高中生物实验专项讲义

基础实验专题

补初中实验：显微镜的使用

一、光学显微镜的结构、呈像原理、放大倍数计算方法

1.目镜越长，放大倍数越小；物镜越长，放大倍数越大。

2.呈像原理：映入眼球内的是倒立放大的虚像。

3.放大倍数：目镜和物镜二者放大倍数的乘积。

注：显微镜放大倍数是指直径倍数，即长度和宽度，而

不是面积。

镜

物

物

我

二、显微镜的使用：台

通

光

置镜（装镜头）一对光一置片一调焦一观察孔

逵

光a

压

片

1.安放:放于水平桌面，光线充足处。夹

2.对光：选低倍镜一选较大的光圈一选反光镜（左眼观

察）

注：调节视野亮度只可用遮光器和反光镜。

3.观察侧面观察降镜筒一左眼观察找物像一细准焦螺

旋调清晰显微镜的结构

4.低倍转高倍：顺序：移装片一转动镜头转换器一调反光镜或光圈一调细准焦螺旋

注：换高倍物镜时只能移动转换器，换镜后，只准调节细准焦和反光镜（或光圈）。

5.装片的制作和移动：制作：滴清水一放材料一盖片

移动：物像在何方，就将载玻片向何处移。（原因：物像移动的方向和实际移动玻片的方向相

反）

6.污点判断：

1）污点随载玻片的移动而移动，则位于载玻片上；

2）污点不随载玻片移动，换目镜后消失，则位于目镜；换物镜后消失，则位于物镜；

8.高倍镜与低倍镜的比较

物像大小看到细胞数目视野亮度物镜与玻片距离视野范围

高倍镜大少暗近小

低倍镜小多亮远大

实验一观察DNA、RNA在细胞中的分布

一、实验原理：

1.甲基绿和口比罗红（又名派洛宁）两种染色剂（均为基性染液）对DNA和RNA的亲和力不

同，甲基绿使DNA呈现绿色，毗罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、毗罗红混合染色剂将细

胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。

2.盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞；同时使染色体中的DNA和蛋白质

分离，有利于DNA与染色剂结合。

二、方法步骤：

操作步骤注意问题解释

载玻片要洁净；滴一滴质量分数为0.9%的防止污迹干扰观察效果；保持细胞原有

取口腔上皮NaCl溶液，用消毒牙签在自己漱净的口腔内形态。

细胞制片侧壁上轻刮几下取细胞，将载玻片在酒精灯消毒为防止感染，漱口避免取材失败

下烘干固定装片

改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细

将烘干的载玻片放入质量分数为8%的盐酸

水解胞，促进染色体的DNA与蛋白质分离而

溶液中，用30°C水浴保温5min

被染色

冲冼涂片用蒸储水的缓水流冲洗载玻片10s洗去残留在外的盐酸，避免与染液反应

滴2滴吐罗红甲绿染色剂于载玻片上染色

染色

5min

先低倍镜观察，选择染色均匀、色泽浅的区

观察域，移至视野中央，调节清晰后才换用高倍使观察效果最佳

物镜观察

实验二检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质

一、还原糖显色反应

1.实验原理：可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖）与斐林试剂或本尼迪特试

剂（班氏试剂）剂发生作用，可生成砖红色的CU2。沉淀。如：

葡萄糖+Cu（OH）葡萄糖酸+Cu20I（砖红色）+H20,即CU（OH）2被还原成

Cu20,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。

2.实验试剂

斐林试剂：甲液：0.1g/mLNaOH溶液，乙液：0.05g/mLCuSO”溶液。

由于甲液与乙液反应剧烈，不稳定，故此试剂需要现用现配。

本尼迪特试剂：由柠檬酸钠、无水碳酸钠和硫酸铜混配而成，试剂化学性质较为稳定，可

存放备用并长久保存。

3.实验材料：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜（实验材料无色或者近乎无色,避免对最终

实验现象的干扰。）

4.方法步骤：

操作方法注意问题解释

1.制备组织样液。苹果或梨组织液必须临因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很

（去皮、切块、研磨、过滤）时制备。易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。

2.取2支试管，分别向试管

区分实验组及对照组

内注入2mL组织样液及清水。

3.向2支试管内分别注入1mL应将组成斐林试剂的斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保

新制的斐林试剂，振荡。甲液、乙液分别配制、储存时，生成的Cu(OH)z在70〜90℃下分

存，使用前才将甲、乙液解成黑色CuO和水；

等罩混匀成斐林试剂

用试管夹夹住试管上部；

4.试管放在盛有50-65°C温

使试管底部不触及烧杯使试管内液体受热均匀

水的大烧杯中，加热约2分钟，

底部并且烧杯内热水要防止试管内的溶液冲出试管，造成烫

观察到溶液颜色：浅蓝色T

超过试管内液面的高度；伤；

棕色T砖红色(沉淀)

