2020-2021学年新教材高中生物第1章发酵工程2

微生物的基本培养技术

新课程标准

1.基于牛肉膏蛋白陈培养基的实例分析，说明培养基的概念、种

3.1.1阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净

类及营养成分的种类和作用。(科学思维)

的微生物培养物的前提

2.通过学习消毒和灭菌的方法，认识二者的异同,认同灭菌是获

3.1.2阐明无菌技术是在操作过程中,保持无

得纯净的微生物培养物的前提*保持无菌物品与无菌区域不

菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术

被其他微生物污染。(科学思维)

3.1.4概述平板划线法和稀释涂布平板法

3.运用微生物纯培养原理和无菌技术，通过平板划线法接种并

是实验室中进行微生物分离和纯化的常用

分离得到酵母菌单菌落,对实验结果进行分析与评价。(科学

方法

探究、科学思维)

必备知识•素养奠基

一、培养基的配制

1.培养基的概念:人们按照微生物对食养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质一

一培养基，用以培养、分离、鉴定、保在微生物或积累其代谢物。

2.培养基的分类:按照物理性质不同分为两类。

(1)液体培养基:呈液体状态的培养基,不加入凝固剂(如琼脂)。

(2)固体培养基:呈固体状态的培养基,加入凝固剂(如琼脂)。

3.营养组成:各种培养基一般都含有水、碳源、氮遮和无机盐，此外还需要满足微生物生长对

但、特殊营养物质以及鱼的需求。

4.培养基特殊需求：

(1)培养乳酸杆菌时,在培养基中添加维生素。

(2)培养霉菌时,将培养基调至酸性。

(3)培养细菌时,将培养基调至中性或弱碱性。

(4)培养厌氧微生物时,需要提供无氧的条件。

万激疑

有同学认为液体培养基含有水,而固体培养基是没有水的,这种想法对吗?为什么？

提示:不对。液体培养基和固体培养基都含有水分,它们的区别为是否添加凝固剂。

二、无菌技术

1.无菌技术关键:防止杂菌污染。

2.消毒与灭菌：

⑴概念：

①消毒:使用较为温和的物理、化学或生物等方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物（不包

括芽胞和胞子）。

②灭菌:使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物（包括芽胞和抱子）o

（2）类型与方法：

连一连:将无菌技术类型、常用方法和适用对象用线连起来。

尸.灼烧灭菌^----L接种针（环）

①消毒干热灭菌J

力.操作空间（接种室）

族c.巴氏消毒-皿培养皿

②灭菌紫外线消毒/

M牛奶等不耐高温液体

\e.化学药物（酒精）-V.操作者双手

高压蒸汽灭菌一F-培养基

皿试管口

；?激疑

在无菌技术中，为什么许多实验操作都要在酒精灯火焰附近进行？

提示:酒精灯火焰周围温度高,细菌少,甚至无菌,这样可以避免周围环境中微生物的污染。

三、微生物的纯培养

1.微生物纯培养的概念：由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物,获得纯培养物的

过程就是纯培养。

2.酵母菌的纯培养：

（1）纯培养的原理:设法在培养基上得到由单个微生物繁殖形成的纯培养物（单菌落）。

（2）纯培养方法:平板划线法和稀释涂布平板法。

（3）纯培养过程：

①制备培养基:配制培养基一灭菌一倒平板

②接种和分离酵母菌:用壬板划线法在马铃薯培养基表面接种酵母菌。下列接种过程正确的顺

序是baefcgd

③培养酵母菌:待菌液被培养基吸收,将接种后的平板和一个未接种的平板倒置,放入28。。左

右恒温箱中培养24〜48h。

(4)结果分析与评价：

结合酵母菌纯培养的过程,判断下列分析的正误：

①未接种的平板上没有菌种，此实验没有必要培养。(X)

提示:培养未接种的平板起到对照作用，可以检验培养基的制备是否合格。

②在未接种的培养基表面长出了菌落，说明培养基制备不合格。

③若无菌操作合格,在接种酵母菌的培养基上应观察到不同形态、不同颜色的酵母菌菌落。

(X)

