检验技术操作规程

检

验

技

术

操

作

规

汜

目录

第一节全自动血液细胞分析仪操作规程

第二节尿液分析仪使用规程

第三节自动凝血仪操作规程

第四节半自动生化分析仪操作规程

第五节血常规检验操作规程

第六节尿常规检验操作规程

第七节肝功能检验操作规程

第八节肾功能检验操作规程

第九节血脂检验操作规程

第十节血液葡萄糖测定技术操作规程

第十一节凝血四项检验操作规程

第十二节ABO血型正、反血型鉴定技术操作规程

第十三节交叉配血试验技术操作规程

第一节全自动血液细胞分析仪操作规程

1、样品分析前准备

1、1开机前得检查、准备

在开启分析仪电源之前，操作者须按以下要求进行检查：

1、1、1检查稀释液、清洗液、溶血素就是否充足，有无过期；试剂管路就是否弯折，连

接就是否可靠。

1、1、2电源线就是否正确连接。

1、1、3废液桶就是否清空。

1、1、4UPS电就是否足够，打印纸安装就是否正确，就是否足够。

1、1、5确保键盘正确连接到键盘接口上。

1、2、开机

1、2、1打开分析仪后面得电源开关，电源指示灯亮，屏幕上显示“Initializing…”、

1、2、2分析仪进行初始化，整个初始化过程持续约4〜7分钟。

1、2、3初始化过程结束后，系统自动进入“计数”界面。

1、3动物类型选择

1、3、1按［菜单］键，移动光标，选择“动物”，按［确认］进入“动物”界面。

1、3、2操作者根据测量得动物类型，选择需要分析得动物类型。

2、1、1按［菜单］键，选择“计数”，进入“计数”界面。再按［模式］键,将当前模式设

置为“全血”模式。

2、1、2确认状态指示区得计数状态为“就绪”，工作模式为“全血”。

2、1、3将准备好得全血样本放到采样针下，使采样针可以吸到样本且针头与容器底保

持一定距离。

2、1、4按计数键，启动样本分析过程。此时，状态指示区得计数状态为“运行

2、1、5采样针自动吸取13ul得样本后蜂鸣器响，在采样针抬起后，移开样本。

2、1、6分析完成后，按［F4］键进入“样本信息编辑”界面。按［F9］键进入汉字状态。

在汉字状态下，按［F8］键在全拼与五笔输入法之间进行切换,输入样本信息，榆入完成后，点

击“确认”，保存输入得内容并返回到“计数”界面。

2、1、7按［打印］键打印样本分析报告。

2、1、8按照此操作过程进行其余样本得分析。

2、2预稀释样本分析

2、2、1按［菜单］键，选择“计数”，进入“计数”界面。再按［模式］键,将当前模式设

置为“预稀释”模式。按［稀释］键，屏幕弹出“加稀释液”对话框，取一个干净得样本杯放在

采样针下，按计数键，微倾斜样本杯一定角度让分析仪自动排出得1、6ml稀释液沿管壁流入

样本杯中，避免产生气泡或溅出。

2、2、2加完稀释液后，按［确认］键，“加稀释液”对话框关闭，分析仪自动清洗采样针。

2、2、3采集20ul血液迅速注入盛有稀释液得样本杯中混匀。

2、2、4确认状态指示区得计数状态为“就绪”，工作模式为“预稀释”。

2、2、5将准备好得预稀释样本放到采样针下，使采样针可以吸到样本且针头与容器底保

持一定距离。

2、2、6按计数键，启动样本分析过程。此时，状态指示区得计数状态为“运行”。

2、2、7采样针自动吸取0、7ml得样本后蜂鸣器响，在采样针抬起后，移开样本。

2、2、8分析完成后，按［F4］键进入“样本信息编辑”界面。按［F9］键进入汉字状态。在

汉字状态下，按［F8］键在全拼与五笔输入法之间进行切换，输入样本信息，输入完成后，点击

“确认”，保存输入得内容并返回到“计数”界面。

2、2、9按［打印］键打印样本分析报告。

2、2、10按照此操作过程进行其余样本得分析。

3、样品分析结束后

3、1按［菜单］键，弹出系统菜单，选择“关机”。

3、2界面弹出“关机”对话框，点击“确认”进入关机界面。

3、3将EZ清洗液放到采样针下，按计数键，采样针将自动吸取EZ清洗液，执行液路与计

