单孢杂交平菇品种选育技术规程DB41-T 1614-2018

ICS65.020.20

B05

DB41

河南省地方标准

DB41/T1614—2018

单孢杂交平菇品种选育技术规程

2018-06-19发布2018-09-19实施

河南省质量技术监督局发布

DB41/T1614—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由河南省农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所。

本标准主要起草人：孔维丽、康源春、张玉亭、袁瑞奇、孔维威、胡素娟、刘芹。

本标准参加起草人：韩玉娥、段亚魁、宋志波、徐柯、崔筱、孟庆涛。

I

DB41/T1614—2018

平菇单孢杂交品种选育技术规程

1范围

本标准规定了单孢杂交平菇品种选育技术的术语和定义、亲本选择、单核菌丝的制备、单孢杂交、

新菌株筛选、鉴定和保藏。

本标准适用于平菇单孢杂交新品种的选育。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T1003—2008普通用途双向拉伸聚丙烯（BOPP）薄膜

GB/T4456—2008包装用聚乙烯吹塑薄膜

GB5749—2006生活饮用水卫生标准

GB/T12728—2006食用菌术语

GB/T21125—2007食用菌品种选育技术规程

NY/T119—1989饲料用小麦麸

NY/T528—2010食用菌菌种生产技术规程

NY/T1844—2010农作物品种审定规范食用菌

NY5099—2002无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求

NY5358—2007无公害食品食用菌产地环境条件

JC/T479—2013建筑生石灰

DB41/T1211—2016平菇发酵料栽培技术规程

DB41/T1186—2015平菇熟料栽培技术规程

农业部第62号令《食用菌菌种管理办法》2006年

3术语和定义

GB/T12728—2006和GB/T21125—2007界定的术语和定义适用于本文件。

3.1

担孢子

经核配和减数分裂后在外生于担子上形成的孢子。

3.2

单孢子分离法

通过分离单个孢子以获得真菌纯培养物的方法。

3.3

菌株

由单一细胞个体通过无性繁殖形成的纯培养物及其后代。

3.4

1

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品种

人工选育或发现并改良，具备特异性、一致性、稳定性，具有符合《农业植物品种命名规定》的品

种名称。

3.5

对照品种

目前生产上常用的主栽品种。

4亲本选择

选择生物学性状优势互补、亲缘关系较远、生态差异大、特异性差异显著的菌株为亲本。

5单核菌丝的制备

5.1孢子收集

挑选第一茬菇颜色均匀、菇型完整，能够代表亲本菌株生物学特性的8成熟整朵子实体为种菇，选

取其中1～2片菌盖为种菇，放置在干燥洁净与孢子颜色有差异的纸张上，折叠存放，保持环境温度

24℃～26℃，湿度55%～65%，放置12h～18h，即可得到孢子印。

5.2单孢分离

5.2.1一步稀释法

无菌针挑取0.1mm×0.1mm孢子印于灭菌后的400mL无菌水内，混合均匀，吸取1mL孢子混合

液移入PDA培养基内，旋转培养皿，使悬浮液铺满培养基表面。

5.2.2梯度稀释法

250mL三角瓶加入100mL纯净水灭菌备用，无菌接入一环平菇孢子，摇匀。选用4～5支20ml试

管灭菌备用，每支试管内加入9mL无菌水，吸取1mL孢子悬浮液加入1号试管内摇匀，吸取1mL1

号试管内孢子悬浮液加入2号试管内，稀释至10-4～10-6，显微镜镜检，以视野内保留4～5个孢子为

宜，吸取1mL孢子悬液移入PDA培养皿内，旋转培养皿，使悬浮液铺满整个皿内培养基表面。

5.3单孢鉴定

5.3.1插片培养

将接有孢子悬浮液的培养皿，放置于25℃培养箱培养5d～6d，肉眼能见孢子萌发，取灭菌后的

0.5μL～10μL移液枪枪头，垂直对准萌发的孢子，扎取，携带培养基转入新的PDA培养皿内，25℃

培养7d。萌发后的菌丝再转接至新的培养皿内，距接种点0.5cm处，插入无菌盖玻片，25℃培养，

以30～40个培养皿为宜。

5.3.2显微镜检

取洁净载玻片滴入0.5mL去离子水或棉蓝染色液，取出长至盖玻片1cm的菌丝，覆盖至载玻片，

去除多余水分，放置2min后镜检。高倍镜头下，观察菌丝是否有锁状联合，有锁状联合现象即为双核

菌丝，保留单核菌丝。

5.4单核菌丝挑选

2

DB41/T1614—2018

观察平菇单核菌丝长势，大致分为4种类型，每个类型挑选1～3个单核菌丝，总量以不超过10

个为宜。

6单孢杂交

6.1对峙培养

