提交细胞生物学实验教案

细胞生物学实验

CellBiologyExperiment

目录

1.显微镜的结构及细胞形态观察、大小测量和死活细胞鉴定

---Feulgen反应

——PAS反应

实验报告要求

1.注意页面四边留白，不要挤到页边！

2.抬头填写完整。

3.注意事项自己总结，不要抄袭！

4.组长检查后上交存档。

生物绘图注意事项

1.211以上绘图铅笔削尖、绘图橡皮、直尺

2.边看显微镜边按视野中实际情况绘图，以精确为主，不能艺术

加工。

3.应找到最典型、最能说明绘图目的的物像来绘图。先轻勾出轮

廓，检查无误后，再以准确清晰的线作最后描绘。

①实线表示轮廓，虚线表示被遮蔽但需表现的轮廓，线粗细应均

匀有规律

②圆点的疏密表示明暗、凹凸（越暗的地方点越多）点点时笔尖

直立，点大小、疏密要均匀、整齐、浑圆，不能像。

4.用尺向右侧引出水平指示线，线右端平齐字注在右侧。图下方

写上所画图的名称及放大倍数。图的右侧和下方需写文字说明，

所以图应绘在绘图纸上偏左上方的位置。

5.一幅图只要详细画出部分结构，其余勾画出轮廓即可。

人。腔上皮细胞放大10瞬

规范不

规范

实验一普通显微镜的使用及细胞形态观察、大小测量和死活细胞

鉴定

一、实验目的

1.熟悉普通光学显微镜的基本构造和性能，掌握使用方法。

2.了解细胞的一般形态和基本结构。

3.掌握显微测微尺的使用，对细胞大小有一直观认识。

4.了解鉴定死活细胞的方法。

二、实验原理

1.显微测微尺的使用

镜台测微尺：表示绝对长度，长1mm,分成100小格，每小格

为。不被用来直接测量，而是用它来校正目镜测微尺，故其质量

对所测微体影响极大。

目镜测微尺：是一块比目镜筒内径稍小的有标尺的圆形玻璃

片，标尺长10毫米、分为100格。需要镜台测微尺校正为绝对长度

再测定细胞大小。

2.死活细，/二^三色剂，只能透过

质膜受损的细।匕£“*加工匕11

三、实验用品_6

愫台测微尺

1.试验材料：口,微尺

1

■洋葱内表皮细胞

胞、:

_平、

多边形的，形状不很规）

2.试剂

0.2%台盼蓝溶液

3.仪器

测微尺（2套）、普通光学显微镜、刀片、镶子、玻璃滴管、

吸水纸、牙签。

四、试验方法

一、细胞死活的鉴定

0.2%台盼蓝染色5-10分钟后进行观察。

二、细胞大小测量

1）测量时，镜台微台尺换成样本，

2）目镜测微尺来测量细胞的大小

3）改变显微镜的放大倍率，则需对目镜测微尺重新进行标定。

三、细胞形态的观察

五、注意事项

取口腔黏膜上皮细胞注意的问题

1.口腔上皮细胞主要分布在口腔两侧颊部。用消毒牙签的钝端，

在漱净的口腔任意一侧的颊部，轻轻刮几下。

2.取材前，口腔一定要用清水漱净，去除口腔内的食物残渣。

3.用方签在口腔壁上轻轻刮动，不要刮在牙缝里，因为牙齿上刮

下来的是食物碎屑，不是口腔上皮细胞。

六、作业

1.绘制口腔黏膜上皮细胞及洋葱内表皮细胞图（2-3个细胞）

2.列表写出洋葱内表皮细胞长轴、短轴长度，并计算平均值。（取

3个细胞）

3.取口腔黏膜上皮细胞注意的问题

4.生物绘图注意事项

实验二线粒体和液泡系的超活染色及观察

一、实验目的

1、了解细胞和细胞器的超活染色技术。

2、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡的形态、数量和分布，了

解植物细胞液泡系的发育过程。

二、实验原理

活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害

的一种染色方法。它的目的是显示活细胞内的某些结构，而不影

响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死

亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病

理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色

分为体内活染及体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液

注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结

构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细

胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某

种结构上而显色。

活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要

是染料的电化学特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子,

酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴

离子或阳离子，这样，它们彼此就发生了吸引作用。但不是任何

染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒

性极小的染料，而且总要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性

染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质的特性，易于被细

胞吸收，JanusgreenB和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最

重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

线粒体是细胞内重要的细胞器，线粒体内膜上分布有细胞色素

氧化酶，该酶能使詹姆斯绿B保持在氧化状态，呈现蓝绿色从而使

线粒体显色，而细胞质中的染料被还原成无色。液泡是细胞内浓

缩产物的主要场所，有十分重要的功能。中性红是液泡的特殊染

色剂，将液泡染成红色。在活细胞中，细胞质和细胞核不着色。

如果细胞死亡，染料会弥散开来，使核着色。

三、实验用品

(-)器材

显微镜、恒温水浴锅、镜子、刀片、载玻片、盖玻片、吸管、牙

签、吸水纸等。

(二)试剂

1、Ringer溶液生理盐水、缓冲液

氯化钠（变温动物用）；氯化钾0.25g；

氯化钙0.03g；蒸储水100ml

2、10%、1/3000中性红溶液

称取中性红溶于50mlRinger溶液,稍加热（30-40度）使之

很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉

淀，失去染色能力。

临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml,加入29mlRinger溶液

混匀，装入棕色瓶备用。

3.1%>1/5000詹姆斯绿B溶液

称取50mg詹姆斯绿B溶于5mlRinger溶液中，稍加微热

（30-40度）使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液1ml

加入49mlRinger溶液，即成1/5000工作液，装入瓶中备用。最好

现用现配，以保持它的充分氧化能力。

（三）材料

人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦幼根根尖。

四、实验方法

（一）线粒体的超活染色及观察

1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察

载玻片一37℃水浴锅的金属板一滴两滴詹纳斯绿B染液

牙签一从口腔粘膜刮取上皮细胞一放入载玻片染液一染色

10-15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液）一盖

上盖玻片用吸水纸吸去四周溢出的染液一观察

2.洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色

载玻片一撕取一小片洋葱鳞茎内表皮滴一一滴詹纳斯绿B染液

-*染色10T5分钟

吸去染液f加一滴Ringer液，注意使洋葱内表皮展平一盖上盖玻

片一观察

（二）液泡系的超活染色及观察

刀片一小麦幼苗根尖一切一纵切面一中性红染色5-10分钟

吸去染液一加一滴Ringer液一盖上盖玻片一镶子轻轻下压盖玻片

一观察

五.实验结果

在小麦根尖细胞制片中，可见细胞质中散在很多大小不等的染

成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点

向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，

体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的

巨大液泡，占据细胞的绝大部分空间，将细胞核挤到细胞一侧贴

近细胞壁处。

六.注意事项

1、詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持它的充分氧化能力。

2、实验中速度要快，以免组织细胞死亡。

七、作业

1.画出你所观察到的线粒体和液泡的图像.

2.总结实验成功或失败的原因.