数池得清洗。

3、4按照界面提示信息，将EZ清洗液放到采样针下，按计数键，采样针将再次自动吸取

EZ清洗液,执行液路与计数池得清洗。

3、5执行完成后，界面提示“请关闭电源”就是，关闭分析仪得电源开关。

3、6关闭电源后检查分析仪就是否有渗漏，并将血液分析仪得周边环境打扫干净。

第二节尿液分析仪使用规程

本测试仪就是一项精密仪器，为了更好得维护与使用本仪器必须遵照以下操作规程。

一、操作步骤

1、尿液分析仪得通讯电缆与电脑背面得通讯端口相连，接通电源，先打开电脑，再打开

分析仪;仪器启动，风扇转动，推进器移动，屏幕显示“系统正在测试……”，此时系统正在自

检，显示屏显示主菜单，工作台检条区有红色光交替闪烁，用户可以开始测试

2、点击电脑桌面尿液分析软件；

3、将试纸条得试剂区完全浸入新鲜得、充分混合得、未离心得样本中立即取出，将试

纸条得侧边沿尿样容器得管壁刮去多余尿液；

4、将蘸有尿液得试纸平放在工作台得检条区，确保试纸同工作台前壁接触；

5、仪器检测到试纸存在后，推进器将试纸推到测试区进行测试；

6、当推进器退回原位，放下一条试纸……，这样实现连续测试；

7、当工作台上所有得试纸条测试完毕，打印结果输出结束后，按菜单键进入仪器设置，

将电源开关拨到“断（O）”位置，关闭仪器电源。

二、仪器维护

1、不要在仪器通电状态下清洁仪器；

2、不要用汽油、油漆稀释剂、苯化合物等可能腐蚀仪器得有机溶剂擦拭仪器；

3、不要用水清洗液晶屏，不要用任何会擦伤工作台与白基准得物质擦拭工作台；

4、不要用任何溶剂清洁白基准，如果白基准有明显划痕或损坏，请与供应商联系；

5、用柔软干布或沾有温与去污剂得软布擦拭仪器，保持仪器清洁；

6、用柔软、无磨损得布擦拭液晶屏；

7、为使仪器正常运行并提供准确得测试结果，必须定期从仪器中取下推进器、工作台、

步进板、用清水冲洗，用软布依次擦干保持工作台得清洁。

三、注意事项

1、测试时不要将仪器放置在阳光直射得地方，以免影响测试精度；

2、请在测试前核对尿液分析试纸型号，避免因使用得尿液分析试纸型号不正确而导致

测试结果错误；

3、请勿使用过有效期或变质得尿液分析试纸；

4、尿样本中血得浓度高时，可影响测试得准确性，仪器能够识别出高浓度血尿并打印出

“结果无效”得提示；

5、必须在推进器动作前，将待测试纸条放好；

6、在放置试纸条时应确保试纸条前端接触工作台前壁；

7、如果仪器测试头下发生故障导致纸条运行受阻。关掉仪器，拉出工作台，取出受阻试

纸条后，重新安装工作台。开机自检后，对未得出结果得样本重测。

第三节自动凝血仪操作规程

1、仪器得常规操作

1、1打开电源开关前得检查。

检查废液瓶及洗液瓶。如果洗液瓶中洗液得液面过低,请用蒸馈水或去离子水将罐充满。

清空废液瓶。

管道连接检查各种管线得连接。确保没有管子脱落或扭结，电源线被安全得插入交流插

座。确保打印机中有足够得纸张以供打印当天所需处理得所有样本结果。

补充反应杯丢弃用过得反应杯，加入适量得干净得反应杯。

1、2打开电源

开机顺序：打印机T压力单元T电源单元与主单元（右侧）。

打开电源后，仪器自动进入自检。

将病人样本，质控与试剂分别按要求准备就绪，进入分析过程：

试剂准备-4SetReagentT输入确认试剂体积T补充反应杯T安放样本架

1,3样本分析：

WorkListTIDNo、EntryT输入样本号TENTERT选择所需检测得项目（一变

为O）,确认所有得设置结束后TENTERT按屏幕右上方“Start”键，执行分析。

分析完毕,仪器进入准备状态。

1、4关机前得工作

每日清洁所有样本针与试剂针：

在主菜单屏上按下【Rinseprobe]键。将出现清洗针屏。按下【Excute】键。

1、5关机

关闭电源。

2、仪器保养

2、1每日保养

清洗样品针

每次做完试验都必须清洗样品针，主要就是预防堵针，执行[RinseProbe]—>[Excute]