试管□不朝向实验者。

特别注意：

(1)本实验采用了水浴加热进行处理，目的是为了加快化学反应，能够在很短(2min)的

时间内出现砖红色沉淀的现象。

(2)本实验也可以不采用加热处理，在室温(24℃)条件下进行，但是最终出现砖红色沉

淀所需时间大约为50mino

(3)对于此显色实验，随着水浴加热温度的提高，砖红色出现的时间会明显缩短。以梨汁

为例，在温度为75℃、90℃、100℃时，砖红色出现的时间分别为Imin,38s,24s。

二、脂肪的显色反应

1.实验原理

脂肪+苏丹川—►橘黄色脂肪+苏丹IV—＞红色

注意：苏丹燃料的特性

(1)苏丹川、苏丹IV为脂溶性染液，不溶于水。具有一定的毒性。

(2)脂肪和苏丹染液有比较强的亲和力，苏丹川(IV)遇脂肪变橘黄(红)色，即萃取原理。

(3)苏丹(IV)与处于液态或半液态的脂肪染色效果最好，可以适当提高温度至37-60℃。

2.实验材料：富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡:T4小时，制成花生

切片。

3.也可用菌麻种子或花生直接制成匀浆，匀浆液的显色反应不需要用显微镜观察。

4.操作步骤

(1)方法一:

操作方法注意问题解释

时间过短，不易切片，时间过长，组

花生种子浸泡、制片浸泡3~4小时

织较软，不易成形。切薄，便于观察。

在子叶薄片上滴2〜3滴苏丹III苏丹III-橘黄色

染色时间不宜过长。

或苏丹IV染液，染色1分钟。苏丹IV染液一红色

用吸水纸吸去薄片周围染液，用

不去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的

50%酒精洗去浮色,吸去酒精。滴

观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可

上1滴蒸储水，盖上盖玻片，制成

将脂肪颗粒溶解成油滴。

临时装片。

低倍镜下找薄片的最薄处，可看到

装片不宜久放。时间一长，油滴会溶解在乙醇中。

有染成橘黄色或红色圆形小颗粒

注意：花生切片要尽量的薄一些，否则光线将不能充分透过切片进入视野中，观察模糊不清。

(2)方法二：取2支试管，分别注入2ml组织样液和清水；向2支试管中加入3滴苏丹III

或苏丹IV染液，震荡混合均匀后，观察两支试管被染色的情况即可。

三、蛋白质显色反应(定性及定量分析)

1.实验原理:蛋白质与双缩JR试剂发生作用，产生紫色反应。(蛋白质分子中含有很多肽键，

在碱性NaOH溶液中能与双缩胭试剂中的Cu"作用，产生紫色反应。)至少三肽方可发生反

应。

注意：

(1)在一定的蛋白质浓度范围内，颜色深浅与蛋白质含量呈线性关系(正相关)，故可用

比色法来测定样液中蛋白质的浓度。

(2)由于双缩版试剂不与氨基酸发生反应，故也可以用来检测蛋白质是否彻底水解。

2.实验材料：新鲜豆浆、牛奶、蛋清

3.实验试剂

双缩JR试剂：A液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液，B液：质量浓度为0.01g/mLCuS04