实验三叶绿体的分离及观察

一、实验目的

通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方

法。

二、实验原理

细胞器分离的过程包括两个主要阶段：破碎细胞和细胞组分的

分离。叶绿体的分离采用在等渗溶液中进行组织匀浆、分离。叶

绿体的分离采用差速离心或密度梯度离心法进行。差速离心主要

是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。起始的

离心速度较低，让较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍然悬浮在

上清液中。收集沉淀，改用较高的离心速度离心悬浮液，将较小

的颗粒沉降，以此类推，达到分离不同大小颗粒的目的。差速离

心的分辨率不高，沉降系数在同一个数量级内的各种粒子不容易

分开，常用于其他分离手段之前的粗制品提取。

三、实验用品

1.材料：菠菜叶片

2.试剂：蒸储水，氯化钠溶液

3.仪器：普通离心机、天平、显微镜、镒子、载玻片、盖玻片、

离心管、吸水纸等

四、实验方法

（去叶脉）3g氯化钠15ml-研磨（冰浴）一匀浆过滤（6层纱布）一

滤液在lOOOrpm离心2min一弃沉淀，上清液3000rpm离心5min—去

上清液一沉淀为叶绿体（混有部分细胞核），用氯化钠溶液悬浮一

滴片观察

1滴置于载玻片上，加盖玻片后用用普通光学显微镜观察叶绿体的

形态结构

新鲜菠菜叶，刀片切出一斜面置于载玻片上，滴加「2滴NaCl

溶液，盖上盖片，显微镜下观察。用镒子摄取或刀片刮取新鲜菠

菜叶片叶肉，滴加1-2滴NaCl溶液，作临时装片。

五、实验结果

1.普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄型，高倍镜下可看到叶

绿体内部含有较深的绿色颗粒，即基粒。

2.菠菜叶手切片在普通光镜下可以看到三种细胞：表皮细胞、保

卫细胞、叶肉细胞。叶肉细胞呈长方形或类方形，内含大量带有

绿色的叶绿体颗粒。另外，视野下还可见到大量散在的点状或类

圆状叶绿体颗粒。

3.红辣椒细胞中有许多红色小颗粒，这就是杂色体。杂色体分散

在细胞质中。

六、注意事项

氯化钠）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。

0-5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。

3.离心机使用：离心管要平衡

七、作业

1.根据显微观察结果，绘制菠菜叶的结构模式图。

实验四细胞骨架的光学显微观察和永久制片技术

一、实验目的

掌握植物细胞内细胞骨架的光学观察方法，了解细胞骨架在细

胞内的分布特点。

二、实验原理

细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分

和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形

态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要

作用。

光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1%TritonX-100处

理细胞，可将细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解

抽提，而细胞骨架系统的蛋白质被保存，再用考马斯亮蓝R250染

色，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。

TritonX-100：是非离子型表面活性剂（去污剂）。适当浓度

的TritonX-100处理细胞时，可将细胞质膜中和细胞质中的蛋白

质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而

被保存。这样，使细胞骨架图像更清晰。

考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，它可以使各种细胞骨

架蛋白质着色，并非特异地显示微丝，但是由于有些细胞骨架纤

维在该实验条件下不够稳定，例如微管；还有些类型的纤维太细,

在光学显微镜下无法分辨，因此我们看到的主要是微丝组成的应

力纤维（微丝束），直径约40nm左右。

戊二醛能固定，较好的保存细胞骨架成分。

M—缓冲液：稳定F-肌动蛋白使得细胞骨架纤维保持聚合状态

并且较为舒张，便于观察。

磷酸缓冲液（PBS）：含有生理盐水，可使细胞不被破坏，能保持

原有状态下的结构。

三、实验用品

1.实验材料

新鲜洋葱鳞茎的内表皮。

2.实验器材

普通光学显微镜、10mL小烧杯、镜子、刀片、载玻片、盖玻

片、载玻片、盖玻片、、擦镜纸、PH计、水浴锅。

3.试剂:

M一缓冲液、磷酸缓冲液（PBS）、3%戊二醛、KTriton-100、

0.2%考马斯亮蓝R250

四、试验方法

,大小若干片），置于1.5ml离心管中，加入PBS（1.5mL左右），使

其下沉（lOmin左右）。

2.吸去缓冲液，用MTrionX-100处理15-20min。

3.吸去TrionX-100,用M缓冲液洗3次，每次5min。

4.用3%戊二醛固定30min。

5.PBS（1.5ml左右）洗3次，每次3min,滤纸吸去残液。

6.0.2%考马斯亮蓝R250染色至少30min。

7.蒸福水洗涤2次，然后将样品置于载玻片上，加盖玻片，在普

通光学显微镜下观察。

8.选取观察效果好的制作永久切片于脱水剂中每级5T0min,第一

滴阿拉伯树胶封片。

五、实验结果

观察：镜下可见洋葱表皮细胞轮廓，微丝束呈深蓝色。转换高

倍镜观察，转动微调，可见细胞骨架的立体结构。

六、注意事项：

L撕取洋葱鳞茎内表皮不可带茎肉，样本要展开铺平。

2.去垢时间不要超过30min。

3.染色时间需掌握好，必要时可分别设不同染色时间比较。

4.由微丝组成的应力纤维（张力纤维）是一种动态结构，细胞充

分贴壁铺展时纤维挺直、丰富；反之，细胞收缩变圆，应力纤维

弯曲，甚至部分解聚消失而显稀少。

七、作业

绘出植物细胞骨架微丝的分布图。（2-3个细胞）

补充：

①6mmol/LPBS（pII6.8）

A液：NaH2P04-2H20936mg/1000ml

B液：Na2HP04-12H202148mg/1000ml

工作液:A液53.7ml+B液（用NaHC03调pH值至）

②M缓冲液（pH值）

咪喋50mmol/L

KC150mmol/L

EGTA1mmol/L

EDTA0.1mmol/L

筑基乙醇1mmol/L

甘油4mmol/L

加蒸储水至1000ml,用lmol/LHCL调pH值为。

③l%TritonX-100:

TritonX-1001ml

M缓冲液99ml

④0.2%考马斯亮蓝R250染液：

考马斯亮蓝R2500.2g

甲醇46.5ml

冰醋酸7ml

蒸储水46.5ml

5.3%戊二醛

25%戊二醛12nli

PBS（2液）88ml

⑤脱水剂

50%乙醇

70%乙醇

95%乙醇

100%乙醇

二甲苯

实验五DNA的显示---Feulgen反应

一、实验目的

1、了解Feulgen染色反应原理；

2、掌握Feulgen染色的方法，观察染色结果。

二、实验原理

根据DNA经盐酸水解后，打开了喋吟碱基和脱氧核糖连接的键,

在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。这些醛基就在原位及Schiff

试剂结合，形成紫红色的化合物。所以凡有DNA的部位，就呈现为

紫红色。

Feulgen反应是特异性显示DNA的最经典方法，即可进行DNA定

位显示，又可用显微分光光度计进行定量分析。Feulgen反应对组

织中DNA的检测具有高度专一性。组织中除DNA外还有多糖、RNA和

其他自由醛基可以被盐酸酸解掉。

H-C=O

H-C-H-

H-C-OH+B

H-t-H噤E

ClfeOH

具终可承贩核第

G强研

图6噂吟脱氧核昔水解反应式

NH•SftH

NHz(SchiffWHI)

图7Feulgen反应原理

三、实验用品

四、实验方法

①取小麦根尖和洋葱内表皮（绿豆大小）浸入预热至60c的1NHC1

中水解，时间10mino

②蒸播水洗后，转入Schiff液中避光染30min,待根尖变为深红

色；

③在新配亚硫酸水中洗3次，每次1min；

④自来水洗5min,在载玻片上切下深红色根尖备用；

⑤制片镜下观察，根尖镶子捣碎压片。

五、注意事项

六、作业

绘图描述所观察到的试验结果。

实验六多糖的显示一一PAS反应

一、实验目的

通过PAS反应，了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细

胞中的分布。

二、实验原理

PAS反应是显示多糖的最经典、也是最直接的细胞化学方法。

用具有强氧化作用的过碘酸处理使多糖中葡萄糖的乙二醇基氧化

成两个游离的醛基，醛基及Schiff试剂结合可形成紫红色的化合

物，颜色深浅及多糖含量成正比。单糖易被抽提掉，多糖包括糖

原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂、淀粉和纤维素。

NH-S&H

NHz(Schiffli)

+HI04

SOJH<JJ!

SOJH

HzN.^^-e~^^-NHSO,R+R-C^H—・5

(5OH

NHSO2---CH

NH2R

无色

Schiffei'