清空垃圾箱

2、2清空废液

查瞧仪器后面防逆流瓶TrapChamber有无水，防止因为有水而导致真空泵不能抽真空

在洗液瓶中注蒸储水，最高不要超过上面得凹槽，防止因水过满，工作时水回流到压力泵与压

力传感器上导致人为破坏。

2、3每周保养

做一次管路清洁，执行[SpeciaIOperate]->[Rinse&Prepare]

清洁仪器

2、4每半年保养

清洗洗液瓶内部，清洗洗液瓶出水管上得过滤网一次。

2、5每三或六个月保养

清洁传动滑轨(X轴、Y轴)并上润滑油。防止因积尘而使样品针运行不到位，向下扎错位

置造成样品针弯曲或断裂

第四节半自动生化分析仪操作规程

【操作规程】

1、开机之前检查电源线就是否连接无误，电源要求接地良好；连接打印机电源线，接通打

印机电源开关；将废液管插入废液容器内；接通显示器开关及主机背部电源开关。

2、开机T自检后T键入Enter,确定已设定测试参数T键入Enter,进入编制工作表T在

设置栏，开启联机打印-♦仪器预热20分钟后，调用已设定测试项目进行样品测定T打印结果

T清洗仪器T关机。

3、吸液口由不锈钢保护管与钢管内聚四氟乙烯吸液管组成，应注意保护，不要碰弯。

4、切忌在带电状态下连接任何连接口。

【仪器得保养与维护】

1、日常保养工作主要就是清洗流动比色皿，每天工作结束后，要用蒸馅水清洗。具体方

法如下：将吸液管插入蒸馅水中，向上扳动吸液开关，反复冲洗流动比色皿，直到蒸馅水得吸

光度值正常为止。

2、每周要用专门得清洗剂清洗一次流动比色皿，清洗时，让清洗剂停留在比色皿中约半

小时，然后排掉,再用蒸馅水冲洗干净，最后注入蒸储水。

3、不使用仪器时，流动比色皿内一定要保证充满蒸储水。

4、更换打印机色带时，严格遵照打印机操作手册，避免不规范操作。

5、光源灯更换时一定要先切断仪器得电源，手不可触摸光源灯得玻骑部分，万一光源灯

得玻璃部分弄脏了，可用无水乙醇将污物除去。

6、更换得蠕动泵管尺寸材料应与原泵管一致，如不一致则要重新调整吸液量。

第五节血常规检验操作规程

【标本】

抗凝静脉血(有些仪器也可用末梢血)。

【方法】

血液细胞自动分析仪测定法。

【试剂】

血液细胞自动分析仪配套试剂。

【操作】

详见血液细胞自动分析仪使用手册。

【附注】

1、血常规包括白细胞计数及分类、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞比积、血小板

计数等项目。这些项目亦有相应得手工方法，详见有关资料。

2、半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均要求用抗凝静脉血。其优点为：

(1)静脉血能正确地反映病人实际情况，重复性好；

(2)利于延长仪器得使用寿命；

（3）解决了采血盘得交叉感染问题等。

3、血细胞计数应用EDTA•K2：（EDTA•K2•2H201,5〜2、2mg可抗凝1ml血）。

4、贮血容器应选用有盖塑料管。抗凝血采集后在室温中贮存应不超过6h；如需制作血

涂片应在2h内完成。

5、测定前必须将EDTA-L抗凝血充分混匀。

6、血细胞分析仪测定最适温度为18〜22℃,低于15℃或高于30℃,均可使细胞体积发

生改变，影响各参数得结果。

7、血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，当白细胞、红细胞、血红蛋

白与血小板得任何一项有明显

升高或降低；白细胞分类出现异常结果（中间细胞群百分率》8、0%）；红细胞、白细胞与血小

板得任何一个直方图出现异常图形等情况，须用显微镜检查及分类。

第六节尿常规检验操作规程

【标本】

新鲜尿液。

【方法】

化学试带法。

【试剂】

各型号尿液化学分析仪配套试带。

【操作】

详见尿液化学分析仪使用手册。

【附注】

1、尿常规检查使用尿液化学分析仪，目前能进行8〜10项检测（PH、蛋白、葡萄糖、酮

体、隐血、尿胆红素、尿胆素原、亚硝酸盐、比重、白细胞）。这些项目亦有相应得手工方

法，详见有关资料。

2、必须了解所用试带各膜块注意事项、药物干扰。

3、要注意尿液化学分析仪测定结果与手工法得差异，必要时用手工法复查。