溶液，现用现配。使用时先加A液，混合均匀后加入B液。

4.方法步骤：

操作方法注意问题解释

制备组织样液。容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节

黄豆浸泡1至2天

(浸泡、去皮研磨、过滤。)约实验时间。

鉴定：加样液及清水约2ml

A液和B液要分开配先加NaOH溶液，为Cu"与蛋白质反应

于试管中，加入双缩版试剂

制，储存。鉴定时先加提供碱性的环境。A、B液同时加入，会导

A,摇匀；再加入双缩JR试剂

A液后加B液。致Ci?’变成Cu(0H)2沉淀，而失效。否则

B液3〜4滴，摇匀，溶液变紫

CuS0溶液不能多加。CuS0的蓝色会遮盖反应的真实颜色。

色。44

若稀释不够，蛋清粘在试管壁，与双缩胭

可用蛋清代替豆浆。蛋清要先搅匀稀释。试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应

不彻底，且试管也不易洗干净。

实验三用高倍镜观察线粒体和叶绿体

一、实验原理：

1.叶绿体的辨认依据：叶绿体是绿色的，呈扁平的椭圆球形或球形。植物细胞的绿色部位由

叶绿体内的叶绿色决定。

2.线粒体辨认依据：线粒体无色，且形态多样，有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。

健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中线粒体呈现蓝绿色。

二、实验材料

1.观察叶绿体选材：辞类的叶、黑藻的叶。取这些材料的原因是：叶子薄而小，叶绿体清

楚，可取整个小叶直接制片，所以作为实验的首选材料。

注意：若用菠菜叶作实验材料，要取菠菜叶的下表皮并稍带些叶肉。因为表皮细胞不含叶

绿体。

2.观察线粒体选材：口腔上皮细胞。无色，易于取材。不能用植物细胞，因为植物根细胞不

易获得，取材及实验处理繁琐；而叶肉细胞含有叶绿体，造成观察上的障碍。

四、方法步骤：

步骤注意问题分析

1.制片。用镶子取一片黑藻否则细胞或叶绿体失水收

制片和镜检时，临时装片要随时

的小叶，放入载玻片的水滴缩，将影响对叶绿体形态和

保持有水状态

中，盖上盖玻片。分布的观察。

2.低倍镜下找到叶片细胞

3.高倍镜下观察叶绿体的形

态和分布

4.制作人的口腔上皮细胞临在洁净载玻片中央滴一滴健那绿为确保观察效果，需要用油

时装片染液一用牙签取碎屑一盖盖玻片镜。

5.观察线粒体线粒体蓝绿色，细胞质接近无色。

注意事项：

1.观察线粒体时，显微镜下的蓝绿色颗粒不能完全确定为线粒体，也可能是好氧细菌。

2.细胞质基质中的叶绿体在不同光照条件下可以运动，这种运动能随时改变椭球体的方向，

使叶绿体既能接受较多光照，又不至于被强光灼伤。

3.叶绿体的形态和分布都有利于接受光照，完成光合作用。如叶绿体在不同光照条件下改变

方向。又如叶子上面的叶肉细胞中的叶绿体比下面的多，这可以接受更多的光照。

实验四观察植物细胞的质壁分离和复原

一、实验原理：

1.成熟的植物细胞的原生质层（细胞膜、液泡膜、两层膜之间细胞质）相当于一层半透膜;

