DB 3705T 17-2024白榆组织培养育苗技术规程

DB3705TechnicalRegulationsforTissueCultureandShootsBreedingofUlmuspum 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由东营市自然资源和规划局提出、归口并组刘全全、陈纪香、孙兆楠、王银娟、唐辉、秦丽君、任爱凤、王健、魏超、燕友福、崔晓东。白榆组织培养育苗技术规程本文件规定了白榆（UlmuspumilaL.）组织培养育苗过程中的术语和定义、实验器皿及材料的清洗和灭菌、培养基的配制、外植体选择与处理下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期增殖培养multiplication锻炼的过程，使其定植后能够迅速适应容器外界的4组培工具及材料的清洗和灭菌4.1实验器皿、工具的清洗4.1.1浸泡1%～2%的盐酸溶液中浸泡过夜；用过的培养瓶须先将瓶外字迹擦除干净再浸泡；污染的培养瓶须先将瓶4.1.2洗刷4.1.3清洁标准4.2消毒灭菌4.2.1操作室、接种室及培养室熏蒸、辐射灭菌 超净工作台接种前用紫外灯照射20min~30min，并用75％酒精喷洒和擦拭台面；定期清洗4.2.2器皿、器械、培养瓶及培养基灭菌器皿、器械、培养瓶、培养基及添加剂等灭5培养基的配制5.1母液配制及贮存5.1.1母液配制5.1.1.1培养基母液配制5.1.1.2植物生长调节物质母液配制植物生长调节物质的母液配制方法参照附录5.1.2母液的保存母液保存参照附录B相关内容，贴好标签，注明母液的名称、浓度、溶剂类型、配制日期和配制人等5.2培养基配制及保存5.2.1配制前准备5.2.2配制定容先将白砂糖充分搅拌完全溶解，后加入母液不耐高温灭菌的植物生长调节剂需用过滤灭菌方式加），5.2.4琼脂溶解瓶口，待内壁水汽吹干后再盖好瓶盖或捆绑封口膜，对培养基5.2.6灭菌5.2.7贮存时间不应超过15d。4月至5月份，幼龄单株作为母体，挑选健康幼态的芽虫害的当年生半木质化小枝，将枝条保湿保存水洗净表面灰尘和菌体，洗净后，流水冲洗0.5快速将灭菌茎段的两端分别切掉2mm~3mm，余下的茎段含1个~2个侧芽。将基中，每瓶培养基均匀放置5个外植体，芽端在上，盖紧瓶盖或捆绑封口膜，标明编号，进行无菌苗的培置于温度25℃±2℃,光照强度2000lx~3000lx，相对湿度75%~85%，光照时间14h的环境下培养。d时，茎段上芽萌动，茎尖伸长，基部产生少量愈伤组织。当腋增殖培养使用MS改良培养基+6-BA0.3mg/L+KT0.1mg/L+白砂糖在无菌环境下，将诱导出的新梢，切成带1个~2个腋芽的长2cm左右的茎段，快速放置到增殖培养基上，每瓶培养基均匀放置5个外植体，盖紧瓶盖或捆绑封口膜，标明编号，进行无菌苗的8.3培养培养条件同7.3。25d~30d继代一次，繁殖系数以5~8较为适宜。继代时将0切下，选择1cm以上的增殖芽接种到增殖培养基上培养。pH5.8~6.0。将0.5cm~2.5cm的丛生芽分株切9生根培养9.1生根培养基生根培养使用MS培养基+IBA0.01mg/L+白砂9.2外植体接种据培养瓶大小均匀放置外植体，盖紧瓶盖或捆绑封口膜，标明编9.3培养培养条件同7.3。培养10d~15d时，组培苗开始产缺水干枯。光照强度1500lx~2000lx左右，温度保持20℃~30℃,相对湿度80%~90%。洗净根部琼脂，将生根苗置温室苗床炼苗2周，初期需用遮阳网遮阴，半开瓶锻炼，一周后逐步将瓶根据生根苗高和根生长情况进行移栽前的分级。分级标准参照倍液多菌灵或甲基托布津消毒灭菌。基质采用细沙：营养土=1:1，添加少量木霉菌或芽孢杆菌菌剂，提高移栽苗成活率。移栽完成后浇一遍透水。当小苗长至10cm即可出苗，期间注意温度在20℃~25℃,湿度移栽后每隔5天喷施多菌灵800倍液或70小苗经过温室的苗期培育后可根据不同规格直接装箱进行圃地移栽，对圃地的要求参见GBMS培养基母液配制见表B.1。