4、尿液化学分析仪检测仅就是一个过筛手段，当蛋白、隐血、白细胞等出现异常结果（如

尿蛋白"+”或以上）时，应进行镜检。

5、尿液颜色、透明度等一般性状异常时也应报告。

第七节肝功能检验操作规程

血清总胆红素（TBIL）与结合胆红素（DBIL）测定

改良J~G法

【试剂】

参照书刊文献（如《全国临床检验操作规程》第二版）自配，配制标准液得胆红素应符合

如下标准，纯胆红素得氯仿溶液在25℃当光径1、000±0.001C叫波长453nm条件下其摩尔

吸光系数应在60700±1600范围内，偶氮胆红素得摩尔吸光系数应在74380±866范围内，配

制标准液得稀释剂须含白蛋白，可用牛血清白蛋白或人血清代替人血清白蛋白。标准液应贮

於棕色瓶中避光保存，在市售试剂中以含碱性酒石酸得灵敏度特异性高。

【操作】

按试剂盒说明书或相应书刊文献规程手工操作，比色测定，波长600nm、制作准曲线。血

样测定，从标准曲线上求TBIL及DBIL得含量以umo1/L报告。

也可按厂家提供得试剂及仪器使用得说明书得要求将相应得程序及参数设入，用自动生

化分析仪测定。

【标本】

血清，空腹血为宜，脂血、脂溶性色素及严重溶血干扰此测定，暂不能测定得标本应避光

保存，室温可稳定8h,2~8℃可保存48h«

含叠乳钠作防腐剂得质控血清不宜用此法测定胆红素。

胆红素氧化酶(BOD)法

【试剂】

市售成套试剂。BOD试剂复溶后2~8℃可保存一周。

【操作】

按厂家提供得试剂及仪器说明书要求设置程序输入参数用自动生化分析仪测定。波长

450或460nm。

【标本】

血清要求与改良J-G法相似。

二甲亚枫(DMS0)法

【试剂】

市售现成试剂。

【操作】

按试剂盒说明书手工操作比色测定或用自动生化仪测定。波长560nm。

【标本】

血清、轻度脂血，溶血标本对结果无明显影响、重度脂血、溶血标本须作标本空白进行

较正。

血氨测定

【方法】

酶两点法。

【试剂】

市售成套试剂。

【操作】

按试剂及仪器使用说明书要求，设入相应得程序及各项参数、用自动生化分析仪测定。

波长340nm。

【标本】

EDTA、Na?抗凝血浆。静脉采血后与EDTA、Na?混匀，立即置冰水中尽快分离出血浆，加塞

置2~4℃保存，在2~3h内分析,20℃可稳定24h。溶血标本忌用。

第八节肾功能检验操作规程

尿素鼠

1、检测目得：

检测血清、血浆或尿液中尿素得含量，为临床对相关疾病得诊断、观察疾病得变化及治疗

效果，以及对健康人群正常生理指标得监测提供重要得参考价值。

2、标本要求：

2、1病人准备：空腹12小时。

2、2标本类型：血清、肝素化得血浆或24小时尿。

3、设备与试剂：

3、1仪器设备：迈瑞半自动生化分析仪

3、2试剂材料:试剂

3、3试剂得贮存：

3、3、12〜8℃密闭避光贮存至标签所注失效期。

3、3、2开盖上机2〜8℃避光稳定30天。

3、3、3变质指示：试剂混浊变色或空白吸光度值＜1、000时，不能继续使用。

3、4注意：此试剂为体外诊断用，禁止入口，吞下有害。试剂含有叠氮化钠，误入眼、口中或

沾染到皮肤上请立即用清水彻底冲洗，必要时到医院就诊。叠氮化钠可以与铜、铅等金

属反应形成爆炸性化合物，故废弃时请充分稀释废液与冲洗排水管。

3、5试剂准备：即开即用得，无需特殊准备。

4、操作步骤：

见生化分析仪操作流程。

5、质量控制：

5、1质控物：RANDOX多项人基质血清

5、2质控措施：

5、2、1室内质控:每日日常工作前进行。

5、2、2室间质控：参加北京临床检脸中心临床化学室间质评。

6、干扰因素：

总胆红素W40mg/dL,血红蛋白W450mg/dL,抗坏血酸W400mg/dL对本法无干扰。

7、参考区间及可报区间：

7、1参考范围：血清/血浆2、86〜8、20mmol/L

24小时尿15〜35g/24h

7、2可报范围：0、00〜35、00mmol/Lo样品Urea含量超过线性范围应用生理盐水稀释重做，

结果乘以稀释倍数。

8、异常结果处理：

结果异常、与临床诊断不符，应复查或与临床联络。

肌肝

1、检测目得：

