《柑橘衰退病毒基因型鉴定技术规程》编制说明

2/4《柑橘衰退病毒基因型鉴定技术规程》地方标准（草案）编制说明一、编制本标准的任务来源江西省是我国重要的柑橘产区，有着赣南脐橙、南丰蜜橘、井冈蜜柚等众多特色柑橘品种，种植规模宏大，但这些柑橘产区均受到柑橘衰退病毒（Citrustristezavirus，CTV）不同程度的危害且有加剧趋势，严重影响我省柑橘产业的健康发展。根据国家脐橙工程技术研究中心近年来对全国柑橘主产区的随机采样检测，发现CTV的平均检出率为51.75%，表明CTV在我国柑橘主产区分布极为普遍，田间CTV以VT、RB、T3、T30、T36、T68等不同基因型的代表分离物构成为主，且以多基因型混合侵染，不同基因型引起不同的病害症状，如VT引起茎陷点型，T36引起苗黄型症状。CTV是一种RNA病毒，存在复杂的株系分化，田间主要通过接穗和蚜虫进行传播，当前大田柑橘衰退病最有效和可行的保护措施是弱毒株系交叉保护技术，由于柑橘植株感染CTV并不是单一基因型，一般以2种或2种以上基因型混合侵染，因此急需建立CTV基因型鉴定技术标准，针对性的开展CTV基因型检测鉴定，明确田间CTV基因型类型及分离物构成情况，筛选具有针对特定基因型的弱毒株系和开展交叉保护技术应用，为生产上柑橘衰退病的防控提供技术支持。为了规范柑橘衰退病毒基因型鉴定技术，按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写》有关规定，由江西省农业农村厅提出，国家脐橙工程技术研究中心制订了本规程。本规程的鉴定技术经国家脐橙工程技术研究中心在江西多地柑橘产区果园反复验证，结果准确可靠，为生产上高效准确鉴定CTV基因型，明确病原与病害关系和病害防控提供了技术支持。2023年6月由江西省农业农村厅提出立项建议。二、标准编制概况（一）基本情况1.本标准由江西省农业农村厅提出。2.本标准起草单位：赣南师范大学国家脐橙工程技术研究中心。3.本标准主要起草人：易龙、李双花、周俊、姚锋先、黄爱军、余海中。4.本标准编写格式依据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》。（二）标准的编制过程《柑橘衰退病毒基因型鉴定技术规程》地方标准的制定过程经历了以下阶段：2022年7月至2023年5月，成立标准工作小组，编制工作计划，开展标准起草工作，通过实地调研、资料收集、起草小组多次讨论研究，形成了标准草稿，并申请立项；2023年6月5日，江西省农业农村厅提出立项建议；2023年7月31日，标准工作小组参与了该标准的立项答辩工作；2023年8月至2023年10月，开展进一步试验研究，完成标准讨论稿后，在标准工作小组内部进行讨论修改形成标准征求意见稿；2023年10月-11月，征求意见，标准工作小组根据意见和建议修改完善标准。（三）主要技术依据说明柑橘衰退病毒基因型鉴定技术目前尚无相应的国家、地方标准或技术规程对CTV基因型鉴定技术进行规范。本标准引用了柑橘苗木产地检疫规程（GB5040），规范了田间实地取样的要求。本标准规范了样本RNA的提取方法、RT-PCR检测技术体系及基因型判定方法，鉴定结果中对照出现一条大小为771bp的特异性条带，阴性对照没有任何扩增条带，待检样品若出现与阳性对照相同大小的771bp特异性条带，则判定该样品为阳性，若未出现任何扩增条带，则判定样品为阴性。将携带CTV的样品核酸经RT-PCR扩增后，产物经电泳于凝胶成像系统观察，阴性对照无扩增条带，阳性对照出现583bp（VT）、316bp（RB）、417bp（T3）、590bp（T30）、175bp（T36）、491bp（T68）特异性条带，对样本进行基因型分类判定。三、标准的编制原则1.原则性本着科学、合理、客观、高效，符合实际工作需要，易于规范和推广柑橘衰退病毒基因型鉴定技术的基本原则。标准的制定格式严格按照GB/T1.1《标准化工作导则第1部分：标准的结构与编写规则》的规定编写。2.适应性标准主要内容包括柑橘衰退病毒基因型鉴定术语和定义,适用于柑橘类植物感染柑橘衰退病毒的RT-PCR检测和基因型鉴定。根据柑橘衰退病的田间症状调查及实验室RT-PCR检测技术要求，规定了柑橘衰退病的田间症状识别特征、室内检测仪器、试剂、样品预处理要求，样品RNA提取、RT-PCR检测技术体系及基因型鉴定方法等内容。3.参考国际惯例，结合我国实际目前尚无相应的国家、地方标准或技术规程对CTV基因型鉴定技术进行规范。本标准充分参考国际国内柑橘衰退病毒基因型鉴定技术及存在的具体问题，结合我国相关的法律法规、技术规范，制定本标准。四、与现行的法律法规、标准的关系本标准符合我国目前法律、法规的规定，本标准与其它相关标准没有矛盾之处。五、重大分歧意