OH

NH篇

，NHSO心

紫红色

图5PAS反应原理

三、实验用品

L材料：马铃薯块茎

2.试剂:0.5%高碘酸、schiff试剂、亚硫酸水、70%酒精

3.器材：显微镜、刀片、镶子、载玻片、盖玻片、水浴锅

四、实验方法

1、取马铃薯块茎切成薄片，浸入过碘酸溶液10分钟；

2、用70%的酒精冲洗1次；

3、将薄片放入Schiff试剂中20—25分钟；

4、在新配亚硫酸水中洗3次，每次1min；

5、蒸馈水洗片刻；

6、将薄片放在载玻片上吸去水分，加上盖玻片，镜下观察。

五、注意事项

按上述操作，细胞中水溶性糖类已丧失，被染色的是不溶性的

碳水化合物。

六、作业

绘制实验结果，并描述。

实验六细胞内碱性蛋白和总体蛋白的原位显示

一、实验目的

1.掌握细胞内酸、碱性蛋白的鉴别方法；

2.了解酸、碱性蛋白在细胞内的分布情况。

二、实验原理

蛋白质是一种两性电解质，在碱性环境中，蛋白质带负电，

在酸性环境中，蛋白质带正电。所以，利用各种蛋白质在不同ph

下，因等电点不同而产生的及固绿染液（一种弱酸性染料它对碱

性物质的亲和力强）结合能力的差异核酸的存在会影响实验结

果,用三氯醋酸处理可提出核酸。

三、实验用品

1、试验材料

洋葱鳞茎内表皮或根尖

2、试剂

10%福尔马林、5%三氯醋酸、0.1%酸性固绿染料（酸染）、0.1%

碱性固绿染料（碱染）

3、器材

显微镜、水浴锅、载玻片、盖玻片、吸水纸

四、实验方法

1.材料固定洋葱鳞茎内表皮若干片，10%福尔马林固定液中固定

15min,蒸播水洗2次。

2.抽提核酸5%三氯醋酸中90℃,15min,蒸馈水洗数次（3min

以上）以冲去痕迹的三氯醋酸。

3.染色

①一张片滴加0.1%碱性固绿（pH8.0）中染色5〜lOmin。

②另一张片滴加0.1%酸性固绿（pH2.2）中染色5〜lOmin（视染

色深浅而定）。

蒸储水冲洗（3min）,盖上盖片镜检。

五、实验结果

用PH2.2酸性固绿染液染色结果，细胞中蛋白质均被染成绿色,

此即总体蛋白在细胞内的分布。总体蛋白-碱性蛋白=酸性蛋白。

用pH8.。碱性固绿染液染色结果，只有细胞核内染色质被染绿

色（或浅蓝色），此即碱性蛋白在细胞内的分布。

六、注意事项

使用三氯醋酸处理的目的？

用5%TCA提取DNA是该实验中的关键。DNA必须被提取，以使染

色质的负电荷下降，用热TCA提取核酸后，固绿在碱性pH下，碱性

蛋白可以选择性地被染色，如未被提取，不能染色，或整个切片

染成蓝绿色，水洗或进入酒精即褪色。

七、作业

1、绘制酸、碱性蛋白在细胞内的分布图。

2、总结本次实验的得失。

实验八植物原生质体的制备及融合

一、实验目的

1.学习植物原生质体的分离制备技术，观察原生质体形态。

2.学习细胞融合技术，观察融合细胞的形态及变化。

二、实验原理

除去植物细胞壁的裸露细胞，称为原生质体，是开展基础研究

的理想材料。植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成,

常用酶解法分离原生质体，其原理是使用纤维素酶、半纤维素酶

和果胶酶能降解细胞壁成分，除去细胞壁。

细胞融合又称细胞杂交指离体条件下用人工的方法把不同的细胞

通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。许多化学、物理学和

生物学方法可诱导原主质体融合，现在被广泛采用并证明行之有

效的融合方法是聚乙二醇(PEG)法、高Ca高pH法和电融合法。PEG

作为一种高分子化合物，20〜50%的浓度能对原生质体产生瞬间

冲击效应，原生质体很快发生收缩及粘连，随后用高Ca高pH法进

行清洗，使原生质体融合得以完成。

三、实验用品

L器具：显微镜、离心机、离心管、剪刀、镜子、吸管、小培养

皿、载片、盖片、300目滤网。

2.试剂：酶混合液、洗涤液、20%蔗糖液、PEG溶液、高钙高pH溶

液

⑴酶混合液(9CPW):(2)洗涤液(9CPW)

1%纤维素酶pH5.6

%果胶酶

27.2mg/LKH2P

101.0mg/LKNO3

1480.0mg/LCaCl2-2H20

246.0mg/LMgSO.,

0.16mg/LKI

0.025mg/LCuSOi

9%W/V甘露醇

500mg/LMES

(3)PEG融合液(pH5.6)

40%PEG(MW1000-6000)

0.3mol/L葡萄糖

2•2H20

2PO4

(4)高钙高pH溶液(pH10.5)

