免疫学复习资料

免疫学复习

1.补体系统具有哪些生物学作用？

⑴溶菌、溶病毒及溶细胞作用-一依赖补体的细胞毒作用

（complement-dependentcytotoxicity,CDC）：在感染早期，主要通过旁路

途径和MBL途径，待特异性抗体产生后，主要靠经典途径来完成。

⑵调理作用：C3b、C4b以及iC3b可促进吞噬细胞的吞噬作用。

⑶免疫粘附作用...清除免疫复合物：抗原抗体复合物一C3b/C4b—

红细胞、血小板等，形成较大的聚合物，易被吞噬细胞吞噬清除。

⑷炎症介质作用（参与炎症反应）：

激肽样作用：C2a,增加血管通透性，引起炎症性充血。

过敏毒素作用：C3a、C5a（以C5a的作用最强）

趋化作用：C5a可吸引吞噬细胞定向移动

2..试比较三条补体激活途径的主要差异。

相同点：在于C5转化酶形成以后，从分解C5产生C5a、C5b至攻膜

复合体（MAC）的形成，这后段的过程都是相同的。

3.为什么MHC的主要生物学功能体现在结合与提呈抗原肽？

自然界中的抗原大多数是TD-Ag,诱导特异性细胞免疫应答的Ag必须

是TD-Ag,TD-Ag诱导特异性体液免疫应答诱生抗体时，必须有已被抗原

激活的T细胞辅助。但是T细胞不识别完整和游离的抗原分子，T细胞识

别的是由MHC分子结合提呈的抗原肽。因此，MHC的主要功能体现在结

合与提呈抗原肽。

4.简述T细胞辅助受体及其主要功能。

CD4和CD8分子，既是T细胞的重要标志，也是T细胞的辅助受体，

属IgSF成员。分别与1\/1炊11类分子的82区和MHC-I类分子a3区结合。

其功能：①加强了T细胞与APC

或者与靶细胞的相互作用；

②促进TCR识别抗原后的TCR-CD3复合物介导的信号转导作用

③参与T细胞在胸腺内的分化、发育及成熟；

④

CD4是HIV壳膜蛋白gpl20受体。⑤是鉴定T细胞亚群(CD4/CD8)