细胞液具有一定的浓度，能够渗透失水和吸水；原生质层的伸缩性大于细胞壁的伸缩性。

2.材料用具：紫色洋葱外表皮，0.3g/ml蔗糖溶液，清水，载玻片，镶子，滴管，显微镜等

实验材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞、黑藻叶片、大蒜鳞叶

3.选材需满足的条件：①活细胞②成熟的植物细胞（有大液泡）③易于撕取获得

单层细胞④显微镜下易于区分原生质层和细胞壁

（1）关于实验材料选择的事项：

在光学显微镜下，细胞中有颜色的位置更容易观察，因此，含有色素的植物细胞成为该实

验的首选材料。通常情况已植物组膻所含有的色素主要存在于叶绿体和液泡中。

（2）具体分析两类可供选择的实验材料：

①洋葱鳞片叶外表皮：具有比较明显的紫色大液泡，原生质层无色，可以清晰的观察到液泡

大小的变化。

②黑藻叶片：有液泡，但是细胞液无色；叶绿体分布在原生质层中，使原生质层呈现绿色。

有色的原生质层与外界的无色溶液及内侧液泡中无色的细胞液形成鲜明对比，容易观察到壁

纸分离现象，并且可以观察到液泡体积的变化。

总结：实验材料选择的原则是细胞液中含有可溶性色素或原生质层中含有有色物质（两种情

况满足其中一种即可）。若细胞液和原生质层均无色，还需在外界溶液中添加大分子染料,

日红墨水或蓝墨水等，形成颜色反差。

①一般不选择细菌细胞，它能发生质壁分离，但现象不明显。

e木台.匕;生盅办枷如1曲正不如JBMJR主木台g省/1-山侬八面小1卷1

4.实验试剂使用

选用的蔗糖溶液浓度要适宜。本实验用30%（0.3g/ml）的蔗糖溶液（既明显出现质壁分离,

又不会杀死细胞）。

选用不同的实验材料，所用的的溶液浓度不同。阳生植物和水生植物的细胞液浓度不同，

故发生质壁分离时需要的外界溶液浓度也不同。

①浓度过低，不足以引起质壁分离或质壁分离所需时间过长；

②浓度过高，植物细胞失水过多、过快而死亡；

③使用浓度过高的蔗糖溶液（质量浓度为0.5g/mL）,质壁分离现象明显，但不能复原，因

为溶液浓度过高，细胞过度失水而死亡。

④原生质层的选择透过性是发生质壁分离和复原的内在前提，死亡的细胞既不会发生质壁

分离，也不会发生质壁分离复原。

【注意事项】

（1）只有成熟的植物细胞原生质层和细胞壁可以分离，而未成熟的植物细胞细胞膜和细胞

壁是紧贴在一起的，无法正常分离。

（2）质壁分离时，在细胞壁和细胞膜间充满了降低浓度的外界溶液，原因是细胞壁具有全

透性。

（3）以可吸收的物质作溶质时（如甘油、尿素、KN03、乙二醇等），可出现质壁分离及自动

复原现象。

（4）用蔗糖作为质壁分离的外界溶液时，因洋葱鳞片叶细胞对蔗糖吸收速度较慢，吸收量

较少，同时实验时间较短，在短时间内不会影响细胞液的渗透压。

（5）使用质量浓度为1mol・LT的KN03溶液，因为C和NO「可被细胞吸收，使细胞液浓度

增大，所以细胞先发生质壁分离后又自动复原。（尿素、甘油、乙二醇等现象同上，但原理

不同）。制作洋葱鳞片叶表皮临时装片

,①有一个紫色的中央大液泡

5.实验流程用低倍显微镜观察

②原生质层紧贴细胞壁

盖玻片|

吸水纸吸引

中中央液泡逐渐变小，颜色变深

用低倍显微镜观察，

盖玻片②原生质层与细胞壁逐渐分离

吸水纸吸引清水

①中央液泡逐渐胀大,颜色变浅

低倍显微镜观察

②原生质层逐渐贴近细胞壁

（1）本实验没有设置对照实验，实验前后自身对照。

（2）本实验用显微镜观察了三次，第一次与第二次形成对照，第三次与第二次形成对照,

该对照方法为自身对照。

二、实验步骤:

步骤注意问题分析

1.制作洋葱表皮的临时装片：在载盖盖玻片应让一

玻片上滴一滴水，撕取洋葱鳞片叶外侧先触及载玻片，防止装片产生气泡。

表皮放在水滴中展平，盖上盖玻片。然后轻轻放平。

2.观察洋葱细胞液泡含花青素，所以液泡呈紫色。

可看到：液泡大，呈紫色，原生质层先观察正常细胞与后面的“质壁分离”

