微生物群调控促进土壤健康

20/22微生物群调控促进土壤健康第一部分土壤微生物群的多样性及功能 2第二部分微生物群对土壤健康的影响机制 4第三部分调控微生物群促进土壤养分循环 6第四部分微生物群对土壤结构和水分保持 8第五部分微生物群与土壤病害的抑制 11第六部分人类活动对微生物群的影响 13第七部分微生物群调控促进土壤生态系统服务 16第八部分微生物群调控在土壤管理中的应用 18

第一部分土壤微生物群的多样性及功能土壤微生物群的多样性及功能

土壤微生物群是由生活在土壤环境中的微生物群落组成，包括细菌、真菌、原生动物、线虫和其他微生物。土壤微生物群在维持土壤健康和生态系统功能方面发挥着至关重要的作用。

多样性

土壤微生物群具有极高的多样性，包括数千种不同的微生物种类。这种多样性受多种因素影响，包括土壤类型、气候、植被和管理方式。

*细菌：占土壤微生物群的1-10%，是土壤中数量最丰富的微生物群。它们分解有机物、固定氮气和参与其他生物地球化学过程。

*真菌：占土壤微生物群的1-5%，以其菌丝体结构而闻名，可以连接土壤颗粒并促进养分吸收。

*原生动物：占土壤微生物群的0.1-1%，是重要的捕食者，调控其他微生物的种群。

*线虫：占土壤微生物群的0.01-0.1%，是土壤食物网中的微捕食者。

功能

土壤微生物群通过复杂的相互作用影响土壤健康和生态系统功能。

*营养循环：微生物分解有机物，释放养分，例如氮、磷和钾，供植物利用。此外，一些微生物可以固定氮气，这对于自然生态系统中的氮供应至关重要。

*土壤结构形成：真菌菌丝体可以粘合土壤颗粒，形成团聚体。这些團聚體改善土壤结构，提高保水能力和通气性。

*病害抑制：某些微生物可以抑制病原体的生长，从而保护植物免受疾病侵害。

*污染物降解：微生物可以降解重金属、有机污染物和其他环境污染物，有助于土壤的生物修复。

*碳固存：微生物将有机物转化为稳定的土壤有机质，从而将碳从大气中转移到土壤中。

土壤微生物群动态

土壤微生物群是一个动态的系统，会随着以下因素而变化：

*土壤类型：不同土壤类型的营养含量、质地和pH值影响微生物群组成。

*气候：温度、降水和阳光会影响微生物的活动和生存。

*植被：根系分泌物和凋落物为微生物提供养分，影响微生物群落结构。

*管理方式：施肥、农药应用和耕作实践可以显着改变土壤微生物群。

调控土壤微生物群

为了促进土壤健康，可以采用以下策略来调控土壤微生物群：

*有机质管理：施用堆肥、绿肥和农作物残茬可以为微生物提供养分，增加土壤有机质。

*减少农药使用：农药可以杀死有益微生物，影响土壤微生物群的平衡。

*采用免耕或减少耕作：耕作可以扰动土壤微生物群，减少真菌菌丝体的数量。

*轮作：不同的作物具有不同的根系分泌物，可以促进不同的微生物群落。

*接种有益微生物：向土壤中接种有益微生物，例如固氮菌或病害抑制菌，可以增强土壤微生物群的功能。

结论

土壤微生物群是一个复杂而充满活力的生态系统，在维持土壤健康和生态系统功能方面发挥着至关重要的作用。了解土壤微生物群的多样性和功能对于发展可持续的土地管理实践至关重要，从而促进土壤健康和提高农作物产量。第二部分微生物群对土壤健康的影响机制关键词关键要点主题名称：微生物群对土壤有机质和营养周期的影响