的标志

可将T细胞分为两大类：CD4+T和CD8+T细胞，在外周血液中，CD4+T

细胞约占65%,CD8+T

细胞约占35%,CD4+/CD8+=1.7〜2.0。

5.T细胞可分为哪些亚群？

㈠按T细胞表面表达的CD分子不同可分为：CD4+T细胞和CD8+T细

胞。

1.CD4+T细胞识别由13〜17个氨基酸残基组成的外源性抗原肽，并

受自身MHC-II类分子限制【识别抗原肽-MHCII类分子复合物】。这类细胞

只表达而不表达按细胞不同的生物学特征还

TCRaB,TCRY8oCD4+T

可以分为不同亚类：

2.CD8+T细胞【细胞毒性T细胞(Tc/CTL)】：识另U8~12个氨基酸组成的

内源性抗原肽，并受经典MHC-I类分子限制【识别抗原肽-MHC-I类分子

复合物】。

㈡按TCR的不同类型可将T细胞分为：aB+T细胞［TCRa6T细胞

（TCRH型）】与Y3+T细胞［TCRy6（TCRI型）T细胞】

㈢按其所处的活化阶段不同，可分为：初始T细胞（Tn:从未接受过Ag

刺激的成熟的T细胞）、效应T细胞（Te）和记忆T细胞（Tm：维持机体

免疫记忆功能）。

6.试述Thl和Th2细胞的效应功能。

Thl细胞功能：①介导细胞免疫，参与抗胞内寄生菌的感染；②参

与N型超敏反应（DTH）和器官特异性自身免疫性疾病的发生；③促进

炎症反应。

Th2细胞功能：①增强B细胞介导的体液免疫应答；②在I、

n、in型超敏反应及抗寄生虫免疫中发挥作用。

7.简述CD8+CTL细胞杀伤靶细胞的机制。

细胞裂解：CTL通过释放穿孔素（Perforin,Pf）、颗粒酶（granzyme）、

颗粒溶解素（granulysin）及淋巴毒素（LTa）等物1

质直接杀伤靶细胞。

细胞凋亡：激活内源性DNA内切酶而导致的生理死亡。主要依赖于两

种机制：①CTL活化后大量表达FasL,经Fas/FasL途径引起细胞凋亡。②CTL

释放的颗粒酶，引发caspase级联反应，使靶细胞凋亡。

8.试述T细胞表面的主要膜分子及其功能。

（1）TCR-CD3复合物配体:Ag肽:MHC-I/II类分子复合物TCR-CD3

复合物是T细胞识别抗原和转导信号的主要单位。TCR特异识别由MHC分

子提呈的抗原肽，CD3是转导T细胞活化的第一信号。

⑵CD4和CD8分子（T细胞的辅助受体）配体：MHC-H/I类分子

CD4和CD8分子,lgSF成员o分别与MHCII类分子的B2区和MHC-I

类分子a3区结合。功能：①加强了T细胞与APC或者与靶细胞的相互作

用；②促进TCR识别抗原后的TCR-CD3复合物介导的信号转导作用

（3）协同刺激分子：加强APC或靶细胞与T细胞间的相互作用。为T

细胞活化提供第二信号（或称为协同刺激信号/辅助信号）。最重要的是

CD28与B7结合后由CD28转导为第二活化信号。

（4）丝裂原结合分子（丝裂原受体）：如植物血凝素（PHA）受体，刀

豆蛋白（ConA）受体，美洲商陆（PWM）受体。对T淋巴细胞有非特异的

多克隆刺激作用，使静止的T细胞活化、增殖转化为淋巴母细胞。

（5）CKR：IL-1R、IL-2R、IL-4R、IL-6R、IL-7R等

（6）MHC分子：静止的T细胞表达MHC-I类分子，活化的T细胞表达

MHC-I/H类分子。MHC分子参与T细胞对抗原的识别与应答过程。

（7）FasL：Fas与FasL结合可诱导细胞凋亡

9.简述B细胞的亚群。

根据B细胞的表面标志和功能分为B1和B2两个亚群。

㈠B1细胞（也称CD5+B细胞）

1.B1前体细胞在胚胎肝脏发生和分化后迁移到腹膜腔、胸膜腔和肠道

固有层等部位，具有自我更新能力。

2.BCR主要为mlgM3.可直接识别和结合TIAg4,产生IgM类抗

体

Bl细胞还能产生针对自身抗原的抗体（如类风湿因子RF）,与某些自

身免疫性疾病的发生有关。

㈡B2细胞：分泌Ab参与体液免疫应答的主要细胞

1.B2前体细胞起源于胚胎肝脏，但分化和发育在骨髓。2.BCR为mlgM

和mlgD,无CD5。

3.与TDAg结合发生免疫应答，需要T细胞辅助。4.产生IgG类抗体，

负责机体体液免疫。

B1细胞特点：

CD5+mlgMBZ田胞

识别碳水化合物类抗原

无需Th细胞的辅助

介导的免疫应答的特点：不发生1g的类别转换；无Ab亲和力成熟

产生低亲和力的IgM抗体；不产生免疫记忆细胞

B2细胞特点：

CD5-mlgM+mlgDB细胞

识别蛋白质抗原

需要Th细胞的辅助

介导的免疫应答的特点：

有亲和力成熟；产生高亲和力的抗体（IgG为主）；可产生免疫记

忆细胞

10.试述B细胞的功能。

⑴产生抗体，参与体液免疫应答;

中和病毒或毒素(V区)

激活补体(complement)(IgG:CH2,IgM:CH3)

结合细胞(IgG:CH3,IgE:CH2和CH3)

介导I、n、in型超敏反应

调理作用(opsonization)

抗体介导细胞依赖细胞毒作用(ADCC作用)

通过胎盘(lgG:CH2)和粘膜(SlgA),随初乳分泌

2

Ab的免疫调节作用(B细胞)

⑵递呈可溶性抗原；

⑶分泌细胞因子，参与免疫调节；

(4)免疫记忆功能

11.列表比较T细胞和B细胞的区别。

T细胞B细胞

1.分布：外周血中淋巴细胞比例60-80%10-15%

骨髓2.发育成熟的部位胸腺

3.⑴抗原受体TCR-CD3BCR-lga/|g

表⑵辅助受体CD4/CD8

CD19/CD21/CD81

面⑶细胞因子受体++

标⑷补体受体(CR1、CR2)

⑹丝裂原受体+志⑸Fc受体

FcyRH、FceRIIPWM-R、PHA-R、conA-R

PWM-R、LPS-RSPA-R

EBV-R、HCV-R⑺MHC-I、II分子静止有I类，活化有H类

分子I类、II类⑻病毒受体HIV-R、麻疹病毒受体

12.专职APC包括哪三类细胞？这三类APC摄取、加工处理和提呈抗

原的主要异同点是什么？

专职APC(professionalAPC)：包括M6、DC、B细胞。

APC摄取抗原的方式

胞饮/吞饮作用(pinocytosis)：即细胞吞入液态物质或极微小颗粒的过

程。DC能吞饮大量的胞外溶液，并有效地摄取低溶度抗原(10-10mol/L)o

M6、B细胞也有此作用。

受体介导的胞吞作用(receptor-mediatedendocytosis)：是一种特异性

很强的胞吞作用，大分子物质首先被细胞膜表面受体识别并与之结合，经

过内化并通过膜囊泡系统完成物质的转运。DC：FcyR、甘露糖受体等；M

4＞：FcR、CR、PRR等；B细胞：mlg(BCR),在Ag浓度极低的情况下也能

有效地提呈抗原。受体介导的内吞作用具有选择性、高效性和饱和性等特

点。

吞噬作用(phagocytosis)：细胞非特异性地吞入较大的颗粒或病原体

等。M6有此作用，DC处于特定的发育阶段也具有一定的吞噬功能。4.功

能细胞免疫、免疫调节体液免疫、免疫调节、提

呈抗原

3

巨噬细胞树突状细胞

抗原的

摄取抗原特异性受体

组成性，激活后升

高到

诱导性

到

可溶性抗原、

毒素、病毒

淋巴组织

外周血吞噬受细菌和细胞因子诱导到诱导性到吞噬、

巨胞饮病毒感染MHCII类分子协同刺激分子表达递呈抗原的种类

组成性组成性颗粒性抗原、多肽、变应原、病毒胞内和胞

外感染菌抗原淋巴组织淋巴组织结

缔组织、体腔结缔组织、上皮

分布

13.内源性抗原是如何通过MHC-I类分子途径被加工处理和提呈的？

内源性抗原⑴

抗原肽(8-10AA)⑵

由胞质溶胶转运到内质网腔中⑶和内质网腔中新合成的MHC-I类分

子相结合形成Ag肽：MHC-I类分子复合物，⑷表达于细胞表面供CD8+T

细胞识别。

成.

胞浆内合成的蛋白抗原

被LMP降解成8〜12个aa肽段

TAP将Ag肽转运到粗面内质网

结合MHCI类分子成复合体

移入高尔基体、细胞表面

递呈给CD8+TC细胞

14.外源性抗原是如何通过MHC-H类分子途径被加工处理和提呈的？

4

成.

⑴外源性抗原

在胞内降解成13〜18个aa的肽段⑵MHCII类分子-恒定链复

合体移行到内体/溶酶体，形成MHC此时

恒定链解离⑶MHCII类分子装载肽段

形成抗原肽-MHCII类分子复合体表达于细胞表面

递呈给CD4+T细胞。

15.请列表比较MHCI类途径与MHCH类途径加工处理抗原特点。答:

MHCI类途径MHCII类途径

⑴Ag的主要来源内源性抗原外源性抗原

⑵降解Ag(Ag加工)的部位胞质蛋白酶体溶酶体⑶处理Ag

的细胞(APC)所有有核细胞专职APC(4)Ag与MHC分子

结合部位内质网溶酶体、内体、MHC⑷提呈Ag肽的

MHC分子MHC-I类分子MHC-U类分子⑹伴随蛋白

Calnexin,TAPLi链⑺提呈Ag肽的长度8-10aa

13~17aa⑻提呈对象(应答细胞)CD8+T细胞CD4+T细

胞

16.简述Th细胞活化的“双信号”理论是什么(什么叫T细胞活化的

第一信号和第二信号)？

⑴Th细胞活化第一信号：抗原刺激信号：TCR-CD3复合受体识别并

结合抗原肽-MHC-II分子复合物并传递特异性抗原信号；CD4

结合MHC-II类分子辅助第一信号的传递。

⑵Th细胞活化第二信号：即协同刺激信号，是由APC或靶细胞表面

的协同刺激分子与Th细胞表面相应的协同刺激分子受体作用

而产生的。常见的有B7/CD28、ICAM-l/LFA-1、LFA-3/LFA-2、

VCAM-1/VLA-4等。其中B7/CD28是最重要的共刺激分子，其主要作用是

促进IL-2合成。

17.试述不同效应T细胞亚群的效应功能及其作用机制。

特异性细胞免疫的效应性T细胞种类：有两类：

5

⑴迟发型超敏反应性T细胞(TDTH,CD4+Thl),通过分泌细胞因子

发挥作用。

⑵细胞毒性T细胞(Tc,CD8+CTL),对靶细胞有特异性杀伤作用

CD4+Thl细胞介导的细胞免疫在抵抗胞内寄生菌和抗肿瘤方面发挥重

要的作用，同时伴有不同程度的组织损伤（IV型超敏反应）。

CD4+Th2细胞功能：

①增强B细胞介导的体液免疫应答；②在I、n、in型超敏反

应及抗寄生虫免疫中发挥作用。

CD8+CTL的细胞毒作用在抗胞内寄生的病原体感染、抗肿瘤以及移植

排斥反应中起重要的作用。

18.简述效应T细胞的主要功能有哪些？（细胞免疫的生物学效应有哪

些？）

⑴抗病毒等胞内寄生的病原体感染。

（2）抗肿瘤：机制：①CTL特异性杀瘤；②M6、NK的ADCC杀瘤；

③CK如TNF等直接或间接杀瘤。

⑶免疫损伤：参与IV型超敏反应、移植排斥反应和某些自身免疫性

疾病的发生。

19.简述在细胞免疫应答中，巨噬细胞与CD4+Thl细胞之间的相互作用。

巨噬细胞对Thl细胞的作用

⑴巨噬细胞可摄取、加工抗原并将抗原以抗原肽：MHCII分子复合

物的形式递呈给Th细胞，为Thl细胞活化提供第一信号。⑵巨噬细胞

表达的协同刺激分子（如B7）可与Thl表面的相应受体（CD28）结合，

为Thl细胞活化提供第二信号。

⑶活化的M6分泌IL-12,它可促使未受刺激的CD4+T细胞分化成Thl

细胞。

CD4+Thl细胞对巨噬细胞的作用

⑴活化后的Thl细胞可激活M4）：Thl细胞可通过释放细胞因子（如

IFN-y）活化巨噬细胞，还可通过其表面的CD40L与巨噬细

胞表面的CD40结合活化巨噬细胞,增强巨噬细胞的吞噬和杀菌能力。

（2）诱生并募集M6：Thl细胞召集M6可有两种途径：①Thl细胞

可产生造血干细胞生长因子如IL-3及GM-CSF,它可刺激骨髓

产生新的巨噬细胞。②活化的Thl细胞分泌TNF-a和TNF-B（淋巴毒

素），它可使炎症部位的血管内皮细胞粘附分子表达增加，而使吞噬细胞粘

附其表面，继而穿越血管壁被募集到感染灶。

20.T细胞识别抗原的特点是什么？

（DTCR细胞不能直接识别天然的抗原，只能识别APC递呈的抗原肽：

MHCI/H类分子复合物。

（2）TCR的双识别，即TCR可变区的CDR3区结合抗原肽中央的T细胞

表位，决定TCR识别抗原特异性；CDR1和CDR2区结合MHC分子的多态

区和抗原肽的两端，决定T细胞识别的MHC限制性。

⑶T细胞识别抗原受MHC限制性:CD4+T细胞受MHCU类分子限制；

CD8+T细胞受MHCI类分子限制。

（4）T细胞对抗原的识别部位是在外周免疫器官的T区。

21.简述抗原诱导初始CD8+CTL细胞激活的两种主要方式。

（1）Th细胞依赖性的

APC（靶细胞）一般低表达或不表达协同刺激分子

IL-2、IL-6、TNFa、IFN-y

CD8+T细前体细胞

）细胞

（2）Th细胞非依赖性的：APC是高表达协同刺激分子的病毒感染

DC细胞,无需TH细胞辅助，而直接刺激CD8+T细胞自身增殖并分化为CTL。

22.简述CTL杀伤靶细胞的两条主要途径及其特点。

效应Tc细胞（CTL）杀伤靶细胞的两条主要途径：

细胞裂解：CTL通过释放穿孔素（Perforin,Pf）s颗粒酶（granzyme）、

LTa及TNFa等物质直接杀伤靶细胞。

细胞凋亡：激活内源性DNA内切酶而导致的生理死亡。主要依赖于两

种机制：①CTL活化后大量表达FasL,经Fas/FasL途径引起细胞凋亡。②CTL

释放的颗粒酶，引发caspase级联反应，使靶细胞凋亡

即：攻击靶细胞细胞膜

攻击靶细胞细胞核

CTL杀伤靶细胞的特点：CTL可高效、连续、特异性地杀伤靶细胞，且

受MHC-I类分子限制，而不损伤正常组织。

23.简述B细胞对TD-Ag活化的双信号是什么？

（1）B淋巴细胞活化第一信号：BCR-lga/|g8复合受体特异性结合抗原

的B细胞决定基，传递抗原特异性信号。CD21/CD19/CD81/CD2256

辅助第一信号的传递

⑵B淋巴细胞活化第二信号：B细胞上的CD40分子和活化的T细胞

表达的CD40L结合为B细胞激活的第二信号。

24.试述在对TD-Ag的体液免疫应答中，Th与B细胞之间的相互作

用？

Th细胞对B细胞应答的作用表现在：（即：Th细胞是如何辅助B细胞

的免疫应答）

⑴Th细胞为B细胞活化提供第二类信号：CD40L-CD40o

（2）激活的Th细胞（主要是Th2细胞）分泌多种CK（IL-2、4、5、6、

13,IFNY、TGF-B等）可辅助B细胞活化、增殖分化以及

1g类别转换。

B细胞对Th细胞的作用表现在：为T细胞活化提供双信号，即：

⑴B细胞作为APC激活Th,BCR结合抗原，摄入加工并处理，与MHC

-II类分子结合后表达于细胞表面，提呈给TCR,提供Th

活化的第一信号。

（2）B细胞的B7与T细胞的CD28结合等第二信号。

25.简述体液免疫应答的生物学效应有哪些？

⑴防御作用：主要参与清除胞外微生物、防止胞内微生物感染的播

散，方式有：

①中和作用一一中和毒素、中和病毒；②调理作用；

③CDC；④ADCC；⑤通过胎盘（IgG）、黏膜（SlgA）＞随

初乳分泌

⑵免疫病理损伤作用一一I、II、III型超敏反应和某些自身免疫性

疾病

⑶免疫调节作用一一Ab的反馈调节

26.请列表比较抗体产生的初次免疫应答和再次免疫应答的特点

临床意义：⑴制定最佳免疫方案用于制备免疫血清或进行预防接种;