紧贴着细胞壁。起对照作用。

3.观察质壁分离现象。蔗糖溶液浓度大于细胞液浓度，细

从盖玻片的一侧滴入0.3g/ml的蔗胞通过渗透作用失水，细胞壁伸缩性小

糖溶液，在另一侧用吸水纸吸引，重原生质层的伸缩性大，液泡和原生质层

复几次。镜检。观察到：液泡由大变不断收缩，所以发生质壁分离。

小，颜色由浅变深，原生质层与细胞重复几次为了使细胞完全浸入蔗糖溶液中。

壁分离。原生质层与细胞壁之间充满否则，细胞严重失水死亡，看不到质壁

蔗糖溶液。糖浓度不能过高分离的复原。

4.观察细胞质壁分离的复原现象。发生质壁分离的细胞液的浓度高于外界溶液，细胞通过

从盖玻片的一侧滴入清水，在另一侧装片，不能久置，渗透作用吸水，所以发生质壁分离复原

用吸水纸吸引，重复几次。镜检。观要马上滴加清水，现象。

察到：液泡由小变大,颜色由深变浅，使其复原。因为细胞失水过久，也会死亡。

原生质层恢复原状。重复几次为了使细胞完全浸入清水中。

【典例解析】

1.进行质壁分离实验，需要使用较高的外界溶液浓度的实验材料的是

A.蓝藻B.黑藻C.洋葱鳞片叶D.葫芦薛

2.下列关于植物细胞质壁分离实验的叙述，错误的是

A.与白色花瓣相比，采用红色花瓣有利于实验现象的观察

B.用黑藻叶片进行实验时，叶绿体的存在会干扰实验现象的观察

C.用紫色洋葱鳞片叶外表皮不同部位观察到的质壁分离程度可能不同

D.紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞的液泡中有色素，有利于实验现象的观察

3.将洋葱鳞片叶外表皮放入一定浓度的物质A溶液中，其原生质体的体积随时间的变化趋势

如右图所示。下列叙述正确的是

A.0~1h内物质A没有通过细胞膜进入细胞内

B.0~4h内细胞的吸水能力变化与原生质体体积的变化呈负相关

C.2〜3h内物质A溶液的渗透压大于细胞液的渗透压

D.0~1h内细胞液的渗透压大于细胞质基质的渗透压

时间/h

实验五探究影响酶活性的因素

一、比较过氧化氢酶和Fe"的催化效率

（一）验原理：

鲜肝提取液中含有过氧化氢酶，过氧化氢酶和Fe”都能催化上。2分解放出经计算，质量

分数为3.5%的FeCA溶液和质量分数为20%的肝脏研磨液相比，每滴FeCL溶液中的Fe"数,

大约是每滴肝脏研磨液中过氧化氢酶分子数的25万倍。

（二）方法步骤：

步骤注意问题解释

取4支洁净试管，编号，分别不让H2O2接触

H2O2有一*定的腐蚀性

加入2mLH2O2溶液皮肤

将2号试管放在90°C左右的水

浴中加热，观察气泡冒出情况，预实验，初步观察过氧化氢的反应变化情况

与1号（室温条件）对照

不可用同一支由于酶具有高效性，若滴入的FeCL溶液

向3号、4号试管内分别滴入2滴管中混有少量的过氧化氢酶，会影响实验准确性

滴FeCL溶液和2滴肝脏研磨因为过氧化氢酶是蛋白质，放置过久，可

液，观察气泡产生情况肝脏研磨液必受细菌作用而分解，使肝脏组织中酶分子数减

须是新鲜的肝少，活性降低

脏在制成研磨研磨可破坏肝细胞结构，使细胞内的酶释

液放出来，增加酶与底物的接触面积

放卫生香时，

现象：3号试管产生气泡多，冒泡时间短，卫

2-3min后，将点燃的卫生香分动作要快，不要

生香猛烈复燃，4号试管产生气泡少，冒泡时

别放入3号和4号试管内液面插到气泡中，避

间长，卫生香几乎无变化

的上方，观察复燃情况免卫生香因潮

湿而熄灭

二、温度对酶活性的影响

（一）实验原理：

1.淀粉遇碘后，形成紫蓝色的复合物。

2.淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖（淀粉水解过程中，不同阶段的中间产

物遇碘后，会呈现红褐色或红棕色。）麦芽糖和葡萄糖遇碘后不显色。

注：市售a-淀粉酶的最适温度约60°C

（二）方法步骤：

操作注意问题解释

取3支试管，编上号，然后

分别注入2mL可溶性淀粉溶液

另取3支试管，编上号，然

后分别注入1mL新鲜淀粉酶溶液

将装有淀粉溶液和酶溶液的防止混合时，由于两种溶液的

不能只用不同

试管分成3组，分别放入热水（约温度不同而使混合后温度发生变

温度处理淀粉溶液

60°C）、沸水和冰块中，维持各自化，反应温度不是操作者所要控制

或酶溶液

的温度5min的温度，影响实验结果。

分别将淀粉酶溶液注入相同

保持各自温度

温度下的淀粉溶液中，摇匀后，淀粉酶催化淀粉水解需要一定时间

时间不能太短

维持各自的温度5min

在3支试管中各滴入1-2滴

碘液，摇匀后观察这3支试管中碘液不能滴加太多防止影响实验现象的观察

溶液颜色变化并记录

用表格的形式显示实验之拄骤

试管

序号加入试剂或处理方法

ABcabc

可溶性淀粉溶液2mL2mL2mL///

1

新鲜淀粉酶溶液///1mL1mL1mL

2保温5min60°C100°Co°c60°C100°Co°c

将a液加入到A试管，b液加入到B

3

试管，c液加入到C试管中，摇匀

4保温5min60°C100°Co°c

5滴入碘液，摇匀2滴2滴2滴

6观察现象并记录

三、PH值对酶活性的影响

操作步骤：用表格开式显示实验步骤：（操作顺序不能错）

序号~加入试剂或处理方法试试管管

123

