鲁京津琼2025版高考生物总复习 微生物的培养与应用 教案

第31讲微生物的培育与应用

课程内容核心素养一一提考能

1.进行微生物的分别和培育分析培育基的成分及作用，比较

2.用大肠杆菌为材料进行平面培育、分别科学思维平板划线法与稀释涂布平板法

菌落的异同

3.测定某种微生物的数量科学探究设计试验获得纯化的酵母菌落

4.分别土壤中分解尿素的细菌关注有害微生物的限制、宣扬健

社会责任

5.探讨培育基对微生物的选择作用康生活

考点一微生物的试验室培育

|考点自主梳理|夯基固本提精华

1.微生物的培育基

(1)概念：人们依据微生物对养分物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的养分基质。

(2)养分组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。止匕外，还须要满意微生物生长对辿、氧

气以及特殊养分物质的要求。

(3)种类

①依据物理性质可分为液体培育基、固体培育基、半固体培育基。

②依据成分的来源可分为自然培育基和合成培育基、半合成培育基。

③依据功能用途可分为选择培育基、鉴别培育基等。

2.无菌技术

(1)含义：在培育微生物的操作中，全部防止杂菌污染的方法。

(2)作用：防止外来杂菌的入侵。

(3)常用方法

条件结果常用方法应用范围

煮沸消毒法日常用品

较为温柔的物理仅杀死物体表面或内

消毒巴氏消毒法不耐高温的液体

或化学方法部的部分微生物

化学药剂用酒精擦拭双手，

消毒法用氯气消毒水源

灼烧灭菌法接种工具

杀死物体内外全部的玻璃器皿、

干热灭菌法

灭菌剧烈的理化因素微生物，包括金属用具

芽抱和抱子高压蒸汽灭菌

培育基及容器

法

3.大肠杆菌的纯化培育

(1)制备牛肉膏蛋白豚固体培育基

计算|一|称量溶化|一|灭菌|一|倒平板

(2)目的：在培育基上形成由单个细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落。

(3)纯化培育方法

主要方法平板划线法稀释涂布平板法

通过接种环在琼脂固体培育基的表将菌液进行一系列的梯度稀释,稀释

纯化原理面连续划线操作，将聚集的菌种逐步度足够高时，聚集在一起的微生物将

稀释分散到培育基表面被分散成单个细胞

主要步骤平板划线操作系列稀释操作和涂布平板操作

接种工具接种环涂布器

平板示

意图

(4)菌种的保存方法

①对于频繁运用的菌种，可以采纳临时保藏的方法。

②对于须要长期保存的菌种，可以采纳甘油管藏的方法。

。素养提升

1.依据功能可分为选择培育基和鉴别培育基。

类型实例

选择培育基中加入青霉素分别得到酵母菌和霉菌

培育基培育基中加入高浓度的食盐用于分别得到金黄色葡萄球菌

以尿素作为唯一氮源的培育基用于分别分解尿素的细菌

不添加氮源的培育基用于分别固氮微生物

石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的

微生物生存，达到分别能消退石油污染的微生物的目的

培育基放在高温环境中培育只能得到耐高温的微生物

鉴别培育

伊红一美蓝培育基可以鉴别大肠杆菌(菌落呈深紫色并带金属光泽)