⑵检测IgM可作为早期诊断；

⑶以抗体增长效价（一般是呈4倍增长率）作为此次感染的依据。

27.简述Tl-Ag诱导的体液免疫应答的特点是什么？

不需要Th细胞辅助，可直接激活B细胞。

无1g类别转换（诱导产生以IgM为主的亲和力较低的抗体）。

无抗体亲和力成熟。

无免疫记忆形成（因此无再次IR）。

28.青霉素引起的过敏性休克属于哪一型超敏反应？简述其发病机制

与防治原则。

⑴青霉素引起的过敏性休克属于I型超敏反应。其发病机制如下：

⑵青霉素本身为小分子物质，不具有免疫原性。但其降解产物青酶

睡喋醛酸、青酶烯酸可与血浆蛋白结合成新抗原（青霉喔喋蛋白、青霉烯

酸蛋白），刺激机体产生抗体IgE,IgE吸附于嗜碱性粒细胞表面，使机体处

于致敏状态。

⑶再次接触青霉素时，青霉睡噗蛋白、青霉烯酸蛋白与嗜碱性粒细

胞表面IgE结合，引起嗜碱性粒细胞活化并释放生物活性介质（如组胺等）;

生物活性介质引起毛细血管扩张，通透性增加，血浆外渗，有效血容量减

少因而出现休克。

（4）防治原则：通过询问病史和皮肤试验来确定青霉素是否为变应原。

青霉素皮试阳性禁止使用，皮试阴性在使用过程中密切观察病人情况，若

发生过敏反应，可考虑用药物治疗如肾上腺素等。

29.B细胞对TD、2-1、TI-2抗原免疫应答有何异同?

7

TD抗原Tl-l抗原TI-2抗原

结构

产生的抗体

Th细胞辅助

激活T细胞能力

蛋白质，具多种抗原决定簇

多种，以IgG为主需要

B细胞决定簇和B细胞丝裂原

IgM为主不需要

无

多个重复的抗原决定簇，呈线性排列IgM为主不需要

无

APC加工处理

识别的细胞

MHC限制性

有需要

B2细胞有有

不需要

B2细胞无无

不需要

B1细胞、B2细胞

30.吸入花粉引起的支气管哮喘属于哪一型超敏反应？简述其发病机

制与防治原则。⑴吸入花粉引起的支气管哮喘属于I型超敏反应，起发

病机制如下：

⑵初次吸入花粉，刺激机体产生特异性的IgE；IgE吸附于肥大细胞表

面，使机体处于致敏状态。

⑶再次吸入花粉，花粉变应原与肥大细胞表面IgE结合，引起肥大细

胞活化并释放生物活性介质（如组织胺等），生物活性介质引起支气管平

滑肌收缩因而出现支气管哮喘。

（4）防治原则：通过询问病史和皮肤试验来确定花粉是否为变应原。

如果症状不明显的，可考虑用药物治疗如苯海拉明、扑尔敏、糖皮质激素

等。对已查明的花粉变应原，还可用小剂量变应原间隔一周左右反复皮下

注射可防止疾病复发。31.试述I型超敏反应的防治原则有哪些？防治

原则主要有三点：

1、寻找变应原，避免与变应原接触，可通过询问病史和皮肤试验来

确定变应原。2、脱敏注射和减敏治疗：

（1）在注射抗毒素血清时，如遇皮试阳性者，可采用小剂量、短间

隔，连续多次注射抗体，防止I型超敏反应的发生，这种

方法称脱敏注射方法。

（2）减敏治疗常用于外源性哮喘及尊麻疹。以小剂量变应原间隔

一周左右反复皮下注射可防止疾病复发。3、药物治疗：用药物切断或干

扰I型超敏反应中的某个环节，可防止或减轻反应的发生。

（1）抑制生物活性介质释放：例如色昔酸二钠、肾上腺素、异丙基

肾上腺素、麻黄碱、氨茶碱等。(2)活性介质拮抗药：例如苯海拉明、

扑尔敏、异丙嗪等。

(3)其他：糖皮质激素可降低毛细血管通透性，抑制迟发相炎症反

应的作用；钙制剂可缓解痉挛，降低毛细血管通透性，减少

渗出。

32.简述II型超敏反应的发生机制？

抗体与细胞表面抗原结合，或抗原抗体复合物吸附于细胞表面；①补

体参与引起细胞溶解或损伤；②巨噬细胞吞噬杀伤靶细胞；③NK细胞通

过ADCC效应杀伤靶细胞

33.临床上常见的m型超敏反应性疾病的种类有哪些？

慢性免疫复合物病：系统性红斑狼疮(SLE)

34.在H型和ni型超敏反应性疾病的发生过程中，其参与因素有何异同?

