体外诊断试剂分析特异性研究

2/2体外诊断试剂分析特异性研究

2023-04-2808:10体外诊断试剂注册申报资料的分析性能评估主要包括准确度、精密度、包容性、检出限、分析特异性、高剂量钩状效应、测量区间及可报告区间等项目的研究资料。其中分析特异性研究是性能评估中的重要资料，通过模拟产品实际使用过程中各种干扰因素可能对检测结果产生的影响，为产品有效性提供证据。分析特异性研究主要包括交叉反应和干扰试验，根据方法学、检测靶标、样本类型等不同，分析特异性的要求也存在区别。

一、交叉反应

交叉反应物主要考虑因素包括：

1）结构类似物，由于反应原理的相似性，结构类似物是交叉反应验证的重要部分，如具有同源性的抗原结构、具有同源性序列的核酸片段、核酸序列相近或具有同源性的野生型或其他突变类型序列、检测范围外的型别、同类药物中的所有药物/化合物和药物代谢物、以及易共存的其他类似物。如CYP2C19药物代谢酶基因多态性检测试剂应对靶标的同源性序列（CYP2C19的其他突变序列、CYP2C9基因序列等）进行交叉反应验证；EGFR突变基因检测试剂应对EGFR基因不同序列、HER家族不同基因、不同浓度的野生型人DNA样本、非人类基因组基因等进行交叉反应验证。

2）易引起相同或相似的临床症状的其他病原体、相同或相似的临床症状出现时，体内易升高的其他蛋白、采样部位正常寄生或易并发的其他微生物（包含近缘微生物）。如冠状病毒检测试剂盒应考虑易引起相似临床症状的流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、诺如病毒等；病原体抗体检测试剂盒需考虑高浓度病原体特异性IgG抗体与特异性IgM抗体的交叉反应；不同采样部位的正常寄生微生物，如宫颈拭子样本应选择在人类泌尿、生殖道寄生微生物或病原体，鼻拭子样本应选择呼吸道常见微生物。

3）原材料设计可能引入的其他因素：如原材料为鼠源单抗，则应验证人抗鼠抗体（HAMA）的交叉反应；如检测试剂采用基因重组抗原，应增加对重组基因导入微生物特异性抗体的交叉反应评价。

4）交叉反应验证的样本，应尽量采用临床样本或病原体培养物。根据产品特点选择潜在的交叉反应物质进行验证，一般建议选择高浓度交叉反应物水平进行验证，细菌或者真菌的最低浓度为106CFU/mL；病毒的最低浓度为105PFU/mL；人野生型DNA至少包含100ng/μL野生核酸样本。对于交叉反应中病原体的最低浓度，生产商也可根据病原体的具体特性规定相应浓度及浓度单位，应提供用于所有用于交叉反应验证的病原体的制备方法、来源、种属和浓度信息，可选择已上市产品进行确定，如无已上市产品，也可通过企业自建的稳定合理方法确认。

二、干扰试验

1）干扰物质类型：干扰物质本身一般不能与试剂产生反应，但能干扰待测分析物在检测系统中的反应效率，从而影响试验结果的准确性。干扰因素主要包括内源性干扰和外源性干扰，内源性干扰主要为正常生理和病理状态下的人体代谢产物，外源性干扰物主要为常用药物及其代谢物、患者群体使用的药物及其代谢物、样本采集或处理过程中接触到的物质如抗凝剂、防腐剂等。

2）干扰物质举例：样本类型为血清、血浆、全血的检测试剂盒，常见内源性干扰物主要包括血红蛋白、脂类、胆红素、胆固醇、自身抗体、疾病相关蛋白、患者体内异常的生化代谢物等；常见的外源性干扰物质包括血浆/全血样本抗凝剂、常用药物等。以鼻拭子为受检样本的呼吸道病原体检测试剂盒，内源性干扰主要包括鼻分泌物或黏液，如粘蛋白、血液，外源性干扰主要包括鼻咽部局部药物、全身性药物如抗病毒药物、抗生素等；尿液样本干扰物需考虑尿液中常见代谢物、pH等。

3）干扰物质的验证：一般采用添加干扰物质的样本进行研究，为避免基质效应，如干扰物质与适用样本不同，则添加量宜少于总体积的5%。首先对可疑干扰物质采用临床样本中的最高浓度（最差情形）进行干扰筛查或验证，一般采用配对比对的方式，比较添加与未添加高浓度干扰物质的样本检测结果的差异。如果差异超出接受范围或对检测结果有显著性影响，可确认该物质为干扰物质，可进一步评估该干扰物质浓度与干扰程度之间的关系；如果差异在接受范围内或对临床无显著性影响，可认为该浓度的物质不产生干扰，在产品说明书中明确不产生干扰的物质浓度上限。干扰实验建议采用包含弱阳性水平在内，至少两个