提示:应该是观察到形态、颜色一致的酵母菌单菌落。

④如果将酵母菌放置在35℃恒温箱中培养，相同时间后观察，菌落会比28℃条件下的大，数

量多。(X)

提示:酵母菌适宜生长温度为28℃,35℃条件下由于温度较高，酵母菌生长慢。

⑤某同学使用平板划线法纯化酵母菌,培养48h后，只在培养基的第一划线区域长出密集的菌

落,其他区域未长出菌落,可能是这位同学第二次灼烧接种环未冷却就直接划线导致的。

(V)

万激疑

将接种后的平板放在恒温培养箱中培养有必要吗?为什么？

提示:有必要。恒温培养箱可以提供微生物生长的适宜温度。

关键能力•素养形成

知识点一培养基的配制

1.培养基的成分及功能:

营养要素来源功能

碳源无机

NaHC%等含碳无机物

(提供碳源

①构成细胞物质和一些代谢产物；

碳元

有机糖类、脂质、蛋白质、有机②有机碳既是碳源又是能源

素的

碳源酸、石油等

物质)

氮源无机

镂盐、硝酸盐等将无机氮合成含氮的代谢产物

(提供氮源

氮元

有机牛肉膏、蛋白陈、尿素、氨

素的合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物

氮源基酸等

物质)

生长因子

(生长必不①酶和核酸的组成成分；

维生素、氨基酸、碱基

可少的微②参与代谢过程中的酶促反应

量有机物)

①良好的溶剂

水外界摄入

②维持生物大分子结构的稳定

为微生物提供除碳、氮以外的各种重

无机盐无机物

要元素

【特别提醒】有关培养基营养物质的三点提醒

(1)培养不同的微生物所需要的营养物质可能不同。

①自养型微生物的培养基主要以无机营养为主。

②异养型微生物的培养基主要以有机营养为主。

(2)微生物需要补充生长因子,是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。

(3)微生物需要量最大的是碳源。能合成含碳有机物的是自养型，反之则为异养型。

2.培养基的种类:

分类

培养基种类培养基特点作用

标准

物理固体培养基加凝固剂，微生物的分离与鉴定、活菌计数、保藏

性质如琼脂菌种

半固体

容器放倒不致流出，剧烈震动则破散观察微生物的运动、分类鉴定

培养基

液体培养基不加凝固剂常用于工业生产

选择培养基根据某种微生物的特殊营养要求配制选择、分离

功能加入能与目的菌的代谢产物发生显色反

鉴别培养基鉴定

应的指示剂

成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产

来源合成培养基用已知的化学物质配制分类鉴定

素养案例

微生物种类繁多,培养条件也各不相同。下列关于微生物培养基的描述正确的是

()

A.同一物质不可能既作碳源又作氮源

B.凡是碳源都能提供能量,氮源有些也能提供能量

C.牛肉膏蛋白膝培养基是培养细菌、病毒等常用的培养基

D.培养硝化细菌,可用无机碳源的培养基

【解题导引】

碳源.氮源①提供碳元素的为碳源

的判断②提供氮元素的为氮源

①必须寄生在活细胞内

病毒的特点

②不能用培养基直接培养

【解析】选D。对异养微生物来说，含C、H、0、N的化合物既是碳源，又是氮源，如牛肉膏,A

错误;有机碳源能提供能量,无机碳源不能提供能量,有些氮源也能提供能量,B错误;病毒必须

寄生在活细胞内才能生活,不能用普通培养基培养,必须先培养细胞再培养病毒,C错误;硝化

细菌是自养微生物,可以通过化能合成作用合成含碳有机物,D正确。

【误区警示】微生物的碳源、氮源和能源物质的两个认识“误区”