试举例说明。

(1)相同点：都有IgG或IgM抗体的参与，IgG或IgM抗体与相应抗原

结合后引起一系列的免疫反应。

(2)不同点：在H型超敏反应中，IgG或IgM抗体与靶细胞膜表面相应

抗原结合后，通过激活补体引起靶细胞的溶解破坏；或其

8

再次应答反应

无无

Fc段与NK细胞表面的受体结合后，调理吞噬和(或)ADCC效应溶解、

破坏靶细胞；补体在该型疾病中的作用主要是破坏靶细胞。而m型超敏反

应中，IgG或IgM抗体与血液循环中的可溶性抗原结合后，形成可溶性抗

原一抗体复合物，沉积于组织引起机体损伤；补体的作用主要是促使肥大

细胞或嗜碱性粒细胞释放组胺等炎性介质，使毛细血管通透性增高。n型

超敏反应性疾病如肺出血肾炎综合征，该病产生针对基底膜抗原的自身

IgG类抗体。肺泡基底膜和肾小球基底膜间有共同抗原，该抗体可于两种

组织的基底膜结合，通过激活补体或调理作用，导致肺出血和肾炎。in型

超敏反应性疾病如链球菌感染后肾小球肾炎，链球菌感染后产生抗体，该

抗体与链球菌可溶性抗原结合形成循环免疫复合物，沉积于肾小球基底膜,

引起免疫复合物型肾炎。

35.n型和ni型超敏反应的发生过程中，其参与成分有何异同？

相同点：抗体与补体参与

不同点：n型超敏反应：抗体与靶细胞表面相与抗原结合后，在补体、

M。、NK参与下，引起细胞的溶解破坏。

m型超敏反应:抗体与抗原结合成可溶性免疫复合物,ic沉积于局部，

通过补体、血小板、中性粒细胞引起组织损伤

小结：

36.简述常用的人工免疫制剂。

用于人工主动免疫的制剂有：灭活疫苗/死疫苗、减毒活疫苗、类毒

素。

用于人工被动免疫的制剂有：

⑴抗毒素：如白喉抗毒素（DAT）、破伤风抗毒素（TAT）、气性坏疽多

价抗毒素、肉毒抗毒素等;

⑵人免疫球蛋白制剂：包括血清丙种球蛋白和胎盘丙种球蛋白。肌内

注射这类制剂主要用于甲型肝炎、麻疹、脊髓灰质炎、乙型脑炎等病毒性

疾病的应急预防，也可用于治疗丙种球蛋白缺乏症。特异性人血清免疫球

蛋白是由恢复期病人血清或经疫苗高度免疫的人血清提取而制成的。常用

的制剂有：TIG、HBIG等，不过此类制品有传播某些疾病的可能，应用时

须谨慎。

⑶细胞因子制剂及单克隆抗体。

37.人工主动免疫与人工被动免疫的主要区别有哪些？

38.疫苗的基本要求与应用范围分别是什么？

基本要求：

⑴安全：无致病性、无致癌性、接种后无异常反应。

⑵有效：疫苗接后可诱导多数人可靠的保护性免疫（HI、Cl）,而且

维持时.间长。

⑶实用：接种方式可被不同的人群所接受，而且疫苗应易于保存运

输、价格相对低廉。

当代疫苗的发展趋势：增强免疫效果、简化接种程序、提高预防接种

效果。

应用范围：

⑴抗感染：抗感染仍是未来应用疫苗的首要任务。

⑵抗肿瘤⑵计划生育⑷防止免疫病理损伤

9

39.灭活疫苗（死疫苗）与减毒活疫苗的比较。

灭活疫苗概念：是选用免疫原性强的病原体，经人工大量培养后，用

理化方法灭活制成的预防制剂。

特点：接种剂量大，次数多，多用皮下注射；注射局部和全身反

应较重；免疫效果较活疫苗差，具有一定的局限性；但

死疫苗具有安全、生产方法简单、易于保存和运输等优点。

减毒活疫苗概念：是用减毒或无毒力的活的病原微生物制成的预防制

剂。

特点：一般只需接种一次，接种剂量少；接种后局部和全身反应轻;

免疫效果好，作用时间长久；安全性低于死疫苗；保存条

件比死疫苗要高；免疫缺陷患者和孕妇一般不宜接种减毒活疫苗。

40.能够与抗原结合的免疫分子有哪些，它们结构上有何共同点？

能够与抗原结合的免疫分子有5种，即：Ab、TCR、BCR、MHC-I类

分子、MHC-II类分子

它们都属于IgSF成员，在结构上的共同点是：除Ab为游离的免疫分

子外，其余4种均为膜型免疫分子（由三个部分组成，即：胞膜外区、跨

膜区和胞浆区组成），胞膜外区的结构与抗体相似，均是两条肽链组成，

由二硫键相连，含有可变区（V区）与恒定区（C区），V区是与抗原发生

特异性结合的部位。

41.简述抗体在超敏反应中的作用

I型超敏反应：IgE介导，通过IgE桥联使肥大细胞、嗜碱性粒细胞释

放生物活性介质而引起的病理性免疫反应。

II型超敏反应：IgG、IgM介导，结合细胞性抗原，在补体、吞噬细胞

和NK细胞参与下，引起以细胞溶解或组织损伤为主的病理性免疫反应。

III型超敏反应：IgG、IgM类抗体与相应的抗原结合形成中等大小的免

疫复合物并沉积于局部，通过激活补体和在血小板、嗜碱性、嗜中性粒细

胞参与作用下，引起炎症反应和组织损伤。

42参与I型超敏反应的细胞有哪些？各有何作用？

⑴APC：提呈变应原给CD4+Th细胞，并诱导CD4+Th细胞活化。

⑵CD4+Th细胞：帮助B细胞活化、分化为浆细胞。

⑶B细胞：分泌抗体IgE

（4）肥大细胞和嗜碱性粒细胞：释放多种生物活性介质而引起过敏反

应。

⑸嗜酸性粒细胞：对I型超敏反应有负反馈调节作用

43.具有杀伤作用的淋巴细胞有哪些？试述它们的杀伤机制有何不

同？

Tc：分泌穿孔素和细胞毒素，Fas+FasL导致细胞凋亡

NK：非特异性杀伤，ADCC,穿孔素等

LAK：广谱杀伤肿瘤细胞，类似NK细胞

TIL：特异性杀伤肿瘤细胞，类似Tc细胞

44.简述ELISA的原理。

抗原或抗体吸附到固相载体表面，仍保持其免疫活性；抗原或抗体

与酶结合后仍保持其免疫活性和酶的催化活性；酶与相应底物结合，催化

底物水解、氧化或还原，产生有色物质，颜色深浅与Ag或Ab量成正比；

借助颜色深浅定量Ag或Ab。

45.免疫荧光法的原理。

抗原与未标记的相应抗体（第一抗体）结合；再加入荧光标记的抗免

疫球蛋白抗体（第二抗体）；抗原抗体特异性结合，形成“抗原一抗体一

荧光抗抗体复合物”，在荧光显微镜下发出荧光。

46机体是通过哪些方式清除进入体内抗原？

机体清除抗原性异物的方式有：

⑴非特异性免疫：通过屏障结构、NK细胞的非特异性杀伤、吞噬细

胞的吞噬作用以及正常组织及体液中的抗微生物物质的作用，

可将抗原性物质全部或部分破坏并清除.......3分

（2）体液免疫：通过抗体，方式有：中和作用、调理作用、ADCC、CDC、

免疫黏附等

⑶细胞免疫：清除抗原性异物的方式有两种：

①CTL可以直接杀伤带有抗原的靶细胞，也可以引起靶细胞凋亡

②CD4+Thl可通过释放细胞因子，增强M6的功能，吞噬破坏抗原

性异物；也可通过增强NK细胞的活性清除抗原性异物

47机体是通过哪些方式获得免疫的？

机体特异性免疫的获得方式：

10

自然免疫自然主动免疫：患传染病或隐性感染

自然被动免疫:通过胎盘（IgG）或初乳（SlgA）

人工免疫

48简述免疫应答的类型（固有性免疫应答与适应性免疫应答）与主

要特点

固有免疫(innateimmunity)：又称为天然免疫、先天性免疫或非特异

性免疫(non-specificimmunity)