检测血清、血浆或尿液中肌肝得含量，为临床对相关疾病得诊断、观,察疾病得变化及治疗

效果，以及对健康人群正常生理指标得监测提供重要得参考价值。

3、标本要求：

3、1病人准备：空腹12小时。

3、2标本类型：血清、肝素化得血浆或尿液。

4、设备与试剂：

4、1仪器设备：迈瑞半自动生化分析仪

4、2试剂材料:试剂

4、3试剂得贮存：

4、3、12〜8℃密闭避光贮存至标签所注失效期。

4、3、2开盖上机2〜8℃避光稳定30天。

4、3、3变质指示：试剂混浊变色或空白吸光度值＞0、050时，不能继续使用。

4、4注意：此试剂为体外诊断用，禁止入口，吞下有害。试剂含有叠氨化钠，误入眼、口中或

沾染到皮肤上请立即用清水彻底冲洗，必要时到医院就诊。叠氮化钠可以与铜、铅等金

属反应形成爆炸性化合物，故废弃时请充分稀释废液与冲洗排水管。

4、5试剂准备：即开即用得，无需特殊准备。

5、操作步骤：

见半自动生化分析仪操作流程。

6、质量控制：

6、1质控物：RANDOX多项人基质血清

6、2质控措施：

6、2、1室内质控:每日日常工作前进行。

6、2、2室间质控：参加临床化学室间质评。

7、干扰因素：

直接胆红素W257umol/L,血红蛋白WO、5g/L,抗坏血酸W3mmol/L,甘油三酯W15、

Ommol/L,肝素W50KU/L,枸檬酸钠W10g/L对本法无干扰。

8、参考区间及可报区间：

8、1参考范围：血清/血浆53、0—123、0nmol/L（男性）

44、0~106、0^mol/L（女性）

首次晨尿1530〜15320nmol/L

24小时尿6、6〜15、OmmoI/24h

8,2可报范围：0、0~8840.0umol/L。样品Crea含量超过线性范围应用生理盐水稀释重

做，结果乘以稀释倍数。

9、异常结果处理：

结果异常、与临床诊断不符，应复查或与临床联络。

9、危急值及处理方法：

>177umol/Lo及时与临床联络。

10、实验室解释：

增高：严重肾功能不全、各种肾障碍、肢端肥大症等。

降低：营养不良、多尿等。

第九节血脂检验操作规程

标本采集与处理

1.受检者抽血前二周应保持平衡得饮食习惯，近期体重稳定无外伤，手术等意外情况。并

注意如有使用降糖、降脂、降压、避孕药，B受体阻滞剂，免疫抑制剂，激素药物等，则应根据

所用药物特性停药数天或数周后再作血液脂类检测。

2.空腹抽血,TG,脂蛋白，载脂蛋白测定应至少禁食12小时（仅作胆固醇测定不必强求空

腹）24小时内不作剧烈运动。抽血前不要久站立。至少应静坐5分钟。抽血时止血带使用不

可超过1分钟。

3.标本用血清，也可用肝素或EDTA、Na?抗凝之血浆。EDTA、Na?浓度不宜太高。

4.血标本室温放置不得超过3h,放置30~45分钟后应即时分离出血清（浆）盖封於4℃冰

箱中可稳定至少4天，如需长期保存，应於70℃中冰冻存放，不可反复冻融。

血清总胆固醇（TC）测定

酶法（CHOD~PAP法）

【试剂】

市售现成试剂。

【操作】

按试剂及仪器使用说明书要求设定程序，输入参数用自动或半自动生化分析仪测定（速

率法）终点法可手工操作，用普通分光光度计比色测定。波长500nm或520nm。

【标本】

血清（浆）参瞧本节得标本采集与处理。

【附注】

本法为中华医学会检验学会推荐得TC测定常规方法（中华医学检脸杂志，1995、

18:185）o

胆固醇标准液以定值参考血清为宜，而不宜用Choi得水溶液作标准。Choi定值质控血

清亦不应用作标准液。

主要技术指标：终点法批内CVC1、5%、批间CVW2、5%»灵敏度：显色剂用酚时,TC5、

2mmo1/L（200mg/dl）时得吸光度（A500nm）约0、30~0、35,故A500nm=0、005时TC浓度约

为0、08mmo1/L（3mg/dL）»测定范围：当血清与试剂用量之比为1:100时其测定得上界为

13mmo1/L（500ng/dL）。

血清甘油三酯（TG）测定

酶法（GP0~PAP法）

【试剂】

市售现成试剂。有两种。

一步酶法单一试剂，二步酶法双试剂。

标准液（参考物）一步酶法之用三油酸甘油酯水溶液，也可用甘油，但甘油不适用於二步

酶法。