1.微生物分解有机质，释放养分供植物吸收利用，维持土壤肥力。

2.微生物合成新有机质，增加土壤有机质含量，提升土壤保水保肥能力。

3.微生物促进养分的固定和转化，维持土壤中养分的动态平衡。

主题名称：微生物群对土壤结构和水分管理的影响

微生物群对土壤健康的影响机制

I.营养循环

*氮循环：微生物群通过固氮、硝化和反硝化等过程参与氮的循环，促进氮素的有效性和植物利用率。

*碳循环：微生物群介导土壤有机质的分解和转化，释放养分并调节土壤碳储量。

*磷循环：微生物群分泌有机酸和酶，促进磷的溶解和植物吸收，提高磷的有效性。

II.土壤结构和稳定性

*有机质积累：微生物群分解有机物质产生腐殖质，增加土壤有机质含量，改善土壤团聚体，增强土壤保水性和稳定性。

*根际微生物分泌物：根际微生物分泌多糖和蛋白，促进土壤团聚体形成，改善土壤结构，增强抗侵蚀性。

*真菌菌丝体：真菌菌丝体缠绕土壤颗粒，形成土壤网络，增强土壤抗压性和稳定性。

III.养分吸收促进

*共生固氮：根瘤菌等固氮微生物与豆科植物共生，将大气中的氮气转化为植物可利用的形式，促进植物生长。

*根际菌群：根际菌群释放植物激素、有机酸和酶，改善植物根系营养吸收，促进根系生长和功能。

*菌根：菌根真菌与植物根系形成共生关系，扩大植物的根系接触面积，增强其吸收养分和水分的能力。

IV.病害控制

*抗生素产生：一些微生物能够产生抗生素或其他抗菌化合物，抑制病原菌的生长和繁殖。

*竞争营养和空间：微生物群与病原菌竞争养分和空间，限制病原菌的定殖和致病性。

*诱导抗性：某些微生物群能够触发植物的系统性获得性抗性(ISR)，增强植物对病原菌的抵抗力。

V.其他作用

*重金属解毒：一些微生物群具有重金属解毒能力，能够螯合、转化或降解重金属，减轻其对土壤和植物的毒性。

*气候变化缓解：微生物群通过土壤有机质积累和碳循环，帮助调节土壤碳储量，减缓气候变化的影响。

*土壤健康指标：微生物群的组成和多样性被认为是土壤健康的关键指标，反映了土壤生态功能和可持续性。第三部分调控微生物群促进土壤养分循环关键词关键要点【主题名称】微生物群调控促进土壤氮循环