概念：是生物在长期种系进化过程中形成的天然防御功能，是机体抵

抗病原微生物入侵的第一道防线，也是特异性免疫的基础。组成：

⑴(皮肤黏膜的)屏障结构；⑵(体内多种)固有免疫应答细

胞(M-M6、DC、NK、NKT等)

⑶(正常组织和体液中的)抗菌物质(如补体、溶菌酶、乙型溶素

等)

识别方式：模式识别受体(PRR)-病原相关分子模式(PAMP)

效应能力：固有

特点：

⑴无特异性，作用广泛；⑵先天具备；

⑶初次与抗原接触即能发挥效应(迅速)，但无记忆性；⑷可稳

定遗传；

⑸同一物种的正常个体间差异不大；⑹在感染早期执行防御功

能。

适应性免疫(adaptiveimmunity)：又称后天免疫、获得性免疫(acquired

immunity)或特异性免疫(specificimmunity)o

概念：是指机体出生以后，在生活过程中与(病原微生物及其代谢产

物等)特定的抗原物质接触以后而获得的具有针对性的免疫。种类：⑴

T细胞一细胞免疫(cellularimmunity,Q)⑵B细胞一体液免疫(humoral

immunity,HI)

识别方式：抗原受体-抗原效应能力：克隆增殖后形

成

特点：⑴特异性；⑵获得性(后天产生)；⑶记忆性；⑷可传递

性；⑸耐受性与自限性；⑹在感染后5〜7天才发挥作用(有潜伏期)

49简述医学上重要的抗原物质的种类有哪些？

⑴病原微生物；⑵细菌的外毒素与类毒素；⑶动物免疫血清：对

人来说，既是抗原又是抗体。

⑷异嗜性抗原；⑸同种异型抗原：ABO血型抗原、RH血型抗原、HLA

⑹自身抗原(autoantigen)：可诱导自体发生特异性免疫应答的自身成

分称为自身抗原。⑺变应原(allergen)；

⑻肿瘤抗原(tumorantigen)：细胞癌变过程中出现的新抗原或过度表

达的抗原物质的总称。

⑼超抗原(superantigen,SAg)

