TGXTC 0011-2024 基于酶联免疫法（ELISA）甘蔗宿根性早期评价

ICS65.020.20CCSB05GXTC团 体 标 准T/GXTC0011—2024基于酶联免疫法（ELISA）甘蔗宿根性早期评价Earlyevaluationofsugarcaneperennialrootbasedonenzyme-linkedimmunoassay(ELISA)（完成时间：2024年7月3日星期三）2024-07-24发布 2024-08-05实施广西热带作物学会  发布T/GXTC0011T/GXTC0011—2024IIII前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广西壮族自治区亚热带作物研究所提出并宣贯。本文件由广西热带作物学会归口。T/GXTC0011T/GXTC0011—2024PAGEPAGE1基于酶联免疫法（ELISA）甘蔗宿根性早期评价范围本文件规范了基于酶联免疫法（ELISA）甘蔗宿根性早期评价的术语和定义、原理、材料和试剂、仪器设备、检测步骤和数据处理。本文件适用于甘蔗组培苗、种苗、种茎及大田植株的宿根蔗宿根性的早期评价。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求术语和定义下列术语和定义适用于本文件。甘蔗宿根性 Sugarcaneperennial甘蔗宿根性是指甘蔗在收斩后留下的地下蔗茎和根系继续存活并再次发株的能力，其强弱表现在宿根发株的快慢强弱和数量，最终成茎率、有效茎数和产蔗量高低等。酶联免疫法 Enzymelinkedimmunosorbentassay缩略语 Acronym下列缩略语适用于本文件。ABA:脱落酸(Abscisicacid)IAA:生长素(Indoleaceticacid)GA3:赤霉素(Gibberellin)CAT:过氧化氢酶(Catalase)SOD:超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase)PAL:苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanineammonia-lyase)SS:蔗糖合成酶(Sucrosesynthase)原理在甘蔗宿根性的研究中，植物激素如生长素（IAA）、赤霉素（GA）、脱落酸（ABA）等，可能影响蔗芽的萌发、根系的发育和植株的整体生长。过氧化氢酶（CAT）、植物苯丙氨酸解氨酶（PAL）（Prot）（SS）ELISA（OD值），通过标准曲线计算样品中植物激素和酶的浓度。材料和试剂材料试验设计及田间管理试验采用随机区组田间设计，57m1.2m3个小区。新植蔗当312.8芽/m1月收获，保留宿根，宿根蔗次年1月收获。新植蔗和宿根蔗的田间管理均与当地甘蔗高产栽培管理相同。ELISA试剂盒IAA检测试剂盒、ABA检测试剂盒、GA3检测试剂盒、CAT检测试剂盒、SOD检测试剂盒、Prot检测试剂盒、PAL检测试剂盒、SS检测试剂盒。除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中三级水的要求。见附录A。仪器设备分光光度计波长范围（325nm～800nm），波长准确度（±2nm）。酶标仪波长范围（200nm～1000nm）,精度：SD<0.001Abs或CV0.5%，@450nm(0Abs～3Abs)。培养箱控温范围：RT+5～RT+65，输入功率：450W，定时范围：1min～9999min。移液器10µL～100µL、20µL～200µL、100µL～1000µL。离心机转速100rpm～14800rpm，步长100rpm，容量1.5mL/2.0mL×24，温控-20℃～40℃。检测步骤试样的采集与准备3样品溶液的准备取回的嫩根（步骤7.1）加入2mL生理盐水冰浴研磨捣碎，4℃，9550rpm离心10分钟，取上清液，待测。标准曲线的绘制450nm1cm试样的测定50µL40L10µL。按照酶联免疫试剂盒所述操作步骤对待测试样（液）进行定量检测，重复三次。数据处理待测液浓度计算按照试剂盒说明书提供的计算方法以及计算机软件，将待测液吸光度代入7.3所获得标准曲线，计算待测液浓度。宿根性强弱评价方法采用WPS软件进行数据处理和作图。将参与评价指标相对数据划分为5级。对每一品种所测指标相对值进行分级，使每一指标都得到相应级别值。公式为：D=(Hmax-Hmin)/5（1）E=[(H-Hmin)/D]+1（2）式中，Hmax为各指标相对数据最大值；Hmin为各指标相对数据最小值；H为各指标相对数据任意值；D为得分级差（每得1分之差）；E为各材料每个指标的级别值。通过计算可以得到鉴评矩阵。权重系数为每一指标在综合评价中的权重，计算公式为：任意指标权重系数B=任意指标变异系数/各指标变异系数之和（3）综合评价值其计算公式为：Vi=ΣEij×Bj（i=1，2…8；j=1，2…4）,（4）式中，Vi为每一份材料综合评价值；Eij为各相对数据的级别值；Bj为对应指标权重系数。宿根性强弱判定标准甘蔗宿根性强弱根据综合评价值Vi确定，Vi值越高，说明该材料的宿根性越好。附 录 A（资料性）表A.1给出了内源激素和酶活检测试剂盒。表A.1 内源激素和酶活检测试剂盒产品名称规格数量（盒）备注植物吲哚乙酸(IAA)ELISA试剂盒48T1定量植物脱落酸(ABA)ELISA试剂盒48T1定量植物赤霉素(GA3)ELISA试剂盒48T1定量植物过氧化氢酶(CAT)ELISA试剂盒48T1酶活植物超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒48T1酶活植物蛋白酶(Prot)ELISA试剂盒48T1酶活植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒48T1酶活植物蔗糖合成酶(SS)ELISA试剂盒48T1酶活表A.2给出了试剂盒组成。表A.2 试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标