1.微生物群在土壤氮循环中发挥至关重要的作用，参与氮固定、硝化和反硝化等关键过程。

2.调控微生物群通过优化氮转化微生物群的组成和活性，增强土壤氮素利用效率，减少氮肥流失。

3.根际微生物群与植物建立互惠关系，促进土壤氮素的吸收和利用，提高作物产量和品质。

【主题名称】微生物群调控促进土壤磷循环

调控微生物群促进土壤养分循环

土壤微生物群在土壤养分循环中扮演着至关重要的角色。调控微生物群可以优化土壤养分循环的效率，从而促进土壤健康和作物生产力。

氮循环

*固氮：微生物（如根瘤菌）将大气中的氮气转化为植物可利用的氨。

*硝化：好氧菌（如硝化杆菌）将氨转化为亚硝酸盐和硝酸盐，这是植物吸收的主要氮源。

*反硝化：厌氧菌（如反硝化细菌）将硝酸盐还原为氮气，使其释放回大气中。

调控策略：

*接种根瘤菌：提高大豆等豆科作物的固氮能力。

*使用硝化抑制剂：抑制硝化作用，减少氮素流失。

*提供有机物质：为反硝化菌提供碳源，促进反硝化作用。

磷循环

*矿化：微生物分解有机磷化合物，释放无机磷。

*固定：微生物将无机磷转变为有机形式，减少土壤中磷的有效性。

调控策略：

*接种磷酸盐溶解菌：提高土壤中无机磷的可用性。

*使用磷酸盐吸附剂：减少磷酸盐的固定，提高其有效性。

*管理土壤pH：优化土壤pH以促进磷酸盐矿化和固定平衡。

钾循环

*释放：微生物分解钾长石等矿物，释放钾离子。

*固定：粘土矿物和有机质可以固定钾离子，降低其有效性。

调控策略：

*使用钾肥：补充土壤中钾的含量。

*管理土壤pH和水分：优化土壤条件以促进钾的释放和可用性。

*施用有机物：增加土壤有机质含量，提高钾的固定能力。

硫循环

*氧化：好氧菌将硫化物氧化为硫酸盐。

*还原：厌氧菌将硫酸盐还原为硫化物，释放硫元素。

调控策略：

*管理土壤水分和通气性：优化土壤条件以平衡硫的氧化还原反应。

*施用硫肥：补充土壤中硫的含量。

*接种硫氧化菌：促进硫化物的氧化，减少硫的流失。

调控微生物群对土壤养分循环的影响是一个复杂的协同过程。通过理解和管理微生物群，我们可以优化土壤养分循环的效率，提高土壤健康，并最大限度地提高作物生产力。

数据支持

*施用根瘤菌可使大豆固氮量增加50-100%。

*硝化抑制剂可减少硝化作用，从而减少氮素流失20-50%。

*磷酸盐溶解菌可使土壤中无机磷的有效性提高20-30%。

*管理土壤pH至6.5-7.0可优化磷酸盐矿化和固定平衡。

*施用硫肥可使土壤中硫酸盐含量增加20-50%。第四部分微生物群对土壤结构和水分保持关键词关键要点微生物群对土壤结构的调控

1.微生物群通过产生胞外多糖（EPS）和菌丝体，增强土壤结构的稳定性，促进土壤颗粒的聚集，形成更稳定的土壤团聚体，从而改善土壤的透气性、排水和持水能力。

2.微生物群通过分泌有机酸和酶，分解土壤中的有机物质，释放出腐殖酸和腐植酸等有机质，这些有机质可以与土壤矿物质结合形成稳定稳定的土壤结构，提高土壤的保肥保水能力。

3.微生物群通过根际相互作用，影响植物根系的发育和分泌，促进根系对土壤的穿透和锚固，从而加强土壤结构的稳定性，减少土壤侵蚀和流失。

微生物群对土壤水分保持的调控

1.微生物群通过产生胞外多糖（EPS）和菌丝体，增加土壤的孔隙度和比表面积，提高土壤的保水能力。EPS具有很强的吸水能力，可以吸收大量水分，并将其储存起来，减缓土壤水分蒸发，提高土壤水分利用效率。

2.微生物群通过分泌有机酸和酶，分解土壤中的有机物质，释放出腐殖酸和腐植酸等有机质，这些有机质具有很强的保水能力，可以吸附水分，延长土壤水分保持时间，提高土壤的抗旱能力。

3.微生物群通过促进植物根系发育和分泌，增强根系对水分的吸收和利用能力，从而提高土壤水分保持能力。植物根系分泌的根系分泌物可以激活土壤中的微生物群，促进微生物群的生长和活动，从而提高土壤水分保持能力。微生物群对土壤结构和水分保持的影响