5O.SAg与常规Ag有何区别。

超抗原普通抗原

化学性质细菌外毒素、普通

蛋白质、

逆转录病毒蛋白多糖等

与MHCH类分子结合部位非多肽区多肽区肽

结合槽

与TCR结合部位VB区a链V-J

区,

B链V-D-J区

MHC限制性

应答特点直接刺激T细胞经APC处

理后被T细胞识别

反应细胞CD4+T细胞T、B细胞

T细胞反应频率1/20-1/51/106-1/104

51.简述影响抗原免疫应答的主要因素。

㈠抗原方面的因素（外因）

1-异物性（foreignness）：是免疫原的核心，是抗原免疫原性的首要

条件。有二层含义：⑴与宿主自身组织成分相异；⑵机体免疫活性细胞

（ICC,即T、B细胞）从未接触过的物质。对异物的识别是机体在发育过

程中通过淋巴细胞与抗原接触而形成的“非己即异”的免疫识别功能，一

般在胚胎期接触过的物质视为“自身”物质，而从未接触过的视为“异物”。

异物性包括：

⑴异种物质：如病原微生物、动物免疫血清等。一般来说，抗原

与机体之间的亲缘关系越远，组织结构差异越大，异物性越强，其免疫原

性就越强。

11

（2）同种异体物质：如ABO血型、Rh血型、MHCo

⑶改变或修饰的自身抗原或免疫隔离部位抗原释放（或称：隐蔽

Ag释放）。

因此，从免疫学角度来看，异物性不是专指体外物质而言，而是以ICC

在胚胎期是否曾经与之接触过而决定的。2.抗原分子的理化性质

⑴化学性质：一般蛋白质抗原的免疫原性强，核酸和多糖的抗原性

弱，脂质一般没有抗原性。

⑵分子量大小（高分子物质）：一般分子量大于10KD免疫原性较强,

在一定范围内分子量越大免疫原性越强。

⑶结构的复杂性：苯环氨基酸能增强抗原的免疫原性。一般来说,

环状分子蛋白质的免疫原性强于直链分子蛋白质。

（4）分子构象（抗原分子的构象决定了抗原决定基能否与相应B淋巴

细胞抗原受体结合）和易接近性（是指抗原表位能否被淋巴细胞抗原受体

所接近的程度；即决定免疫原性的结构一抗原表位必须暴露于抗原分子表

面，易于被TCR、BCR接触才能呈现免疫原作用）。（BCR易接近的抗原决

定基免疫原性强）。

⑸物理状态：一般聚合状态的蛋白质较其单体免疫原性强，颗粒性抗

原强于可溶性抗原。

㈡宿主方面的因素（内因）

遗传因素（MHC、TCR和BCR库）

年龄（青壮年对抗原的应答能力高于幼年和老年）

性别（女性较男性生成抗体高）

健康状态（健康状态好，反应强）和心理状态以及IS功能正常与否有

关。

㈢抗原进入机体的途径（免疫方法）

剂量（需适中，过强或过弱均能引起耐受）

途径（皮内>皮下>肌肉>静脉、腹腔，一般不用口服）

两次免疫间的时间间隔（适中，不能太频繁）

次数（加强免疫）以及免疫佐剂的选择都有关。

52.简述免疫球蛋白的功能？

IgV区的功能：识别并特异性结合抗原一一1g分子的主要功能

Ag-Ab结合

体内：生理效应：中和细菌的外毒素、中和病毒（阻断病毒入侵）

—Ab的中和作用

病理效应：I、n、in型超敏反应

体外：各种抗原抗体反应，用于临床辅助诊断

㈡IgC区的功能

（1）激活补体一依赖补体的细胞毒作用（complement-dependent

cytotoxicity,CDC）

lgGl,lgG2JgG3,lgM通过经典途径激活补体

聚合IgA,lgG4,IgE通过替代途径激活补体

⑵结合细胞表面Fc受体，发挥多种生物效应

①调理作用（opsonization）：是指抗体、补体（C3b、C4b等调理素）

促进吞噬细胞吞噬细菌等颗粒性抗原的作用。

调理素（opsonin）：是指血清中能够促进吞噬作用的物质。

IgG、IgM、IgA的Fc段与吞噬细胞表面的FcYR、FcHR、FeaR结合，

增强其吞噬能力，通常将抗体促进吞噬细胞吞噬功能的作用称为抗体的调

理作用。

②抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）

ADCC：是一种细胞毒反应，指表达FcR的具有杀伤活性的细胞（如

NK、M-M6）通过识别Ab的Fc段直接杀伤被抗体包被的（带有Ag的）

靶细胞（病毒感染

细胞、肿瘤细胞、同种异体移植物）。

③介导I、II、IH型超敏反应

IgE的Fc段与肥大细胞及嗜碱性粒细

胞的FeeR结合，可诱发|型超敏反应；

IgG、IgM可参与n、m型超敏反应。

（3）通过胎盘（lgG:CH2）和粘膜（SlgA）,

随初乳分泌（SlgA）婴儿的天然免疫、局部免疫

（4）Ab的免疫调节作用。

12

总结：抗体的生物学功能

结合特异性抗原……中和病毒或毒素（V区）

激活补体（complement）（IgG:CH2,IgM:CH3）

结合细胞（IgG:CH3,IgE:CH2和CH3）Fc段与Fc受体结合

介导I、II、III型超敏反应

调理作用（opsonization）

抗体介导细胞依赖细胞毒作用（ADCC作用）

通过胎盘（lgG:CH2）和粘膜（SlgA）,随初乳分泌

Ab的免疫调节作用(B细胞)

53.免疫球蛋白的FC段是用什么酶切断的？它有何功能？

木瓜蛋白酶

⑴激活补体(lgG>IgM)；

⑵结合细胞(FcR)M-M6、N调理作用

NKADCC

IgE+Mc./Baso,I型超敏反应

B细胞免疫调节

⑶通过胎盘(IgG)

54.免疫球蛋白分哪五类？各类免疫球蛋白有何主要特点？

根据1g重链抗原性的差异，1g可分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。

IgG:

血清中含量最高，占总lg的75%~80%

再次应答的主要抗体

具有多种功能

与SPA结合

抗感染的主要抗体

IgM:

分子量最大的1g

最早出现的1g

初次应答的主要抗体

近期感染的指标

mIgM是B细胞抗原受体

无钱链区

IgA:

分泌型和血清型

slgA为二聚体

初乳中含slgA

在局部抗感染中发挥重要作用

IgE:

含量最少

介导I型超敏反应

无钱链区

IgD:B细胞成熟的标志

55.抗体参与的介导靶细胞溶解的机制有哪些？

CDC、ADCC、调理吞噬

56.细胞因子的分类及生物学活性有哪些？

根据结构和功能，细胞因子可分为：

1-白细胞介素(interleukin,ILs)：是指由白细胞产生又在白细胞间起

调节作用的细胞因子。13

2.干扰素(interferion,IFN)：由病毒或干扰素诱生剂刺激人或动物

有核细胞产生的糖蛋白。具有抗肿瘤、抗病毒及免疫调节的作用。

3.肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)：是一类能使肿瘤发生

出血、坏死的细胞因子。

4.集落刺激因子(colony-stimulatingfactor,CSF)：指能刺激多能造

血干细胞和不同发育分化阶段的造血祖细胞增殖、分化的细胞因子。也称

造血生长因子。

5.趋化性细胞因子(chemokin)：其主要作用是招蓦血液中的单核细

胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入感染发生的部位。

6.生长因子(growthfactor,GF)：具有刺激细胞生长作用的CK。

细胞因子的生物学活性

㈠调节固有免疫应答

㈡调节适应性免疫应答

1.B细胞：

⑴促进B细胞活化、增殖与分化：IL-4、5、6、10、13et.al

⑵CK在1g类别转换中的作用(P131)

IL-2、4、5IgM；IL-2、4、6、IFNYIgG

IL-5、TGFBIgA；IL-4>13IgE

2.T细胞：

⑴CK对Thl、Th2细胞的调节作用

⑵促进CTL的分化并增强其杀伤功能：IL-2、6,TNFa,IFNY

㈢刺激造血(CSF,EPO,etal)

㈣参与炎症反应(IL-1,6,TNFa,|L-8,etal)

⑴促进炎症细胞渗出与趋化；(2)活化炎症细胞：⑶致热并

参与炎症病理损害；

(五)促进凋亡，直接杀伤靶细胞;(六)促进创伤的修复：TGF

B、VEGF、FGF、EGF。

57.简述细胞因子作用的方式及特点。

CK的生物学作用特点：

①通过结合细胞表面的高亲和力受体发挥生物学作用；

②通过自分泌、旁分泌或内分泌(IL-1、IL-6、TNFa)的方式发挥作

用；③CK的生物学效应表现为：多效性、重叠性、拮抗性和协同性；④非

特异性，无MHC限制性、高效性、短效性。⑤CK因子的作用具有网络

性

血清学反应

血清学反应(serologicalreaction)