2•2H20

甘露醇

3.材料：菠菜、韭菜叶片

四、实验方法

1、分离原生质体

①撕叶下表皮

②酶解将撕去下表皮的叶片剪成0.5mm宽小块，放在盛有5mL

酶液的小培养皿或带盖三

角瓶中，让去除下表皮的一面接触酶液，辅满一层，在25-28℃下

酶解60-90分钟。可镜检有较

多原生质体后停止。

2、收集纯化

①用300目网过滤除去未完全消化的残渣。

②酶解液转移至10mL离心管中，配平，以800rpm离心5分钟

以上，使原生质体沉降。

移液管吸上清，剩下原生质体及残渣于管底。

③加入3mlCPW洗涤液，轻轻吹打均匀，相同条件下离心2-5

分钟，弃上清，以彻底去除酶液。

④加入少量CPW洗涤液，轻轻吹打均匀，用注射器向离心管底

部缓缓注入20%蔗糖约2—3mL,出现下部蔗糖液，上部原生质体

悬浮液。

⑤以600rpm离心10分钟，在两液相之间出现一条绿色带，

便是纯净的原生质体，注射器针头轻轻插入离心管底部吸取碎片

和蔗糖溶液，再吸去上清。

3、制备效果检测

（1）血球计数板计数

（2）原生质体活力测定

形态识别（完整、饱满、颜色鲜艳）

中性红染色（液泡变红）

台盼蓝染色（不能显色）

观察10个视野计算：

存活率=（活性原生质体/原生质体总数）X100%

4、原生质体融合

（1）取原生质体液两滴，间隔5nlm滴于载玻片上，静置8—10分钟,

使原生质体沉降。

（2）在两液滴之间滴加一滴40%的PEG溶液，使三液滴相连（可

转动载玻片使其混匀）室温下（15-20℃）静置5-10分钟，观

察原生质体聚集（粘连）现象。

（3）滴加高钙高PH洗液，转动载玻片使其混匀，观察原生质体融

合过程。

五、作业

1.按镜下观察绘制2-3个原生质体。

2.计算原生质体浓度和存活率。

3.描述原生质体融合过程。

实验九蚕豆根尖微核检测技术

一、实验目的

1、了解细胞微核形成的机理及其形态特点，

2、学习植物根尖细胞的微核检测技术。

二、实验原理

微核试验(Themicronucleustest,MNT)是以动植物为材料，

采用细胞生物学手段，观测其出现的微核率来表示材料受遗传损

伤程度的一种检测遗传毒物的方法。微核是指位于细胞质中独立

于主核、直径小于主核，完全及主核分开的圆形或椭圆形的微小

核。是真核生物细胞中的一种异常结构，它是由于细胞受到损伤

后，由细胞分裂过程中丧失着丝粒的染色体断片或落后染色体产

生的。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不

能进入主核，便形成了主核之外的核块。

蚕豆根尖细胞微核技术已发展的相当成熟，具有较高的灵敏

性，作为检测化学品遗传毒性的方法，得到了广泛应用。而

且在测定监测淡水污染物和检测化学诱变剂的研究已列入国家生

物监测技术规范(水环境部分)，并推广应用于大气、废水、土

壤等的致突变活性检测。

三、实验用品

1.材料：蚕豆

2.器材

显微镜、恒温培养箱、纱布、镜子、载玻片及盖玻片等。

盐酸（5mol/L）、70%乙醇、卡诺固定液（用乙醇和冰醋酸以

3:1（v/v）混合配制）、石炭酸品红、硫酸铜、待测液。

四、实验步骤

1、浸种催芽

将实验用蚕豆按需要量放入盛水烧杯中，在25℃下浸泡24〜

48小时，此间至少换水两次，所换水应25℃预温。

种子吸胀后，用纱布松散包裹置瓷盘中，保持温度，在25℃

温箱中催芽12〜24小时。

待初生根长出2〜3nlm时，再取发芽良好的种子，放入铺满滤

纸的瓷盘中，25℃继续催芽，经约36-48小时，大部分初生根长至

1〜2cm左右，此时可用来进行实验。

2、根尖染毒:

选取初生根生长良好，根长一致的6〜8粒种子，放入盛有待

测液的培养皿中，阳性检测采用200mg/L硫酸铜,对照用蒸储水处

理，处理时间6-24h,处理液浸没根尖。

3、恢复培养：处理后的根尖用自来水浸洗3次，每次2〜3min,洗

净后在蒸储水中恢复培养24h。

4、固定：切取1cm左右的根尖，用卡诺氏固定液固定24h后弃去固

定液，固定后的根如不及时制，可换入70%的乙醇溶液中置4℃冰

箱中保存备用。

5、酸解：用蒸储水浸洗固定好的幼根2〜3次，每次5分钟，吸净

蒸馆水，加入5moi/L盐酸将幼根浸没，室温下酸解lOmin,幼根软

化即可，弃去盐酸，漂洗根尖2〜3次，每次1〜2分钟，彻底洗净

盐酸。

6、染色：截下『2mm长的根尖，滴加适量的石炭酸品红染液，染

色lOmin,加盖玻片，压片观察。

五、注意事项

1、培养蚕豆时需勤换水

2、处理蚕豆时要将根部浸没于处理液中

3、固定液要现配现用

六、实验结果

污染指数PI值评价水质标准表

污染指数PI值水质污染等级

基本无污染0〜1.5

轻污染1.5〜2.0

中污染2.0〜3.5

重污染3.5以上

七、作业

绘图、计算微核千分率和污染指标。

实验十细胞膜的渗透性

一、实验目的

1.了解溶血现象及其发生机制。

2.了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞的速度。

二、实验原理

细胞膜是细胞及环境进行物质交换的选择通透性屏障，是一种

半透膜，可选择性控制物质进出细胞。小的、亲脂性的、非极性

分子（如。2、CO2、N2、苯）容易溶解于脂双层，可迅速透过脂

双层。小的、不带电荷的极性分子（如水、厥、甘油等）如果足

够小时，也能很快透过脂双层；大的、不带电荷的极性分子（如

葡萄糖，蔗糖等）以协助扩散或主动运输进入细胞；对于带电荷

的分子或离子，由于这些分子的电荷及高的水化度，因此不管多

小，都很难透过脂双层的疏水区，它们要通过载体介导的主动运

输方式跨膜运输。

将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细

胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红

色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在某些

等渗盐溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，有的溶

质可进入，有的溶质不能进入，进入红细胞的溶质能提高红细胞

的渗透压，使水进入红细胞，引起溶血。由于不同溶质透入速度

不同，溶血时间也不同，因此，发生溶血现象所需时间长短可作

为测量物质进入红细胞速度的一种指标。本实验选用红细胞作为

细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细

胞的变化。

三、实验用品

1.材料：鸡血溶于含有抗凝剂的等渗液中（肝素钠0.2mg/mL,一

般范围在；等渗液为0.85%NaCl）

2.器材：

试管，试管架，滴管，载玻片，盖玻片，光学显微镜。

3.试剂:

低渗溶液：0.0085%NaCl和葡萄糖；

等渗溶液:0.85%N溶1、0.3等ol溶葡萄糖、0.3等。1溶甘油、

0.32moi/L乙醇。

10%TritonX-100>2%TritonX-100o

四、实验步骤

1、制备血液稀释液

①抗凝剂的制备：首先称取1克肝素钠粉末，然后加入0.17M

NaCl溶液10ml（1：10的比例），混合均匀，制成肝素抗凝剂。

②血液稀释液的制备：鸡翼下静脉取新鲜血液，按比例（肝素

抗凝剂:血液=1：10）混合均匀，配制成经肝素抗凝的血液。

③按比例（经肝素抗凝的血液：0.17MNaCl溶液=1：10）混

合均匀，形成一种不透明的红色液体。

2、低渗溶液溶血现象观察：

取试管一支加蒸储水3ml和稀释的鸡血1滴或2滴轻混一下，然

后静止注意观察溶液的颜色变化。结果：由于红细胞发生破裂，

造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液，溶液颜色由浑

浊的红色逐渐变透明，此即为溶血现象。记录下这个过程所要的

时间。

3、鸡红细胞的渗透性记时比较

1）分别取2只试管，各加入分1的0.85%NaCl、0.0085%NaCl

和葡萄糖加入2-3滴血红细胞悬液；

2）分别取3只试管,各加入3ml的0.32mol/L葡萄糖,0.32mol

/L甘油，0.32mol/L乙醇，加入2-3滴血红细胞悬液；

3）分别取2只试管,各加入3ml的10%TritonX-100.