【操作】

按试剂及仪器使用说明书要求设定程序与参数，用自动或半自动生化分析仪测定，终点

法可用普通分光光度计手工操作，比色测定。波长500nmo

【标本】

血清（浆）参瞧本节标本采集与处理。

【附注】

本法在操作程序上分为一步酶法与二步酶法，二步酶法为中华医学检验学会得推荐方法

（中华医学检验杂志1995、18:249）。现阶段允许二法并存，要求逐步过渡到统一采用二步酶

法，在方法尚未统一前，实验室报告TG测定结果时应注明“除FG值”或“未除FG值

主要技术指标:酶试剂用缓冲液配制后，20~259应稳定1天,4℃可稳定3~7天，试剂空白

为A500nmW0、05;显色后稳定N30min:测定上界11、3mmo1/L（100mg/dL）；

精密度:批内CVW3%,批间CVW5%:灵敏度:2mo1/LTGA500nm>0、2。

血清高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）测定

磷钩酸镁沉淀法

【试剂】

市售成套试剂，沉淀剂，酶试剂（同TG测定）。

【操作】

按试剂盒说明书操作。

1.沉淀含apoB得脂蛋白。

2.测定上清液（只含HDL）得胆固醇含量（方法同酶法TC测定）。

【标本】

血清（浆）0

硫酸葡聚糖一镁沉淀法

【试剂】

市售成套试剂：总HDL试剂，HDL3试剂，酶试剂（同TC试剂）。

【操作】

按试剂说明书操作：

1.沉淀含apoB得脂蛋白，（总HDL试剂）；

2.沉淀含apoB得脂蛋白及HDL2（HDL3试剂）；

3.测定总HDL~C及HDL3~C（同酶法TC测定），并计算出HDL2~C量。

【标本】

血清（浆）血样在室温中不宜久放，应即时测定，原则应低温保存。

直接HDL~C测定法

【试剂】

市售专门得试剂，无沉淀剂。酶试剂同TC测定。（如日本第一化学药品株式会社得产品）。

【操作】

按试剂盒及仪器使用说明书要求设置程序，输入参数直接用自动或半自动生化分析仪测

定，无须沉淀离心分离出HDL步骤。

【标本】

血清（浆）。

血清低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）测定

1.Friedwald工式计算法：

（1）LDLC=TC—HDLC-TG/5（以mg/dl为单位计）；

（2）LDLC=TC—HDLC—TG/2.2（以mmo1/L为单位计）；

⑶只有当血TGV4、52mmo/L结果才较准确；

（4）只有TC、TG、HDLC三项测定都准确且符合标准化要求时，才可计算出LDLC得近似值。

2.聚乙烯硫酸沉淀法

【试剂】

沉淀剂市售，酶试剂同TC测定。

【操作】

1.TC测定。

2.选择性沉淀血清中LDL,测定上清液之HDL-C与VLDL-C之与得量，（同TC测定）。

3.计算出LDL-C得含量。

【标本】

血清。

血清载脂蛋白A1（apoA1）测定

免疫透.射比浊法。波长340nm,本法批间CV<5%»

【试剂】

市售试剂盒，试剂2~8℃保存，不同批号试剂不能混合使用，抗血清效价不应低於16o

【操作】

按试剂及仪器使用说明书要求，设定程序与参数用自动生化分析仪测定，也可用特定蛋

白分析仪作速率法散射比浊测定，或用含340nm得分光光度计手工操作测定。

【标本】

血清。

血清载脂蛋白B(apoB)测定

免疫透射比浊法。波长340nm,本法批间CV<5%,

【试剂】

市售试剂，2~8℃保存，不同批号试剂不能混合使用，抗血清效价不应低於1：128。

【操作】

参瞧apoA1测定。

【标本】

血清。

第十节血液葡萄糖测定技术操作规程

1、检测目得：

检测血清或血浆中葡萄糖得含量，为临床对相关疾病得诊断、观察疾病得变化及治疗效果，

以及对健康人群正常生理指标得监测提供重要得参考价值。

3、标本要求：

3、1病人准备：空腹12小时。

3、2标本类型：血清或NaF抗凝得血浆。采血后及时分离，以避免血清或血浆中葡萄糖被细

胞利用而降低。

4、设备与试剂：

4、1仪器设备：奥林巴斯AU600生化分析仪

4、2试剂材料：四川迈克公司试剂

参与反应成份：

R1:酚(12、Ommol/L)