分别将两个不同亲本的单核菌丝接种于培养皿内，两者相距1cm，25℃培养8d～10d，对峙培养

区有拮抗线，表明杂交成功。

6.2杂合子培养

拮抗线两侧1cm处，用接种刀切割成0.5mm2菌块，挑取4～5块菌分别转接至新的培养皿培养基

内，25℃培养7d～8d。杂交后获得大量的杂合子，插片培养，显微镜检，保留有锁状联合的杂合

子。

6.3杂合子鉴定

杂合子与两个亲本、杂合子之间通过拮抗试验，筛选出不同的菌株即为杂交菌株，进入初选栽培

试验。

7菌株筛选

7.1初选

7.1.1菌袋制作

培养料配方：棉籽壳98%，石灰2%，采用14×28cm聚丙烯袋，菌袋质量应符合GB/T1003-2008要

求。一端封口，高压灭菌，无菌接种，每个菌株10～15袋。23℃～25℃培养，观察菌丝生长情况。

7.1.2出菇管理

大棚出菇，保持棚内温度10℃～28℃，空气相对湿度75%～95%，二氧化碳浓度600mg/L以下，自

然光照，一端出菇，记录出菇时间、子实体形状、颜色、出菇整齐度、抗杂性、抗病性、产量等。

7.1.3优良菌株筛选

根据选育目标设定挑选指标，初选出颜色适宜、总产量高产、抗性强的杂交菌株，进入栽培试

验。

7.2复筛

复试采用大棚栽培和设施化栽培，可平行进行，需要2～3个生产周期，每个菌株90～100袋（瓶），

通常以2个亲本菌株为对照。

7.2.1大棚栽培

7.2.1.1熟料栽培

适宜周年栽培。按DB41/T1186—2015的规定执行，比较参试菌株之间菌丝长势、出菇早晚、出菇

温度、抗病性、抗杂性、产量、生物学效率、子实体性状、出菇率等，筛选出综合性状超过亲本或与亲

3

DB41/T1614—2018

本相当的杂交菌株为优良菌株。

7.2.1.2发酵料栽培

适宜秋冬季栽培。按DB41/T1211—2016的规定执行，比较参试菌株之间菌丝长势、出菇早晚、出

菇温度、抗病性、抗杂性、产量、生物学效率、子实体性状、出菇率等，筛选出综合性状超过亲本或与

亲本相当的杂交菌株为优良菌株。

7.2.2工厂化栽培

栽培容器采用质量符合GB/T1003—2008规定的1100ml塑料瓶及质量符合GB/T1003—2008规定

折经18～20×38×0.005cm聚丙烯袋为宜，栽培原料应符合NY5099—2002的规定，选用适宜的配方，

采用机械化装袋（瓶）、高压灭菌、强制降温、无菌接种、适温集中培养、后熟技术，在可控的温度、

湿度、光照强度、二氧化碳浓度条件下集中出菇管理，记录菌丝满瓶时间、出菇早晚、出菇率、一茬菇

产量、生物学特性等特征。筛选出一茬菇生物学效率大于50%并超过亲本的菌株为优良菌株。

7.3生产筛选

生产筛选试验一般安排1～2生产周期，栽培数量以500袋为宜，以生产上主栽品种对照品种。

7.3.1大棚栽培

采用熟料、发酵料发酵料栽培模式，按7.2.1.1、7.2.1.2的规定执行，比较各个菌株间菌丝长势、

出菇时间、抗病性、抗杂性、产量、生物学效率、品质等，筛选出产量超过对照菌株或产量相当品质等

其他性状优于对照的菌株为优良菌株。

7.3.2工厂化栽培

以现有高产、亲本菌株为对照菌株，按照7.2.2执行，筛选出一茬出菇率、一茬菇产量、一茬菇生

物学效率超过对照菌株即为优良菌株。

8品种鉴定与登记

8.1特异性鉴定

送至有检验检测资质的单位做特异性检测，具有遗传特异性的菌株为新菌株。

8.2品种登记

通过申报、审查并获得植物新品种权保护证书。

8.3品种鉴定

通过河南省农业厅种子管理站农作物品种鉴定要求，并获得河南省农作物品种鉴定证书。

9菌种保藏

采用短期和长期两种保藏方式，短期保藏采用低温斜面保藏法为宜，长期保藏采用液氮冷冻保藏法

为宜。

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4

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前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由河南省农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所。

本标准主要起草人：孔维丽、康源春、张玉亭、袁瑞奇、孔维威、胡素娟、刘芹。

本标准参加起草人：韩玉娥、段亚魁、宋志波、徐柯、崔筱、孟庆涛。

I

DB41/T1614—2018

平菇单孢杂交品种选育技术规程

1范围

本标准规定了单孢杂交平菇品种选育技术的术语和定义、亲本选择、单核菌丝的制备、单孢杂交、

新菌株筛选、鉴定和保藏。

本标准适用于平菇单孢杂交新品种的选育。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T1003—2008普通用途双向拉伸聚丙烯（BOPP）薄膜

GB/T4456—2008包装用聚乙烯吹塑薄膜