微生物群在维持土壤结构和调节水分持有能力方面发挥着至关重要的作用。通过以下机制，它们对土壤健康产生深远的影响：

土壤团聚体形成：

*微生物通过分泌多糖、蛋白质和胞外多聚物等粘合剂，促进土壤颗粒的聚集，形成土壤团聚体。

*稳定的土壤团聚体提高了土壤的抗侵蚀能力、透气性和水分保持能力。

有机质分解和腐殖质形成：

*微生物参与有机质的分解，释放可利用的养分，并通过合成腐殖质稳定土壤结构。

*腐殖质是一种胶体物质，具有很强的吸水能力，有助于提高土壤的水分保持能力。

根系发育和黏连：

*微生物群释放的植物激素和有机酸促进了根系的发育，增加了土壤与根系之间的接触。

*根系释放的粘合剂进一步增强了土壤团聚体，提高了土壤的稳定性。

土壤孔隙度和通气性：

*微生物活动产生了土壤孔隙，改善了土壤的通气性。

*透气性良好的土壤允许水和养分有效地渗透和流通，有利于植物生长。

水分吸收和释放：

*微生物细胞本身以及土壤中的有机质可以吸收水分，充当土壤水分的储库。

*在干旱条件下，微生物通过释放水来帮助维持土壤水分。

*在潮湿条件下，微生物吸收水分，调节土壤水分含量。

证据支持：

研究表明，微生物群对土壤结构和水分保持的影响具有显著影响：

*在贫瘠的土壤中接种微生物菌株后，土壤团聚体的形成增加，有机质含量提高，水分保持能力增强。

*研究发现，长期采用微生物接种的农田土壤与未接种土壤相比，土壤稳定性更高，水分保持能力更强。

*在干旱条件下，接种特定微生物的土壤表现出更好的水分保持能力，مماأدىإلىزيادةإنتاجيةالمحاصيل。

应用：

了解微生物群对土壤结构和水分保持的影响具有重要的应用价值：

*通过微生物接种、作物轮作和覆盖作物管理，促进有益微生物群落，从而改善土壤结构和水分保持能力。

*在干旱地区，利用微生物群的优势，通过提高土壤水分保持能力来缓解作物水分胁迫。

*在降水量不稳定的地区，微生物群管理可以帮助调节土壤水分，降低极端天气事件的影响。

结论：

土壤微生物群在维持土壤结构和调节水分保持方面发挥着不可或缺的作用。通过理解和管理微生物群，我们可以改善土壤健康，提高作物产量，并在面临气候变化挑战时增强土壤韧性。第五部分微生物群与土壤病害的抑制关键词关键要点微生物群与土壤病害的抑制

主题名称：微生物群与病原菌拮抗

1.益生菌和拮抗菌可产生抗菌化合物，直接抑制病原菌的生长和繁殖。

2.微生物群成员通过竞争营养物质、空间和附着点，限制病原菌的定殖和致病能力。

3.诱导系统性抗性反应，激活植物自身的防御机制，增强对病原菌的抵抗力。

主题名称：微生物群与病害抵抗素的产生

微生物群与土壤病害的抑制

土壤微生物群落对土壤病害的抑制至关重要，其作用机制主要包括：

1.空间与营养竞争：

*有益微生物通过与病原体争夺空间和营养资源，抑制病原体的生长和传播。

*根际微生物产生抗生素、挥发性化合物和其他代谢物，直接抑制病原体活动。

2.诱导系统抗性（ISR）：

*土壤微生物群落中的特定菌株能激活植物的免疫系统，使其抵抗病原体侵染。

*根际微生物产生的代谢物或胞壁成分触发植物防御反应，包括叶绿素含量增加、抗氧化酶活性提高和病害相关基因表达增强。

3.微生物寄生：

*某些土壤微生物具有寄生性，专门攻击和破坏病原菌孢子或菌丝体。

*这些微寄生菌产生水解酶或抗菌物质，抑制病原体的存活和传播。

4.拮抗代谢物：

*土壤微生物产生各种次生代谢物，具有抗菌或抑制病原菌活性的作用。

*这些代谢物包括抗生素、挥发性化合物和多糖，干扰病原体的代谢过程。

5.促进植物生长：

*健康的土壤微生物群落促进植物生长，使植物更加健壮，更能抵抗病害。

*有益微生物产生植物激素、溶解养分，改善土壤结构和养分吸收。

6.生防剂的利用：

*土壤微生物群落可用于开发生物防治剂，控制土壤病害。

*特定的菌株（如枯草芽孢杆菌、木霉）被商业化生产，作为生物杀菌剂或根施菌剂，抑制土传病害。

实验证据：

*研究表明，缺乏有益微生物的土壤更容易发生病害，而引入有益微生物群落可以有效减少病害的发生率和严重程度。

*例如，一项研究发现，在苹果果园中接种枯草芽孢杆菌，减少了根腐病的发病率达50%。

*另一项研究表明，向土壤中接种木霉菌株，抑制了玉米根腐病40%。

结论：

土壤微生物群落是土壤病害抑制的关键因素，通过多种机制抑制病原体的生长和传播。管理和培育健康的土壤微生物群落对于促进土壤健康和减少病害至关重要。第六部分人类活动对微生物群的影响关键词关键要点农业活动