⑴误认为所有碳源和氮源都可提供能量:有机碳源和有机氮源是异养微生物的能源物质。

(2)误认为所有微生物的能源都是有机碳源：自养微生物的碳源一般是CO?,光能自养微生物的

能源是光能，例如蓝细菌等;化能自养微生物的能源是化学物质,例如硝化细菌的能源物质是

NH3O

【素养•探究一一母题追问】

(1)科学思维一一分析与推理

结合病毒的特点,试分析如何培养病毒,写出简要思路。

提示:可以先在特定培养基上培养病毒的宿主细胞,然后让病毒侵染宿主细胞,从而达到培养

病毒的目的。

(2)科学思维一一演绎与推理

结合相关知识，判断下面培养基的各种成分能提供的营

养物质类别：

成分蔗糖(NH4)2S04FeS04维生素

提供的

————

营养

提示:碳源氮源(无机盐)无机盐生长因子

【素养•迁移】

下表是某微生物培养基成分,请据此回答：

编号成分含量

①粉状硫10g

②(NH4)2S040.4g

③K2HPO44.0g

④MgS049.25g

⑤FeS040.5g

⑥CaCL0.5g

⑦H20100mL

(1)上表培养基可培养的微生物类型是0

(2)若除去成分②,加入(OM)),该培养基可用于培养。

(3)表中营养成分共有类。

(4)不论何种培养基,在各种成分都溶化后分装前,要进行的是。

(5)若上表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是。

【解析】(1)由题表可知,该培养基中没有碳源,说明培养的微生物是从外界环境中获取碳源的,

因此培养的微生物是自养型微生物。

(2)该培养基若加入(CH2O),培养基中就有了碳源，但除去成分②,培养基中就没有了氮源,该培

养基就只能用于培养固氮微生物。

(3)题表中的营养物质有水、无机盐、无机氮源三类，缺乏碳源和特殊营养物质。

⑷微生物生长需要一定的pH,所以培养基装瓶前需要调节pH。

(5)该培养基中无凝固剂,为液体培养基。菌种的纯化和鉴定通常利用固体平板培养基以获得

单细胞菌落，因此需要加入凝固剂,如琼脂，将液体培养基转变成固体培养基。

答案：(1)自养型微生物

⑵固氮微生物

(3)3⑷调节pH

⑸琼脂(或凝固剂)

【补偿训练】

下列关于培养基的叙述，错误的是()

A.氮源、无机盐、水等是微生物生长不可缺少的营养物质

B.根据微生物自身的特点,使用不同碳源的培养基

C.可在培养基中加入磷酸氢二钾或磷酸二氢钾,用于维持pH的相对稳定

D.若要将微生物扩大培养,应使用固体培养基

【解析】选D。微生物的营养物质主要有碳源、氮源、无机盐、水和生长因子,A正确;根据微

生物自身的特点，使用含不同碳源的培养基，例如培养自养型的细菌,在培养基中不需加入碳

源,B正确;微生物培养基调节pH时可以用磷酸氢二钾或磷酸二氢钾,C正确;若要将微生物扩

大培养,一般用液体培养基,D错误。

知识点二无菌技术

1.无菌技术的概念:防止外来杂菌的入侵,并保持已灭菌物品及无菌区域不再被污染的方法，

称为无菌技术。

2.无菌技术的目的：

(1)可防止实验室的培养物被其他微生物污染。

(2)有效避免操作者自身被微生物感染。

3.无菌技术的选择原则：

(1)考虑效果:灭菌的效果比消毒要好。

(2)考虑操作对象的承受能力:活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒的方法,而不能采用

灭菌的方法。

4.无菌技术的方法一一消毒与灭菌:

方法条件应用范围

煮沸

在100℃下煮沸5〜6min一般物品，如家庭餐具等生活用品

消毒法

62〜65℃消毒

巴氏一些不耐高温的液体，如牛奶、啤酒、果

30min或80〜90℃处理30

消毒法酒和酱油等

s~lmin

消毒

化学用于双手、皮肤、伤口、动植物组织表面

70%〜75%的酒精、碘酒、氯

药物消毒和空气、水源、手术器械、塑料或玻

气、石炭酸、煤酚皂溶液等

消毒法璃器皿等消毒

紫外线

30W紫外灯照射30min接种室、接种箱、超净工作台

消毒法

灼烧在酒精灯火焰充分燃烧层灼涂布器、接种环、接种针或其他金属用具

灭菌烧等;接种过程中的试管口或瓶口灭菌

干热干热灭菌箱内160〜170℃玻璃器皿、金属用具等不适宜用其他方法

灭菌灭菌下灭菌2~3h灭菌需要保持干燥和能耐高温的物品

高压蒸汽灭菌锅：100kPa、

湿热

121℃条件下15~30min灭培养基及容器的灭菌

灭菌

菌

【特别提醒】消毒和灭菌的两点提醒

(1)作用原理是借助理化因素,通过使蛋白质变性来抑制微生物生命活动或杀死微生物。

(2)最根本区别是芽抱和抱子是否灭活,灭菌能杀死芽抱和抱子,因而灭菌更彻底。

产素养案例

防止杂菌入侵,获得纯净的培养物,是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是

()