2%TritonX-100；加入2-3滴血红细胞悬液，观察反应现象。记下

时间（自加入稀释血液到溶液逐渐由红色变为透明澄清，红血球

全部溶血所需时间），填入表一的空格中。

4、溶血结果的判断

不溶血：液体分2层，上层浅黄色透明，下层红色不透明，镜

检红细胞完好。

不完全溶血：溶液混浊，上层变红色，镜检有部分红细胞破裂。

完全溶血：液体变红而且透明，镜检发现细胞全成碎片。

5、显微观察

血液红细胞的观察滴一滴稀释的血液于载玻片上，盖上盖玻

片。用光学显微镜观察细胞的种类、形状和颜色。

细胞破碎的观察在上一步的载玻片的一端滴加清水，在另一端

吸水，并在显微镜下观察细胞的破裂。

试管中未发生溶血的细胞局部放大图试管中的细胞局都放大图（圈内的细

五、实验结果

将观察到的现象记录，并进行分析。

是否溶分析原

编号试剂时间

血因

10.85%NaCl

20.0085%NaCl

30.32M葡萄糖

40.32M甘油

50.32M乙醇

610%

TritonX-10

0

六、注意事项

1.试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为

的红细胞破裂。

2.取鸡血动作要非常迅速，否则鸡血会凝固。或者先把抗凝剂加

入到烧杯中，再加入新鲜的鸡血，边加边震荡即可。

3.长时间在等渗溶液中，由于活细胞会产生代谢产物积累，也会

产生溶血，试验时间不宜超过lh。

4.装不同试剂试管注意编号，吸管也要专用切勿混淆，以保证实

验结果的准确性。

补充：

一、细胞膜的功能

分隔形成细胞和细胞器，为细胞的生命活动提供相对稳定的内环

境，膜的面积大大增加，提高了发生在膜上的生物功能；

屏障作用，膜两侧的水溶性物质不能自由通过；

选择性物质运输，伴随着能量的传递；

生物功能：激素作用、酶促反应、细胞识别、电子传递等；

物质转运功能：细胞及周围环境之间的物质交换，是通过细胞膜

的转运功能实现的，其主要转运方式有四种，即单纯扩散、易化

扩散、主动转运、入胞和出胞作用。

细胞膜的受体功能：受体是细胞识别和结合化学信息的特殊结构,

其本质是蛋白质。

二、常用抗凝血剂包括：

1.非肠道用药抗凝血剂：如肝素；

2.香豆素抗凝血剂类：常用的有双香豆素、华法令和新抗凝等，

通过拮抗维生素K使肝脏合成凝血酶原及因子皿、IX和X减少而抗

凝；

3.抗血小板凝集药物：如阿司匹林，对血小板环氧化酶有抑制作

用；

4.蛇毒溶栓剂：如去纤酶、抗栓酶和清栓酶，可溶解已形成的血

栓使血管再通，从而起到抗凝血作用。

肝素的作用机理

肝素在体内、体外均有强大抗凝作用。及其带大量负电荷有关，

可使多种凝血因子灭活。这一作用依赖于抗凝血酶HI

(antithrombinIII,ATIII)。AtIH是凝血酶及因子

Xlla、Xia、IXa、Xa等含丝氨酸的蛋白酶的抑制剂。它及凝

血酶通过精氨酸-丝氨酸肽键相结合，形成AtIH凝血酶复合物

而使酶灭活，肝素可加速这一反应达千倍以上。

实验十一血细胞的分化和不同类型血细胞的观察

一、实验目的

1、学习掌握人血涂片和染色的方法。

2、了解各种血细胞的形态特征。

二、实验原理

瑞氏染色液主要染料由碱性美蓝和酸性伊红两种成分组成，

它们及细胞内的嗜酸性和嗜碱性的各种物质既有物理的吸