*土壤侵扰：耕作、施肥和杀虫剂的使用会破坏土壤结构，减少微生物群落的多样性和活性。

*单一作物种植：连续种植同一种作物会减少土壤微生物群落的多样性，增加病虫害风险。

*化学农药：杀虫剂、除草剂和杀菌剂等化学品会直接杀死有益微生物，扰乱土壤微生态平衡。

气候变化

*温度变化：极端温度会影响微生物生长和活性，特别是涉及到对温度敏感的共生菌。

*降水模式变化：干旱或洪水会导致土壤湿度变化，影响微生物存活和代谢活动。

*气候极端事件：强风暴、干旱或洪水可以物理性地冲走微生物或改变土壤性质，影响其栖息地。

土地利用变化

*城市化：城市化会导致土壤密封和失去植被覆盖，破坏微生物栖息地并降低微生物多样性。

*森林砍伐：森林砍伐减少了有机质输入，改变了土壤理化性质，影响微生物生存条件。

*湿地改造：湿地改造用于农业或城市发展，会破坏微生物多样性丰富的湿地生态系统。

污染

*重金属：重金属污染会抑制微生物生长和活动，导致土壤微生物群落多样性下降。

*有机污染物：多氯联苯(PCB)等有机污染物可以生物累积，影响微生物生态系统和土壤健康。

*塑料：塑料碎片会物理性地破坏土壤结构，影响微生物群落组成和功能。

全球化

*物种入侵：引入外来物种可能会与本土微生物竞争资源或改变土壤性质，影响微生物群落平衡。

*贸易和旅游：贸易和旅游活动可以携带和传播微生物，可能会引入或传播外来病原体或有害微生物。

*抗生素耐药性：抗生素耐药性基因的传播可以通过全球化活动，导致土壤中抗生素耐药性微生物的增加。人类活动对微生物群的影响

人类活动对土壤微生物群产生了重大影响，以下为具体影响：

农业活动：

*耕作和土地利用变化：耕作破坏了土壤结构，导致微生物栖息地丧失和多样性下降。土地利用变化，如从森林到农田的转变，也会改变土壤微生物群组成。

*肥料和农药：化肥和农药的使用可以改变土壤化学性质，影响微生物活动。高水平的化肥可以抑制硝化菌，而农药可以杀死有益微生物。

*灌溉：灌溉可以改变土壤水分含量，影响微生物群结构和功能。过量灌溉会导致排水不良，从而促进厌氧菌的生长。

城市化：

*土壤密封：建筑和基础设施的扩展导致土壤密封，阻碍了氧气和水分的渗透，破坏了微生物栖息地。

*污染：城市地区的重金属、有机污染物和废物的污染会对微生物群产生毒性影响。污染物可以抑制微生物活性，改变群落结构。

工业活动：

*重金属和有毒化学物质：工业活动释放的重金属和有毒化学物质可以通过土壤渗透到微生物群中，导致毒性作用。

*采矿：采矿破坏了土壤结构，释放了有害物质，导致微生物群多样性下降。

气候变化：

*温度升高：温度升高促进一些微生物的生长，同时抑制其他微生物。它还可以改变土壤水分含量，影响微生物活动。

*干旱和洪水：干旱和洪水会极大地改变土壤水分含量，导致微生物群组成发生变化。

*酸化：大气中二氧化碳浓度的增加会导致土壤酸化，这可能会改变微生物群结构和功能。

其他影响：

*入侵物种：入侵物种可以携带外来微生物，竞争本地微生物的资源并改变微生物群组成。

*过度放牧：过度放牧会压实土壤，破坏微生物栖息地并降低微生物多样性。

*旅游和休闲：旅游和休闲活动可以通过踩踏、废物弃置和引进外来物种来改变土壤微生物群。

数据：

*耕作导致土壤微生物多样性下降30-70%。

*施用化肥会抑制硝化菌的数量，高达80%。

*重金属污染会导致土壤微生物生物量减少50-90%。

*温度升高5摄氏度会导致土壤微生物群组成发生10-30%的变化。

*入侵物种会增加土壤微生物多样性，但也会改变群落结构，降低优势种类的丰度。第七部分微生物群调控促进土壤生态系统服务微生物群调控促进土壤生态系统服务

微生物群在维持土壤健康方面发挥着至关重要的作用，通过调控各种生态系统服务，包括：

有机质分解和土壤肥力

*微生物群分解有机残留物，释放养分（如氮、磷和钾）供植物吸收。

*它们合成腐殖质，这是土壤肥力的关键成分，有助于保水、保肥和改善土壤团聚体。

养分循环

*微生物群参与养分循环，包括固氮、硝化和反硝化。

*固氮菌将大气中的氮气转化为植物可利用的氨。