1注入新鲜的淀粉酶溶液1mL1mL1mL

2注入蒸储水1mL//

3注入氢氧化钠溶液/1mL/

4注入盐酸//1mL

5注入可溶性淀粉溶液2mL2mL2mL

660°C水浴保温5min

7加入斐林试剂，边加边振荡2mL2mL2mL

8水浴加热煮沸Imin

9观察3支试管中溶液颜色变化变记录

注意：

（1）探究pH对酶活性的影响实验，需要用过氧化氢酶进行实验，不能选择唾液淀粉酶。

在酸性条件下，淀粉遇酸会水解，会与唾液淀粉酶的实验结果产生重叠。

（2）探究温度对酶活性的影响实验，不能使用过氧化氢酶。过氧化氢在高温下会快速分解。

实验六叶绿体色素的提取和分离

一、实验原理：

1.叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于无水乙醇等有机溶剂中,所以用无水乙醇、

丙酮等能提取色素。-----------提取方法：研磨过滤法（有机溶剂溶解法）。

2.层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，分子量小

的溶解度高，随层析液在滤纸上扩散得快，反之亦然。---------分离方法：纸层析法。

二、实验材料：鲜绿的菠菜叶（不用幼嫩叶，幼叶颜色泛黄绿色，叶绿素含量相对较少）

乔木叶片叶脉较硬，叶片表面有角质或釉质，研磨时很难做到充分进行，一般也不用。

三、实验步骤：

步骤注意问题分析

1.提取色素力口Si02加Si02为了研磨得更充分。

5克绿叶剪碎，放入研钵，加加CaC03加CaCO3可中和研磨时液泡破坏释放的有机酸，

SiOz、CaCOs和5mL无水乙醇（或防止色素被破坏。

丙酮）迅速、充分研磨。（若没

有也可用95%的乙醇，但要加入适加无水乙醇叶绿体色素易溶于无水乙醇等有机溶剂。

量的无水碳酸钠，除去水分）迅速减少研磨过程色素分解，减少无水乙醇挥发

2.收集滤液

漏斗基部放一单层尼龙布,研磨不能用滤纸，滤

尼龙布起过滤作用。

液倒入漏斗内挤压，将滤液收集纸对色素的吸附

试管□用棉花塞塞紧是为了防止无水乙醇挥

到小试管中，用棉花塞塞住试管力很强

发

口。

3.制备滤纸条干燥可吸收更多的滤液。

将干燥的滤纸，剪成长10cm,顺着纸纹剪成层析时，色素分离效果好。

宽1cm的纸条，一端剪去二个角，并长条

在距这一端1cm处划一铅笔线。一端剪去二个角可使层析液同时到达滤液细线。

4.划滤液细线

用毛细吸管吸取少量滤液，沿滤液细线越防止色素带之间部分重叠。

铅笔线划出细、齐、直的一条滤液细、越齐越好。

细线，干后重复三次。重复三次。增加色素量，实验结果更明显。

5.纸层析法分离色素层析液不能没及

将3mL层析液倒入烧杯中，滤纸条。防止色素溶解在层析液中，

将滤纸条(划线一端朝下)插入烧杯要盖培养皿

层析液中，用培养皿盖盖上烧杯。盖。层析液中的苯、丙酮、石油酸有毒且易挥发。

6.观察实验结果

扩散最快是四种色素之所以能被分离，是因为四种色素随

胡萝卜素(橙黄色)胡萝卜素，扩散层析液在滤纸上的扩散速度不同。

叶黄素(黄色)最慢是叶绿素b,

叶绿素a(蓝绿色)含量最多的是叶

叶绿素b(黄绿色)绿素a»

\/

注意：

(1)在实验材料的处理上，可以直接选用新鲜的绿叶研磨，也可以将绿叶晾晒或烘干研磨

成干粉进行实验。干粉中的色素含量相对更多。

(2)层析液的颜色一般呈现无色。

(3)过滤滤液时可以选用脱脂棉或尼龙布，减少对滤液中色素分子的吸附性。

(4)色素中的类胡萝卜素耐酸，加入的碳酸钙主要是对叶绿素进行保护。

四、实验易错点、难点及理论解读

1.色素提取液呈淡黄绿色的原因分析：

(1)研磨不充分，色素未能充分提取出来。

(2)称取绿叶过少或加入无水乙醇过多，色素溶液浓度小。

(3)未加碳酸钙或加入过少，色素分子部分被破坏。

(4)使用放置数天的菠菜叶。

2.滤纸条上色素条带出现波浪状或者交叠的原因

(1)画滤液线时没有做到细且直

(2)每次划线后没有干燥，色素在纸面上有扩散

(3)滤纸条没有预先干燥处理，导致色素在纸条上有扩散

3.色素条带上各个条带颜色较浅的原因

(1)研磨时加入提取液过多，导致溶液颜色变淡，划线时存在于起始扩散处的色素量变少

(2)研磨时没有加入二氧化硅

(3)画滤液线的次数太少，导致起始扩散处的浓度不够，条带颜色变浅

4.不添加CaCOs可能会导致色素条带上最下面两条色素条带缺失，注意，不是色素条带颜色变

浅。

实验七探究酵母菌的呼吸方式

一、实验原理:

1.酵母菌是一种单细胞真菌，在有氧和无氧的条件下都能生存，属于兼性厌氧菌，因此便

于用来研究细胞呼吸的不同方式。

2.CO?可使澄清石灰水变混浊，也可使溟麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。根据石灰水混

浊程度或澳麝香草酚蓝水溶液变成黄色的时间长短，可以检测酵母菌培养CO?产量的多少。

用■麝香草酚蓝检测的结果更加可靠，可以排除二氧化硫的影响。

3.橙色的重铝酸钾溶液，在酸性条件下与乙醇(酒精)发生化学反应，变成灰绿色。

二、方法步骤：

1.酵母菌培养液的配制

取20g新鲜的食用酵母菌，分成两等份，分别放入锥形瓶A(500mL)和锥形瓶B(500mL)