A.实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒

B.在实验室中，不可吃东西、喝水,离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染

C.接种环、接种针等金属用具,直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌

D.使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境

【解题导引】明确以下三个关键点：

(1)对操作空间消毒的方法:紫外线消毒、化学药物消毒。

(2)适于灼烧灭菌的物品:接种环、接种针等金属用具。

(3)防止微生物感染:做好自身防护,对使用后的培养基进行灭菌。

【解析】选C„为防止杂菌污染,研究和应用微生物时应进行消毒和灭菌,实验室可以用紫外线

或化学药物进行消毒,A正确;在实验室中，不可吃东西、喝水,离开实验室时一定要洗手，以防

止被微生物感染,B正确;接种环、接种针等金属用具,直接在酒精灯火焰的充分燃烧层即外焰

部位灼烧灭菌,C错误;使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境,D正确。

【方法规律】灼烧灭菌的适用范围和方法

⑴灼烧灭菌适用于接种工具和试管口、瓶口的灭菌。

(2)接种工具灼烧灭菌:用酒精灯外焰按顺序充分燃烧;试管口、瓶口灭菌:迅速通过酒精灯外

焰。

【素养•探究一一母题追问】

(1)科学思维一一分析与综合

某同学在实验过程中不小心将灭菌的培养皿和未灭菌的培养皿混合了，那么这些培养皿还能

用于实验吗?为什么？

提示:不能。已灭菌的材料物品不能与周围物品接触，以防止污染。所以这位同学应将培养皿

再次灭菌后才能用于实验。

(2)科学思维一一演绎与推理

题中A项的化学药物消毒时,某同学想酒精浓度越高,消毒效果可能越好,于是他就用了95%的

酒精进行消毒，他的这种做法对吗?解释原因。

提示:不对。用酒精消毒时，体积分数为70%的酒精消毒效果最好，原因是浓度过高,菌体表面蛋

白质凝固成一层保护膜,酒精不能渗入其中。

【素养•迁移】

在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：

⑴在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具(填“可以”或“不可以”)放入干热

灭菌箱中进行干热灭菌。

(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点

是。

(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能,在照射前,适量

喷洒,可强化消毒效果。

(4)水厂供应的自来水通常是经过(填“氯气”“乙醇”或“高镒酸钾”)

消毒的。

⑸某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,而锅内并没有达到相应温度,最可

能的原因是-

【解析】(1)玻璃和金属材质的实验器具可以通过干热灭菌的方法来灭菌。

(2)巴氏消毒法是在70〜75℃煮30min或在80℃下煮15min,可以杀死牛奶中的微生物，

并使牛奶的营养成分不被破坏;高温瞬时消毒是在较短的时间内利用高温杀死微生物，由于时

间较短,营养物质损失较少。

(3)紫外线有消毒、灭菌的作用,在照射前,适量喷洒消毒液,可以强化消毒效果。

(4)自来水消毒通常采用“氯气”或“紫外线”等方法。

⑸使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求，但没有达到相应温度,最可能的原因是锅内

冷空气没有排尽。

答案：(1)可以

(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少

(3)破坏DNA结构消毒液

⑷氯气

(5)未将锅内冷空气排尽

【补偿训练】

高温灭菌的原理是()

A.每种微生物生长的最适温度是一定的

B.微生物对高温环境不适应

C.高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动

D.高温降低了环境中氧的浓度

【解析】选C。高温灭菌的目的是利用高温杀死包括芽抱和抱子在内的一切微生物。原理是高

温能使细菌的蛋白质变性，同时破坏核酸的结构,从而影响其正常的生命活动。

知识点三酵母菌的纯培养

1.制备马铃薯琼脂培养基：

⑴配制培养基：

(2)灭菌:培养基转移至锥形瓶,加棉塞,包上牛皮纸,如图所示,然后放入高压蒸汽灭菌锅中灭

菌,培养皿包扎后放入干热灭菌箱内灭菌。

(3)倒平板:待培养基冷却到500c左右时，在酒精灯火焰附近进行。具体操作过程:

①.在酒精灯火焰旁,右手拿

匚〉锥形瓶，左手拔出棉塞

右手拿锥形瓶,将瓶口迅速通过火

匚〉焰,目的是通过灼烧灭菌,防止瓶

口微生物污染培养基

用左手将培养皿打开一条稍大于瓶

口的缝隙(不要完全打开，以免杂

菌污染培养基)，右手将锥形瓶中

的培养基(约10~20mL)倒入培养

皿，左手立即盖上培养皿的皿盖

等待培养基冷却凝固后，将培养皿

1=＞倒过来放置可防止皿盖上的冷凝

水滴落在培养基上引发污染

【特别提醒】关于制备培养基的四点提醒

(1)如果需要调节培养基的pH,应该在定容完成后,灭菌之前进行操作。

(2)灭菌之后，倒平板时培养基的温度是50℃左右。因为凝固剂琼脂在98℃以上熔化,在44℃

以下凝固,倒平板时高于50。。则会烫手，低于500c时若不能及时操作,琼脂会凝固。

(3)倒平板的整个操作在酒精灯火焰旁进行,避免杂菌的污染。

(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间,否则此培养基不能用来培养微生物,因为空

气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。

2.平板划线法接种和分离酵母菌：

(1)平板划线法:通过接种环在固体培养基表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到

培养基表面。

(2)平板划线法结果：

平板划线示意图(A)及培养后菌落分布示意图(B)如下图所示。

(3)几次灼烧的目的:

灼烧时期目的

第一次操作

杀死接种环上原有的微生物,避免污染培养物

(取菌种前)

每次划杀死上次划线后接种环上残留的菌种,使下次划线的菌种直接来源于上次

线之前划线的末端，使每次划线菌种数目减少

划线结束杀死接种环上残存的菌种,避免微生物污染环境和感染操作者

【特别提醒】(1)灼烧接种环后，要冷却后才能进行操作，以免温度太高杀死菌种。

(2)第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生物的数目随着划线次数

的增加而逐渐减少，最终得到由单个细胞繁殖而来的菌落。

(3)划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。

(4)最后一次的划线不要与第一次的划线相连。

3.培养酵母菌:接种和未接种的平板在温度适宜的恒温箱中培养。

4.结果分析与评价：

⑴培养未接种的培养基的目的是检查培养基制备是否合格。未接种的培养基表面若有菌落生

长,则说明培养基被污染,应该重新制备;若无菌落生长,则说明未被污染。

(2)在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落,这些菌落在颜色、形状和大小上相似,酵母

菌菌落一般表面光滑,多呈乳白色。

(3)若在培养基中观察到不同形态的菌落,原因可能是菌液不纯,混入其他杂菌,或在实验操作

过程中被杂菌污染。

工素养案例

如图表示酵母菌纯培养的部分操作步骤，下列有关叙述正确的是()

