TCAICC 05-2023 中药材中甲拌磷的快速检测 胶体金免疫层析法

全联农业产业商会发布备案号：送审稿2023-12-31发布I 2规范性引用文件 3术语和定义 4原理 5试剂与材料 6仪器与设备 7分析步骤 8结果判定 9结果确认 10性能指标 附录A（规范性）快速检测方法性能指标计算 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由全联农业产业商会提出。本文件起草单位：全联农业产业商会、北京勤邦科技股份有限公司、西北农林科技大学、宝鸡市妇幼保健院本文件主要起草人：郭树、王兆芹、万宇平、朱亮亮、吕欣、王欣、赵帆、魏力杰、刘飘雪、杜玲本文件为首次发布。1中药材中甲拌磷的快速检测胶体金免疫层析法本文件规定了中药材中甲拌磷的胶体金免疫层析快速检测方法。本文件适用于党参、黄芪、麦芽、薏苡仁等中药材中甲拌磷的快速定性测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。《中国药典》2020年版第四部0211药材和饮片取样法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法国市监食检规〔2023〕1号市场监管总局关于规范食品快速检测使用的意见3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的甲拌磷经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和试纸条中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对样品中甲拌磷进行定性判定。5试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。5.1试剂5.1.1甲醇（CH3OH）。5.1.2稀释液：由胶体金免疫层析试纸条配套提供，或按照其说明书配制。5.1.3参考物质：甲拌磷参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥98%。表1甲拌磷参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量C7H17O2PS325.2溶液配制5.2.1甲拌磷标准储备液（100μg/mL）：准确称取甲拌磷参考物质（5.1.3）1mg（精确至0.01mg），置于小烧杯中，用甲醇（5.1.1）溶解，定量转移至10mL容量瓶中，再用甲醇（5.1.1）定容，摇匀，配制成浓度为100μg/mL的甲拌磷标准储备液。-20℃避光保存，有效期6个月。5.2.2甲拌磷标准工作液（1μg/mL精密移取甲拌磷标准储备液（100μg/mL5.2.1）0.1mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.1）定容，摇匀，配制成浓度为1μg/mL的甲拌磷标准工作液。临用新配。5.3材料甲拌磷胶体金免疫层析试纸条，适用基质为中药材。需在阴凉、干燥、避光条件下保存。6仪器与设备6.1电子天平：感量为0.01g和0.01mg。6.2均质器。6.3离心机。6.4氮吹仪。6.5涡旋仪。6.6移液器：10μL～200μL、100μL～1000μL。6.7迷你金属浴。6.8胶体金读数仪（可选）。7分析步骤7.1试样制备取适量有代表性样品，充分均质混匀。7.2试样提取称取1g试样（精确至0.01g）放入离心管中，加入3mL甲醇（5.1.1），上下振荡30s，3000r/min以上离心3min；取1.0mL上清液至离心管中，50~60℃水浴氮气流下吹干；加入0.5mL稀释液（5.1.2），涡动20s后即为待测液。7.3测定步骤测试前，将未开封的试纸条恢复至室温。吸取100μL样品待测液于试纸条的加样孔中，室温反应10min后，直接进行结果判定。7.4质控试验3通过对比质控线(C线)和检测线(T线)的颜色深浅进行结果判定。目视判定示质控线(C线)显色，检测线(T线)颜色深于质控线(C线)或与质控线(C线)颜色质控线(C线)显色，检测线(T线)颜色浅于质控线(C线)或不显色，表明样品中甲无效阴性阳性4空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。9结果确认当检测结果为阳性时，采用参比方法进行确证。10性能指标10.1检出限：0.02mg/kg。10.2灵敏度：≥95%。10.3特异性：≥90%。10.4假阴性率：≤5%。10.5假阳性率：≤10%。10.6交叉反应率：与甲拌磷砜和甲拌磷亚砜交叉反应率为100%，与三唑磷交叉反应率≤本方法所述试剂、试纸条信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者应使用经过验证的满足本方法规定的各项性能指标的试剂、试纸条。本方法参比方法为《中国药典》2020年版第四部2341农药残留量测定法。5（规范性）快速检测方法性能指标计算快速检测方法各个性能指标计算方法见表A.1。表A.1快速检测方法性能指标计算方法N11N12N1.＝N11＋N12N21N22N2.＝N21＋N22N.1＝N11＋N21N.2＝N12＋N22N＝N1.＋N2.或N.1＋N.2＋＝pfN12/N1.×100＝100－灵敏度pf