R2：G0D(235KU/L)、P0D(25KU/L)、4AAp(1、20mmol/L)

4、3试剂得贮存：

4、3、12〜8℃密闭避光贮存至标签所注失效期。

4、3、2开盖上机2〜8℃避光稳定30天。

4、3、3变质指示：试剂混浊变色或空白吸光度值>0、150时，不能继续使用。

4、4注意：此试剂为体外诊断用，禁止入口，吞下有害。试剂含有叠氮化钠，误入眼、口中或

沾染到皮肤上请立即用清水彻底冲洗，必要时到医院就诊。叠氮化钠可以与铜、铅等金

属反应形成爆炸性化合物，故废弃时请充分稀释废液与冲洗排水管。

4、5试剂准备：即开即用得，无需特殊准备。

5质量控制：

5、1质控物：RANDOX多项人基质血清

5、2质控措施：

5、2、1室内质控:每日日常工作前进行。

5、2、2室间质控：参加北京临床检脸中心临床化学室间质评。

6、参考区间及可报区间：

6、1参考范围：空腹3、89〜6、11mmol/L

餐后1小时7、78〜8、89mmol/L

餐后2小时3、89〜7、78mmol/L

6、2可报范围：0、00〜22、30mmol/L。样品GLU含量超过线性范围应用生理盐水稀释重做，

结果乘以稀释倍数。

7、危急值及处理方法：

<2、5mmol/L或>10mmol/L。及时与临床联络。

第十一节凝血四项检验操作规程

全血凝固时间检验（CT）

【标本】

静脉取血3ml。

［方法与操作】

试管法、硅管法操作参见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

【附注】

1、静脉取血要一针见血，尽量减少组织液与空气混入。

2、水浴箱温度要恒定，过高或过低，可影响结果。

活化部分凝血活酶时间测定（APTT）

【标本】

自静脉取血，用109mmol/L枸椽酸钠作1:9抗凝。

【试剂】

市售成套试剂。

【方法与操作】

按试剂及有关仪器说明书要求进行。

【附注】

1、标本应及时检测，最迟不超过2h«

2、分离血浆应在3000r/min,离心10min。

3、本试验较试管法全血凝血时间敏感，能检出因子VIII：C<25%轻型血友病。

血浆凝血酶原时间测定（PT,一期法）

【标本】

静脉血1、8ml,用109mmol/L枸椽酸钠0、2ml抗凝。

【试剂】

1、组织凝血活酶浸出液；

2、0、025mol/LCaCIz液；

［方法与操作】

见《全国临床检脸操作规程》（第二版）。

【附注】

1、采血后宜在1h内完成，置冰箱4℃保存，不应超过4h,20°C下可放置2周，70℃可放

置6个月。

2、水温箱控制在37℃±1℃,过高过低均影响结果。

简易凝血活酶生成试验（STGT）

【标本】

取全血0、04ml加5ml蒸用水，混匀，即成溶血液，备用。

［方法与操作】

见《全国临床检脸操作规程》（第二版）

第十二节ABO血型正、反血型鉴定技术

操作规程

1、检测目得

用于检测患者血型，实施输血治疗与组织器官移植等。

2、检测原理（正定型法）

根据IgM类特异性血型抗体与红细胞上特异性抗原结合能够出现凝集反应得原理，用已

知IgM类特异性标准抗血清与被检红细胞在室温条件下反应，若被检红细胞出现凝集现象，

表明被检红细胞上有与血型抗体对应得抗原。

3、标本要求

新鲜全血。

4、试剂

标准抗A、抗B血清。

5、操作步骤（玻片法）

5、1标记:取一载玻片，用蜡笔画上直径2cm左右得两个圆圈，分别标记抗A、抗B。

5、2抗血清:在玻片蜡笔圈内按标记所示分别滴加抗A、抗B标准抗血清各一滴。

5、3红细胞：在抗A、抗B圈内加被检者全血各一滴。用玻棒将红细胞与抗体充分混匀，室

温下放置18〜30min（为防止天气干燥造成玻片干涸，可把试验玻片放在有湿纱布得盖

盘中）,

5、4血型判读：摇动玻片，肉眼观察玻片蜡笔圈内有无颗粒状凝集及凝集程度，判定阴性、

阳性与阳性程度。阴性指视野中红细胞程均匀散布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存

在，无聚集靠拢现象。阳性时红细胞出现凝集。

6、质量控制

6、1分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。

6、2试管、滴管与玻片必须清洁干燥，防止溶血。