A.步骤①操作时，待倒入的培养基冷却凝固后,盖上培养皿盖,将其倒置

B.步骤②接种环和试管口应先在火焰上灼烧消毒,接种环冷却后再放入试管中蘸取菌液

C.步骤③沿多个方向划线,使接种物逐渐稀释,最后一次的划线不能与第一次的相连

D.步骤④是将培养皿放在培养箱中培养,也需倒置,一段时间后所得到的都是酵母菌的菌落

【解题导引】本题的解题思路是：

【解析】选C。分析步骤①，倒完平板后立即盖上培养皿盖，冷却凝固后将平板倒过来放置,A

错误;分析步骤②,接种环和试管口需要先在火焰上灼烧灭菌,待冷却后才可以蘸取菌液进行

平板划线,B错误;分析步骤③,沿多个方向划线,使接种物逐渐稀释,最后一次的划线不能与第

一次的相连,培养后可出现单个的菌落,C正确;步骤④是将培养皿放在培养箱中培养,也需倒

置,如果操作过程受到污染,一段时间后所得到的不一定都是酵母菌的菌落,D错误。

【误区警示】本题常见误区有以下两种

(1)误认为需将培养基冷却后再盖上培养皿盖：倒完平板后立即盖上培养皿,而不是等培养基

冷却凝固后盖上培养皿盖。

(2)误认为只要有菌落,就是纯培养物:培养结果不一定是纯培养物,只有无菌操作合格时培养

的微生物才是纯培养物。

【素养•探究一一母题追问】

(1)科学思维——分析与综合

若要按照如图④的区域进行划线,那么在接种划线的操作过程中,共灼烧了几次接种环？

提示：图中共划了5个区域,在每次划线前后均需要对接种环灼烧灭菌，因此共需要灼烧接种环

6次。

(2)科学思维一一演绎与推理

在划线操作时,如果接种环不慎划破培养基,可以继续正常进行操作吗?为什么？

提示:不能继续使用。因为划破培养基会造成划线不均匀,难以分离单菌落,可能导致微生物的

无氧呼吸或杂菌污染等。

【素养•迁移】

微生物的分离和培养是现代生物工程应用中的重要环节。如图甲、乙、丙是酵母菌分离和培

养过程中部分操作和实验结果示意图，请据图回答有关问题：

⑴上图甲所示的是制备固体培养基时的实验操作步骤之一,它称为,若用该培养基

培养大肠杆菌，除考虑营养条件外,还要考虑、和渗透压等条件。

（2）培养酵母菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法

是O

⑶上图乙是平板划线法接种操作示意图,正确的操作顺序是A-B-（用

字母和箭头表示）；找出图乙中两处错误的操作（用字母表示）：、。

⑷上图丙是某同学用平板划线法接种后的培养基培养12h后的实验结果，如果培养基上—

,则说明无菌操作基本符合要求。

【解析】（1）图甲所示操作为倒平板，需要在酒精灯火焰旁进行操作。培养基中除营养成分外,

还应考虑pH、氧气、无菌、温度、渗透压等条件。

（2）检测培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察

培养基上是否有菌落产生,如有菌落,说明该培养基已被污染。

（3）平板划线法的操作顺序为灼烧接种环,冷却,挑取菌种,划线,灼烧接种环,划线,灼烧接种

环,平板倒置培养，即A-B-G-F-E-C-D-H。图乙中C操作应在酒精灯附近进行,D中划线

的首尾不应该相连。

（4）同一菌种的菌落颜色、形状、大小基本一致，如有杂菌污染，会有异常菌落出现，可根据菌

落的特征确定该菌落是否为酵母菌。

答案：（1）倒平板温度（氧气）pH（无菌）

（2）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生

⑶G-F-E-C-D-HCD

（4）生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点

【补偿训练】

在酵母菌的纯培养实验中，划线接种（甲）、培养结果（乙）如图所示,且甲、乙的对应位置

不变。下列有关叙述错误的是（）

A.配制培养基时需进行高压蒸汽灭菌

B.甲中a区域为划线的起始位置

C.连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落

D.图示实验过程中接种环灼烧了5次

【解析】选B。为了能彻底灭菌，配制的培养基需进行高压蒸汽灭菌,A正确;起始划线的区域

长出的菌落多且密，根据甲、乙对应区域对比，甲中a区域为划线的结束位置,B错误;连续划线

的目的是获得单个细菌形成的菌落,C正确；由于每次使用接种环前后都要灼烧灭菌,从图示甲

中4次划线接种就可推出,接种过程中接种环灼烧了5次,D正确。

【课堂回眸】

液体培养基米剂煮沸消毒法

固体培瓦基建巴氏消毒法

t言:化学药物消毒

水、无机盐、营养-

［紫外线消毒

氮源、碳源物质,

灭湿热灭菌

纯培养胤干热灭菌

制备培养基概念:灼烧灭菌

奖种和］酵母菌'

