交三、基因诊断的实例（一）杜氏肌营养不良(DMD)XRDMD基因79个外显子60%大片段缺失或重复，其余小片段结构异常或点突变缺失型：多重PCR图然后Gap-PCRMLPA针对每个外显子设计探针，同时进行检测。其余型：PCR扩增外显子后测序RT-PCR单体型连锁分析图（二）镰状细胞贫血GAG→GTG示图16-8PCR-RFLP，即先PCR再MstII酶切扩增片段。也可不经PCR直接MstII酶切全基因组，用βA、βS探针，行Southern印记杂交。PCR-ASO示图16-9（三）β654地中海贫血突变在内含子中增加剪接位点从而增加一个外显子RT-PCR（四）血友病AXRFVⅢ基因主要点突变或小片段碱基的缺失和插入，基因突变位点多。PCR-RFLP连锁分析例BclI示图16-11产前诊断女胎是携带者（五）脆性X综合征FMR1基因（CGG）nn正常5-50，前突变59-200（未甲基化），全突变200-1000（甲基化）示图16-12双酶切（EcoRI和甲基化敏感酶EagI）Southern印迹杂交四、遗传病诊断的时机临床诊断早期诊断（症状前诊断、产前诊断、着床前诊断）五