*硝化菌将氨氧化为硝酸盐，而反硝化菌将硝酸盐还原为氮气。

病原体抑制和土壤健康

*微生物群产生抗生素和酶，抑制病原菌的生长。

*竞争性拮抗和寄生作用帮助控制病原菌的种群。

*健康的微生物群有利于植物抗病性，减少疾病爆发。

温室气体排放

*微生物群通过分解有机物和合成甲烷和其他温室气体影响温室气体排放。

*对微生物群的调控可以减少温室气体排放，缓解气候变化。

土壤结构和水文

*微生物群产生粘多糖和外聚物，有助于形成土壤团聚体，改善土壤结构。

*团聚体孔隙率增加，促进水分渗透和保水性。

*健康的微生物群可以提高土壤的抗侵蚀能力。

微生物群调控促进土壤健康的方法

*有机质管理：添加有机残留物（如堆肥、作物残茬）为微生物群提供食物来源。

*轮作：不同的作物具有不同的根系分泌物和微生物群，轮作可以促进微生物群多样性和功能。

*减少土壤扰动：免耕和最小耕作等做法有助于减少对微生物群的破坏。

*生物接种：向土壤中引入有益微生物，如固氮菌或病原体抑制剂。

*生物炭：富含碳的生物炭可以提供微生物群的栖息地，促进其生长和活动。

结论

微生物群调控是促进土壤健康和生态系统服务可持续管理的关键。通过理解和管理微生物群，我们可以增强土壤肥力、抑制病害、减少温室气体排放，以及改善整体土壤健康。第八部分微生物群调控在土壤管理中的应用关键词关键要点【土壤健康调控】

1.优化微生物群落结构，提高土壤有机质含量，改善土壤团粒结构。

2.促进有益微生物的定植和繁殖，抑制有害微生物的生长。

3.提高土壤养分利用率，增强土壤保水保肥能力。

【土壤病害防治】

微生物群调控在土壤管理中的应用

微生物群调控已成为土壤管理实践中一项重要的举措，旨在优化土壤健康和作物生产力。通过促进有益微生物群落，抑制病原体，并增强土壤生态系统功能，微生物群调控提供了许多好处。

养分周转和植物营养

微生物群在养分周转和植物营养中扮演着至关重要的作用。分解者微生物分解有机物，释放出氮、磷和钾等养分，使植物能够吸收利用。固氮细菌能够将大气中的氮气转化为植物可用的形式，从而减少对合成肥料的依赖。此外，根际微生物通过共生关系，向植物提供养分，促进根系发育和整体植物健康。

病害防治

微生物群调控可以帮助防治土壤病害。有益微生物能够抑制病原体的生长和繁殖。例如，枯草芽孢杆菌能够产生抗生素，抑制真菌病原体的生长。此外，建立健康的微生物群落可以增强土壤结构和抑制侵蚀，从而减少病原体进入植物根系的途径。

土壤结构和水文特性

微生物群落有助于改善土壤结构和水文特性。菌根真菌通过与植物根系形成共生关系，增强根系吸收水分和养分的能力。土壤细菌和放线菌分泌粘多糖，有助于形成土壤团聚体，改善土壤结构和保水能力。这有助于减少土壤侵蚀并提高作物抗旱能力。

减少化学投入

微生物群调控可以减少对化学投入的依赖，包括合成肥料和农药。通过优化土壤养分循环，可以降低肥料使用量。此外，有益微生物的抑制作用可以减少病害的发生，从而减少农药的使用。

具体应用

微生物群调控在土壤管理中的应用包括：

*施用微生物接种剂：引进有益微生物，促进养分周转、病害防治和根系发育。

*使用有机肥：富含微生物的有机肥有助于建立健康多样的微生物群落。

*减少耕作和土壤扰动：保留土壤微生物群落，促进土壤结构和养分循环。

*轮作和间作：引入多样化的植物种类，为不同的微生物群落提供栖息地和食物来源。

*覆蓋作物：建立植被覆盖，抑制杂草，增加有机质，并促进微生物活动。

结论

微生物群调控是改善土壤健康和作物生产力的宝贵工具。通过促进有益微生物群落，抑制病原体，并增强土壤生态系统功能，微生物群调控可以减少化学投入，提高作物产量，并确保土壤的可持续性。通过在土壤管理实践中整合微生物群调控策略，可以优化土壤健康，增强植物弹性，并实现更可持续的农业系统。关键词关键要点主题名称：土壤微生物群的多样性

关键要点：

1.广阔的多样性：土壤微生物群的多样性令人难以置信，由多种细菌、真菌、古菌、原生动物和病毒组成。

2.差异性分布：土壤微生物群落的多样性在不同土壤类型、气候条件和地理区域之间存在显着差异。

3.