中，再分别向瓶中注入240mL质量分数为5%的葡萄糖溶液

2.检测CO2的产生

用锥形瓶和其他材料用具组装好实验装置(如图)，并连通橡皮球(或气泵)，让空气间歇

性地依次通过3个锥形瓶(约50min)。然后将实验装置放到25-35°C的环境中培养8T0h。

3.检测酒精的产生

各取2mL酵母菌培养液的滤液，分别注入2支干净的试管中。向试管中分别滴加0.5mL溶有

0.1g重铭酸钾的浓硫酸溶液(体积分数为95%-97%)并轻轻振荡，使它们混合均匀，观察试

管中溶液的颜色变化。

(1)提出问题：酵母菌使葡萄糖发酵产生酒精的条件是有氧还是无氧；酵母菌在有氧和无

氧条件下细胞的呼吸产物是什么

(2)作出假设：针对上述问题，根据已有的知识和生活经验(如酵母菌可以用于酿酒、发

面等)作出合理的假设

(3)设计并进行实验

①配置酵母菌培养液

②检测CO?的产生，装置如图所示

接植皮球

(或气泵)

质量分质为15%献醇丽曲麻丽।丽隔

的NaOH常液培*液石从水培养液萩水

③检测酒精的产生：自I、H锥形瓶中各取2ml滤液分别注入编号为1、2的两支试管中,

分别滴加0.5ml溶有0.1g重铭酸钾的浓硫酸溶液中，振荡并观察溶液的颜色变化。

(4)实验现象：甲、乙两装置中石灰水都变浑浊，且甲中浑浊程度高且快

2号试管中溶液由橙色变成灰绿色，1号试管不变色

(1)通入甲组第一只锥形瓶的空气中不能含有COz的原因：通入的空气中不能含有CO?,以

保证使第三个锥形瓶中的澄清石灰水变混浊完全是由酵母菌有氧呼吸产生的C02所致。

（2）乙组第一只锥形瓶应封口放置一段时间后再连通盛有澄清石灰水锥形瓶的原因：封口

放置一段时间，待酵母菌将瓶中的氧气消耗完，再连通盛有澄清石灰水的锥形瓶，确保通入

澄清石灰水中的CO?是由酵母菌无氧呼吸产生的。

实验八观察细胞的有丝分裂

一、实验原理：

1.在高等植物体内，有丝分裂常见于根尖、芽尖等分生区细胞。

（1）根尖生长点属于分生组织，细胞分裂能力强，易观察到有丝分裂各个时期的细胞。另

外，染色体数较少，便于染色体观察计数。

（2）各个细胞的分裂是独立进行的，因此在同一分生组织中可以看到处于不同分裂时期的

细胞。

2.染色体容易被碱性染料（如龙胆紫溶液）着色,通过在高倍显微镜下观察各个时期细

胞内染色体（或染色质）的存在状态，就可判断这些细胞处于有丝分裂的哪个时期。

二、实验材料：洋葱（可用葱、蒜代替）。

1.实验材料选择的依据：

①材料易于获得②细胞内染色体数目少，染色体大，便于观察③取材组织部位细胞

分裂能力强

2.实验材料的处理时间

一般在上午10点至下午14点之间进行实验，此时组织细胞分裂比较旺盛

三、实验试剂：95%乙醇、15%盐酸、醋酸洋红或龙胆紫、清水

各种试剂作用：

（1）95%乙醇：作为固定液，固定细胞分裂相。固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将

其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

（2）15%盐酸：解离并杀死细胞，使组织细胞相互分离开。解离的作用主要由盐酸发挥。

（3）龙胆紫或醋酸洋红：碱性染液，使染色体着色，便于镜检观察

（4）清水：漂洗解离的实验材料，洗掉多余解离液，防止解离过度及影响后续染色

四、实验步骤:

步骤（方法一）注意问题分析

一、根尖的培养（水培法）

实验前3〜4天，让洋葱放在广口置于温暖处，常换水。因为细胞分裂和生长需要水

瓶上，底部接触清水。根长约5cm时分、适宜的温度和氧气。

可用。

二、装片的制作

目的：溶解细胞间质，

（解离T漂洗-»染色T制片）此时间的分裂区细胞分裂旺

使组织中的细胞相互分离开

1.解离：上午10时至下午2时，剪盛，便于观察到分裂期的图像

来。此时，细胞已被盐酸杀

取洋葱根尖2〜3m,立即放入盛有质

m死。

量分数为15%的盐酸和体积分数为解离时间要保证，细胞才能分

否则，根尖过于酥软，

95%的酒精溶液的混合液（1：1）的散开来。

无法取出。

玻璃皿中，室温下解离3〜5min。解离时间也不宜过长。

2.漂洗：待根尖酥软后，用镶子取

目的：洗去解离液，便于染

出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约漂洗要充分，可换水1~2次。

色。

10min。

3.染色：把洋葱根尖放进盛有质量龙胆紫等为碱性染料，可使

染色时间不宜过长，否则

浓度为0.01g/mL或0.02g/mL的龙胆染色体着色。

显微镜下一片紫色，无法观

紫溶液的玻璃皿中染色3~5min。醋酸洋红溶液也能使染色体

察。

着色

4.制片：用镶子将这段洋葱根尖取

出来，放在载玻片上，加一滴清水，目的：使细胞分散，避免细

要弄碎根尖，再垂直向下

并用镶子尖把洋葱根尖弄碎，盖上盖胞重叠，便于观察。做得成

均匀用力压片，不可移动盖玻

玻片，在盖玻片上再加一片载玻片。功的装片，标本被压成云雾

片，

然后，用拇指轻轻地压载玻片，使细状。

胞分散开来。

三、观察

1.低倍镜观察：把装片放在低倍镜一定要找到分生区。

下，慢慢移动装片，找到分生区细胞。在一个视野里，往往不容易找分生区细胞特点是：细胞呈

2.高倍镜观察：移走低倍镜，换上全有丝分裂过程中各个时期正方形，排列紧密，有的细

高倍镜，用细准焦螺旋和反光镜把视的细胞。如果是这样，可以慢胞正处于分裂期。

野调整清晰，仔细观察，找出处于细慢地移动装片，从邻近的分生

胞分裂期中期的细胞，再找出前期、区细胞中寻找。

后期、末期的细胞。

实验九探究植物生长调节剂对杆插枝条生根的作用

一、实验原理：

植物插条经植物生长调节剂处理后，对植物插条的生根情况有很大的影响，而且用不同

浓度、不同时间处理其影响程度亦不同。其影响存在一个最适浓度，在此浓度下植物插条的

生根数量最多，生长最快。

二、方法步骤：

1.选择生长素类似物：2,4-D或a-蔡乙酸（NAA）、IBA等。

2.配制生长素类似物的浓度梯度：用容量瓶分别配成0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、3、4、5

mg/mL的溶液，分别放入小磨口瓶，及时贴上相应标签。

NAA有毒，配制时最好戴手套和口罩。

3.剩余的母液应放在4℃保存，如果瓶底部长有绿色毛状物，则不能继续使用。

4.选择插条：以1年生苗木为最好（1年或2年生枝条形成层细胞分裂能力强、发育快、

易成活）。

5.处理插条：枝条的形态学上端为平面，下端要削成斜面，这样在托插后可增加吸收水分

的面积，促进成活。每一枝条留3-4个芽，所选枝条的芽数尽量一样多。

处理方法注意事项

浸泡法插条的基部浸泡在配制好的溶液中，深约3cm,处理几小时至一天。（要求

溶液浓度较低，并且最好是在遮阴和空气湿度较高的地方进行处理）

沾蘸法把插条基部在浓度较高的药液中蘸一下（约5s）,深约1.5cm

6.探究活动：提出问题一作出假设一设计实验一（包括选择实验材料、选择实验器具、确

定实验步骤、设计实验记录表格）一实施实验一分析与结论一表达与交流。

注：

（1）可先设计一组梯度比较大的预实验进行摸索，再在预实验的基础上设计细致的实验。

（2）实验材料：可以用杨、加拿大杨、月季等的枝条。

三、实例如下：

1.提出问题

不同浓度的生长素类似物，如2,4-D或NAA,促进杨插条生根的最适浓度是多少？

2.作出假设

适宜浓度的2,4-D或NAA可以使杨或月季插条基部的薄壁细胞恢复分裂能力，产生愈伤组

织，长出大量不定根。

3.预测实验结果

经过一段时间后（约3〜5d）,用适宜浓度的2,4-D或NAA处理过的插条基部和树皮皮孔

处（插条下1/3处）出现白色根原体，此后逐渐长出大量不定根；而用较低浓度、较高浓度

或清水处理的枝条长出极少量的不定根或不生根。

4.实验步骤

（1）制作插条。

（2）分组处理：将插条分别用不同的方法处理（药物浓度、浸泡时间等可多组。如可分别

在NAA中浸泡1、2、4、8、12、24h等）。

（3）进行实验：将处理过的插条下端浸在清水中,注意保持温度（25〜