分离酵母菌的典培养厂

培养酵母菌,

课堂检测•素养达标

【概念•诊断】

1.防止杂菌入侵,获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提。请分析下列关于微生

物的纯培养操作,错误的是。

①无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微生物

②干热灭菌可以杀死微生物的营养细胞和部分芽抱

③经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭,所以不能在常温下长期保存

④培养基要进行高压蒸汽灭菌

⑤将接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌

⑥无菌技术中,若处理对象为液体,则只能消毒,不能灭菌

⑦为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

【解析】选①②⑥⑦。无菌技术的关键是防止杂菌的污染，①错误;灭菌能杀灭环境中一切微

生物,包括抱子和芽抱,②错误;经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，所以不能在

常温下长期保存,③正确;培养基用高压蒸汽灭菌,④正确;将接种环直接在酒精灯火焰的充分

燃烧层灼烧,可以迅速彻底地灭菌,⑤正确;无菌技术中,若处理对象为液体,可以用高压蒸汽

灭菌法灭菌,⑥错误。接种环经火焰灭菌后冷却后才能挑取菌落,⑦错误。

2.培养下列微生物，培养基中不用添加有机碳源的是（）

A.蓝细菌B.酵母菌C.醋酸菌D.乳酸菌

【解析】选A。酵母菌、醋酸菌、乳酸菌是异养微生物，蓝细菌是自养微生物，培养基不需要添

加有机碳源。

3.下列有关常见无菌操作的叙述，错误的是（）

A.用酒精擦拭双手

B.用氯气对水源消毒

C.实验操作应在酒精灯火焰附近进行

D.玻璃器皿（吸管、培养皿）可用酒精擦拭

【解析】选D。用酒精擦拭双手属于使用化学药剂消毒;用氯气消毒水源也属于使用化学药剂

消毒;实验操作应在酒精灯火焰附近进行，因为高温可防止杂菌污染;玻璃器皿（吸管、培养皿）

等应用干热灭菌法灭菌，利用酒精擦拭不能将所有微生物杀灭。

4.2020年,疫情中的最美逆行者,在给患者治疗时,要充分消毒并防护，以下说法中正确的是

（）

A.医务人员进入工作区要全身灭菌

B.接种疫苗前要对注射区域进行消毒

C.消毒与灭菌的含义本质是相同的

D.常用的消毒方法有灼烧法和高压蒸汽法

【解析】选B。医务人员进入工作区要全身消毒,A错误;接种疫苗前要对注射区域进行消毒,B

正确;灭菌是将处理物体中的一切生物全部杀灭,在经过灭菌后的物体中,不再存在任何活着

的生命;消毒是仅杀死物体表面或内部的一部分微生物,C错误;常用的消毒方法有煮沸消毒

法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法等,D错误。

5.（2020•江苏高考）为纯化菌种,在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所

示。下列叙述正确的是（）

A.倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整

B.图中I、II区的细菌数量均太多，应从III区挑取单菌落

C.该实验结果因单菌落太多,不能达到菌种纯化的目的

D.菌落周围的纤维素被降解后,可被刚果红染成红色

【解析】选B。本题主要考查平板划线法的相关使用技巧。倒平板后不需要晃动,A错误；I区、

II区没有出现单菌落,说明细菌数量太多,故应从III区挑取单菌落,B正确；出现单菌落即达到

了菌种纯化的目的,C错误;刚果红是一种染料,它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复

合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应,D错误。

【思维•跃迁】

6.生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类,

研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成

平板，然后在平板上划分数区,将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域,培养结果如图

所示,下列说法正确的是（）

A.倒成平板后直接培养可判断有无污染

B.倒成平板后需要进行灭菌处理

C.图示结果表明该菌需要生长因子乙或丙

D.生长图形法不能用于某些菌种的筛选

【解析】选Ao倒成平板后直接培养若有杂菌生长说明已被污染,若无杂菌生长说明没有污染,A

正确;灭菌应在倒平板之前,B错误;图示结果表明需要两种生长因子乙和丙,C错误;根据某些

菌种需要特殊的生长因子,可用生长图形法进行筛选,D错误。

7.无菌操作是微生物接种技术的关键。传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程均要无

菌操作。回答下列相关问题：

(1)消毒和灭菌是两个不同的概念，下列哪些事物适用于消毒处理o

①皮肤②饮用水③牛奶④注射器⑤培养皿

⑥接种环⑦培养基⑧果汁⑨酱油