6、3按理IgM抗A与抗B与相应红细胞得反应温度以6℃为最强，但为了防止冷凝集现象

得干扰,一般仍在室温内进行试脸,36℃可反应减弱。

6、4观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列得区别。

7、干扰因素

7、1分型血清效价太低、亲与力不强；

7、2受检者红细胞上抗原位点过少或抗原性减弱；

7、3受检者血清中缺乏应有得抗A/抗B抗体；

7、4各种原因引起得红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶性血型物质中与了相应

得抗体；

7、5由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往就是正反定型不符得原因；

7、6血清中有意外抗体，如自身抗I,常引起干扰；

7、7老年人血清中抗体水平大幅度下降；

7、8更换新批号抗血清或对试剂结果有怀疑时，可设定阳性、阴性与自身对照；

7、9为避免交叉污染，尖吸管、玻棒只能一次性使用；

7、10婴幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱；

7、11有些疾病可能使红细胞定性出现困难，如：严重得肠道细菌感染；严重得细菌感染；血

清中存在病理性冷凝集素与红细胞上抗原结合；部分高球蛋白与异常高球蛋白血症患

者；

7、12输入异型血或做过与受者血型不同得异体骨髓器官移植得病人在血型坚定时可能出

现混合外观。

第十三节交叉配血操作规程

交叉配血试验（凝聚胺法）

［原理］

凝聚胺试脸就是利用低离子溶液促进红细胞抗原与血清（浆）中得抗体反应，再利用凝聚

胺引起红细胞间非免疫性得凝集，让已有抗体（IgG）反应得红细胞间得距离缩短。距离缩短后

更能引起已反应得抗体与别得红细胞产生反应形成免疫性得凝集。而由凝聚胺所引起得非免

疫性红细胞凝集反应可被后来加入得复悬液所中与而散开，如有免疫反应，凝集就不会散开，

为阳性反应。如没有免疫反应，凝集就会散开，为阴性反应。交叉配血试验就是在盐水介质得

基础上加入凝聚胺，检测供患之间就是否相合，患者血清（浆）中就是否含有具临床意义得红

细胞异体抗体。

［试剂组成］

1洁净试管，离心机，显微镜。

20、85%氯化钠溶液：准确称取氯化钠（AR）8、5g,用蒸储水溶解并定容至1000ml。

试剂启用后，有效期为：二周。

3聚胺试剂

（1）质溶液：含葡萄糖，乙二胺四醋酸2钠及稳定剂。

（2）凝聚胺溶液：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。

（3）复悬液：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。

（4）阳性对照血清：含抗D血清，氯化钠及稳定剂。

4抗人IgG血清。

［试剂保存与稳定性］

1.凝聚胺试剂须保存在225℃。

2.有效期内可使用。

3.抗人IgG血清低温冰箱保存。复溶后放2—4℃冰箱保存。

［标本收集与准备］

1.抽取受血者静脉血34ml（操作中小心防止红细胞破损），放入一已贴标签干燥洁净得试管

中为血清管（也可用EDTAK2抗凝血液），并将注射器中余下得少量血液配成2%红细胞生理盐

水悬液，放入另一已贴标签干燥洁净得试管中为红细胞悬液管。

以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，榆用过血液或血液制品，且输用时间超过12

小时得，必须重新采集标本。

2.2%红细胞悬液：

用生理盐水洗涤红细胞3次。

根据下表进行红细胞悬液得配制。

悬液浓度觥）压积红细胞（滴）盐水（滴）

21

2ml（40）

51

0、8ml(16)

［操作步骤］

1.取出3支试管分别标记主，次及对照测试：

主测管：加入病人血清（浆）2滴，再加入供血者35%红细胞悬液1滴，

次测管：加入供血者血清（浆）2滴，再加入病人35%红细胞悬液1滴，

对照管：加入2滴*4阳性对照血清，再加入供血者35%红细胞悬液1滴。

2.各加入*1低离子介质溶液0、6ml,轻轻混匀，于室温下静置1分钟。

3.再滴入2滴*2凝聚胺溶液，轻轻混匀，于室温下静置15秒。

4.3400rpm离心