免疫血清学技术的类型

1凝集试验直接凝集试验、间接凝集试验、乳胶凝集试验

2沉淀试验环状沉淀试验、絮状沉淀试验、琼脂扩散试验、免疫

电泳

3补体参与的试验补体结合试验

4标记抗体技术

荧光抗体技术、酶标抗体技术、放射免疫测定、化学发光标记技术、

免疫电镜技术、免疫胶体金技术

5中和试验病毒中和试验

6电免疫反应免疫传感器技术

7免疫芯片技术蛋白质芯片技术

血清学反应的特点

1、抗原抗体结合的特异性与交叉性

血清学反应具有高度的特异性

同一抗原分子可具有多种不同的抗原表位，若两种不同的抗原具有一

个或多个相同（相似）的抗原表位，在与相应抗体反应时可出现交叉反应

（crossreacion）

2、抗原抗体结合的可逆性

3、抗原抗体结合的比例性与结合物的可见性

4、抗原抗体反应的阶段性

14抗原与相应抗相遇可发生特异性结合，并在外界条件的作用下出

现某种反应，如凝集或沉淀，藉此可用已知抗原（或抗体）检测未知抗体

（或抗原）。因抗体主要存在于血清中，又称为血清学反应

?第一阶段是抗原抗体的特异结合，此阶段仅需几秒到几分钟，尚无

可见反应第二阶段为可见反应阶段，需数分钟、数小时乃至数日，受各

种因素影响

凝集反应（agglutination）

凝集试验是指颗粒性抗原（细菌、细胞等）与相应的抗体，或可溶性

抗原（亦可用抗体）吸附于与免疫无关的载体，形成致敏颗粒（免疫微球）

与相应的抗体（或抗原），在有合适的电解质存在下，形成肉眼可见的凝

集小块。

——、直接凝集试验（directagglutinationtest）

颗粒性抗原与相应抗体直接结合，并出现凝集现象的试验，称直接凝

集试验。按操作方法，分为玻片法和试管法两种。1玻片法

为一种定性试验。是将含有已知抗体的诊断

血清(适当稀释)与待检菌悬液各一滴在玻片上混合，数分钟后，出

现颗粒状凝集。方便快速，用于细菌的鉴定或分型。2试管法

为一种半定量试验。用以检测待检血清中是否存在相应抗体和测定该

抗体的效价。可作为临床诊断或流行病学调查。操作时将待检血清进行倍

比稀释，然后加入等量抗原，37℃水浴数小时，观察凝集程度。

二间接凝集试验(indirctagglutination)

可溶性抗原(或抗体)先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的不溶

性颗粒表面，然后与相应的抗体(或抗原)作用，在有电解质存在的适宜

条件下，出现特异性的凝集反应。常用的载体有红细胞、乳胶、炭粉、离

子交换树脂等。可溶性抗原为细菌的裂解物或浸出液、病毒、寄生虫分泌

物或裂解物、各种蛋白等。

1间接血凝试验(indirecthemagglutinationtest)

亦称为被动血凝试验，是将可溶性抗原致敏于红细胞表面，用以检测

相应抗体。如用抗体致敏于红细胞表面，用以检测相应抗原，称反向间接

.血.凝试验(reversepassivehemagglutinationtest).

2乳胶凝集试验(Latexagglutinationtest)

3协同凝集试验(co-agglutinationtest)

覆盖有特异性抗体的金黄色葡萄球菌与相应的抗原结合时，可产生凝

集反应，称协同凝集试验.因金黄色葡萄球菌表面有SPA,能与多种动物的

IgG结合。

第三节沉淀反应(precipitationtest)

沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在合适电解质存在下，出现肉眼

可见的白色沉淀。参与反应的抗原称沉淀原，抗体称沉淀素。1环状沉

淀试验(ringprecipitationtest)

是最简单的沉淀试验，目前仍使用。在一支小口径试管内，先加入已

知抗体，然后小心沿管壁加入待检抗原叠加于抗体表面。数分钟后，液面

交界处出现白色环状沉淀。如Ascoli试验

2琼脂扩散试验

?琼脂是一种含有硫酸基的多糖，高温可溶解于水，冷却后形

成凝胶。其呈多孔结构，内充满水分，1%琼脂凝胶的孔

径有85nm。因此可允许抗原抗体在里面自由扩散。

?(1)双向双扩散(doublediffusionintwodimension)

?又称双扩散。是在1%的琼脂凝胶板上浇注2~3mm的凝胶板，在上

面打梅花孔或长方形槽，在相邻孔内加抗原或抗体，

在饱和湿度下扩散24小时，观察沉淀带。

?(2)双向单扩散(simplediffusionintwodimension)又称辐射扩

散

?(3)单向单扩散

?(4)单向双扩散

第四节免疫电泳技术

是凝胶扩散试验与电泳技术相结合的免疫检测技术。抗原抗体在凝胶

中扩散的同时，加入电泳的电场作用，使抗体或抗原的扩散移动速度加快,

缩短了实验时间。

?1免疫电泳

?2对流免疫电泳

?3火箭免疫电泳

免疫标记技术

免疫标记技术（immunolabellingtechnique）根据抗原抗体结合的特异

性和标记分子的敏感性建立的技术，称免疫标记技术。

第一节免疫荧光抗体技术Immunofluorescenceantibodytechnique

15

指用荧光素对抗体进行标记，然后用荧光显微镜观察荧光，以分析示

踪相应的抗原或抗体的方法。

1原理：

荧光素在超微浓度下，亦能被短波长光激发，在荧光显微镜下可观察

到荧光。

是将抗原抗体反应的特异性、荧光检测的敏感性以及显微镜技术的精

确性等相互结合的一种免疫检测技术。

2荧光素

为一种化学染料。常用于标记的荧光素有：异硫氟酸荧光素（FITC）、

四乙基罗丹明（RB200）、四甲基异硫鼠酸罗丹明，其中FITC最常用。

作为标记荧光素需满足的条件：

（1）有与蛋白分子形成稳定共价键的化学基团，且不形成有害产物。

（2）荧光效率高，与蛋白结合的需要量小。

(3)标记后不影响抗体的活性

(4)性质稳定，易保存

(5)激发的荧光与背景颜色有良好的反差。

(6)标记简单，能形成商品

3荧光抗体染色方法

(1)标本制备

涂片或亚印片：细菌培养物、感染动物的组织、血液、脓汁

切片：感染组织

盖玻片：上面培养单层细胞

标本要求很薄，并要保持抗原的完整性

(2)固定

常用丙酮和95%乙醇，室温固定15~30min,后用PBS反复冲洗，干后

即可染色。

固定目的：防止被检材料从玻片上脱落；消除标本内抑制抗原抗体反

应的因素；检测细胞内的抗原，用有机溶剂固定，有利于荧光抗体渗入。

(3)染色方法

有直接法和间接法两种

直接法：

A在标本上滴加2~4个单位的标记抗体，置湿盒中，37℃作用30min

B在大量PBS中漂洗15min,

C干燥

D封载滴加缓冲甘油，用盖玻片封盖

检测中，要设阳性、阴性标本对照

缓冲甘油：分析纯甘油9份加PBS1份