实验十四 血清甘油三酯（TG）的测定

实验十二血清甘油三酯（TG）的测定血清甘油三酯测定方法较多，但主要包括提取、吸附、皂化、氧化，还原及显色等步骤。近年发展的酶学方法测定操作步骤虽然简单，但要许多纯酶制剂，此外还有光散射测定法，亦需要特点器材，故不易推广使用，现介绍两种常用的方法：一、酶法测定甘油三脂【原理】甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸，甘油和ATP在甘油激酶（GK）的作用下生成3－磷酸甘油和ADP，3－磷酸甘油经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢。过氧化氢、4－氨基替吡啉和苯酚在过氧化物酶（POD）的微化生成红色的醌类化合物，颜色的深浅与含量成正比。反应过程如下：1、TG甘油＋脂肪酸2、甘油＋ATP3－磷酸甘油＋ADP3、3－磷酸甘油＋O2磷酸二羟丙酮＋H2O24、H2O2＋4－氨基安替吡啉＋苯酚红色醌类化合物【试剂】TC酶试剂盒（商品）【操作】取三支试管，按下表操作：标准管测定管空白管血清（μl）—20—TG标准液（μl）（2mg/ml）20——TG酶工作液（ml）1.01.01.0H2O（μl）——20混匀，37℃【计算】TG（mg%）×2×0.02×正常值：50－150mg％【注意事项】1、清晨空腹血清为好。2、干粉配成酶工作液后，在2—8℃【临床意义】血清TG随进食脂肪后即见上升并出现混浊。空腹脂肪餐后2—4小时内，血清混浊度及甘油三酯含量达高峰，8小时后，基本恢复空腹水平。血清TG有随年龄而上升的趋势，体重超过标准者也往往偏高。家庭性脂质代谢紊乱、糖尿病、肾病综合症、粮原累积病、动脉粥样硬化、酒精中毒、垂体、甲状腺功能低下者、胰腺炎等疾病TG可增高。原发性β－脂蛋白缺乏、甲状腺机能亢进、肾上腺皮质机能不全等疾病TG均可降低。二、乙酰丙酮法【原理】血清中甘油三酯经正庚烷一异丙醇混合溶剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化成甘油，并进一步用过碘酸氧化成甲醛，在NH4＋的存入下，甲醛与乙酰丙酮反应生成3,5—二乙酰—1,4—二氢二甲基吡啶，后者为带荧光的黄色物质。与同样处理的标准液比色计算，即得血清中甘油三酯的含量，反应式如下：【试剂】1、抽提剂：正庚烷/异丙醇＝2/3.5（v/v）2、0.04MH2SO43、异丙醇（A.R）4、皂化试剂：取6.0gKOH溶于60ml蒸馏水中，然后取异丙醇40ml混合，置棕色瓶中室温保存。5、氧化试剂：称取65mg过碘酸钠溶于约50ml蒸馏水，然后加入7.7g无水醋酸铵溶解，再加6ml冰醋酸，并加水至100ml。贮棕色瓶内室温保存。6、乙酰丙酮试剂：0.4ml乙酰丙酮加到100ml异丙醇中，混匀，置棕色瓶内室温保存。7、三油酸甘油酯标准液：贮存液（10mg/ml）：精确称取三油酸甘油酯1.000g，溶解于抽提剂中，定容至100ml，置冰箱存。应用液（1mg/ml）：贮存液用抽提剂10倍稀释，置冰箱保存。【操作】带塞试管3支，编号，按下表操作：测定管标准管空白管血清（ml）0.2——应用标准液（ml）—0.2—蒸馏水（ml）—0.20.2抽提剂（ml）2.52.32.50.04MH2SO4(ml)0.50.50.5边加边摇，加好后，剧烈振摇15分钟，静置分成二相后，准确吸取各管上层清液0.3ml，分别加至另外三支试管中。按下表操作： 异丙醇（ml）1.01.01.0皂化试剂（ml）0.30.30.3充分混匀，置65℃氧化试剂（ml）1.01.01.0乙酰丙酮试剂（ml）1.01.01.0混匀，置65℃【计算】甘油三酯mg=×0.2×=