基

2.平板划线操作中灼烧接种环的目的

灼烧时间灼烧目的

第一次划线前杀死接种环上原有的微生物，防止外来杂菌污染培育基

杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种干

其次次及以后每次划线前

脆来源于上次划线的末端

最终一次划线后杀死接种环上残存的菌种，避开细菌污染环境和感染操作者

3.培育基的配制原则

(1)目的要明确：配制时应依据微生物的种类、培育目的等确定配制的培育基种类。

(2)养分要协调：留意各种养分物质的浓度和比例。

(3)pH要相宜：细菌为6.5〜7.5,放线菌为7.5〜8.5,真菌为5.0~6.0,培育不同微生物所

需的pH不同。

4.微生物对主要养分物质的需求特点

(1)自养型微生物所需的主要养分物质是无机盐，碳源可来自大气中的C0”氮源可由含氮无

机盐供应。

(2)异养型微生物所需的养分物质主要是有机物，即碳源必需由含碳有机物供应，氮源也主要

是由有机物供应，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。

「深挖教材

(1)(人教版选修一Pl6“旁栏思索题”拓展)请你推断以下材料或用具是否须要消毒或灭菌。假

如须要，请选择合适的方法。

①培育细菌用的培育基与培育皿

②玻棒、试管、烧瓶和吸管

③试验操作者的双手

提示①、②须要灭菌；③须要消毒。

（2）（人教版选修一Pl9图示拓展）平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

提示平板冷凝后，皿盖上会凝聚水珠，凝固后的培育基表面的湿度也比较高，将平板倒置,

既可以使培育基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培育基，造成污染。

（3）（人教版选修一PIB“旁栏小资料”）微生物接种方法除了平板划线法和稀释涂布平板法之

外，还有斜面接种、穿刺接种等方法。这些方法的核心都是防止杂菌污染，保证培育物的纯

度。

I应试I对接高考I感悟高考找规律

1.（2024•全国卷II,37）在生产、生活和科研实践中，常常通过消毒和灭菌来避开杂菌的污

染。回答下列问题：

（1）在试验室中，玻璃和金属材质的试验器具（填“可以”或“不行以”）放入干热灭

菌箱中进行干热灭菌。

（2）牛奶的消毒常采纳巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点

是O

（3）密闭空间内的空气可采纳紫外线照耀消毒，其缘由是紫外线能o在照耀前，适量

喷洒,可强化消毒效果。

（4）水厂供应的自来水通常是经过（填“氯气”“乙醇”或“高锌酸钾”）消毒的。

（5）某同学在运用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最

可能的缘由是。

解析（1）在试验室中，能耐高温的、须要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属材质的试验器

具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。（2）巴氏消毒法或高温瞬时消毒法与煮沸消毒法相

比，其优点表现为在达到消毒目的的同时，养分物质损失较少。（3）紫外线照耀能消毒的缘由

是其能够破坏微生物细胞中的DNA分子。在利用紫外线照耀前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶

液等消毒液，可强化消毒效果。（4）自来水通常采纳氯气消毒。（5）采纳高压蒸汽灭菌时，若

压力达到设定要求，而温度未达到相应要求，最可能的缘由是没有排尽高压蒸汽灭菌锅内的

冷空气。

答案（1）可以（2）在达到消毒目的的同时，养分物质损失较少（3）破坏DNA结构消毒液

（4）氯气（5）未将锅内冷空气排尽

2.（2024•11月浙江选考节选）回答与微生物培育及应用有关的问题：

⑴对培育基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从时起先计时。对

于不耐热的液体培育基，一般可将其转入G6玻璃砂漏斗中，采纳方式可较快地进行

过滤灭菌。

(2)与酿造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加的过程。某醋

酸菌培育基由蛋白陈、酵母提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是o

解析(1)由于高压蒸汽灭菌锅的升温升压须要肯定时间，而未达设定温度和压力将导致灭菌

不彻底，因此对培育基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从达到设定的温度或压力值时起先

计时。对于不耐热的液体培育基，如尿素培育基，一般可将其转入Ge玻璃砂漏斗中过滤灭菌,

采纳抽滤方式可加快过滤速度。(2)相比果醋制作中先利用葡萄糖进行酒精发酵，再进行醋酸

发酵，以淀粉为原料制醋，需增加淀粉分解成糖的过程。醋化醋杆菌培育基由蛋白陈、酵母

提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是作为碳源。

答案(1)达到设定的温度或压力值抽滤

(2)将淀粉分解成糖作为碳源

I归纳提炼I

走出微生物培育的4个误区

(1)不是全部微生物培育基中均需加入特殊养分物质。碳源、氮源、水分、无机盐是微生物生

长必需的四大养分

成分，有些微生物可自行合成特殊养分物质，而对那些合成实力有限或不能合成特殊养分物

质的微生物(如乳酸菌)，则需在培育基中添加诸如维生素等物质。

(2)稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目“低”。这是因为当两个或多个细

胞连在一起时，平板上视察到的只是一个菌落。而显微计数法由于不能区分死菌与活菌，故

所得数值可能比实际值“偏高”。

(3)平板划线法只适用于微生物的提纯，不适用于微生物的计数，并且在最终一次划线的末端

处的菌种最纯。

(4)倒平板的温度一般在50℃左右相宜，温度过高会烫手，温度过低培育基又会凝固。平板

冷却凝固后需倒置，这样既可使培育基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培

育基，造成培育基污染。

考点二微生物的筛选和计数

|考点自主椅理|夯基固本提精华

L微生物分别的原理与措施

(1)原理：自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分别获得纯培育物应首先采纳的方法是

将单个的细胞与其他细胞分别，再给细胞供应合适的养分和条件，使其生长成为可见的群体。

⑵常用措施

①接种过程中尽量使细胞分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。

②运用选择培育基的作用特点，在培育基中添加某种特定的物质，抑制不须要的微生物的生

长，促进所需微生物的生长。

2.土壤中分解尿素的细菌的分别与计数

⑴筛选菌株的原理

在选择培育基的配方中，把尿素作为培育基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生

物才能够生长。

(2)统计菌落数目的方法：一般用稀释涂布平板法。

详细操作如下。

①设置重复组，增加试验的劝服力与精确性。将待测样品经一系列10倍稀释，选择三个稀释

度的菌液，分别取0.1mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布于整个平

板表面，放在相宜的温度下培育，计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度的样

液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培育，计算出菌落平均数。

②为了保证结果精确，一般选择菌落数为30〜300个的平板进行计数,若设置的重复组中结

果相差太远，意味着操作有误，需重新试验。

③计算公式：每克样品中的细菌数其中。代表某一稀释度下平板上生长的平均

菌落数，/代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),〃代表稀释倍数。

［提示］

此种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，

平板上视察到的只是一个菌落。

(3)试验流程：

土壤取样一配制土壤溶液和制备培育基一系列稀释一涂布平板与培育一菌落计数

♦素养提升

选择培育基四种常见制备方法或实例

后即依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养

器基中加入某些物质，以“抑制”不需要的微生

物，“促进”所需要的微生物生长

落加入某些

培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细

特定物质

L菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生

举例长，从而可将该菌分离出来

在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放

线菌的生长,从而分离得到酵母菌和霉菌

培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微

一生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无

改变培养基法生存

营养成分培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无

法生存，而自养微生物可利用空气中的CO,

制造有机物而生存

A「当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石

小利用培养基的J油的微生物的生长，使能够利用石油的微

囱“特定化学成分生物生存，从而分离出能消除石油污染的

y分离I微生物

i通过某些在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐

N“特技茶瘾”「浓度高时易失水而不能生存;

制分离工生物—在高温环境中可分离得到耐高温的微生物,

J-其他微生物在高温环境中因酶失活而无法

生存

I应试对接高考I感悟高考找规律

1.（2015•江苏卷，19）做“微生物的分别与培育”试验时，下列叙述正确的是（）

A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培育基溅到皿盖上

C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D.用记号笔标记培育皿中菌落时，应标记在皿底上

解析本题考查微生物的分别与培育的相关学问。高压灭菌加热结束时，需先切断电源，让

灭菌锅内温度降至100°C以下，压力表的指针回到零时，再打开锅盖，A错误；倒平板时，

不应将培育皿盖完全打开，以防污染，B错误；接种环经火焰灭菌后需待冷却后挑取菌落，C

错误。

答案D

2.（2024•全国卷I,37）［生物——选修1：生物技术实践］

将马铃薯去皮切块，加水煮沸肯定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入肯

定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培育基。

回答下列问题：

（DM培育基若用于真菌的筛选，则培育基中应加入链霉素以抑制的生长，加入了链

霉素的培育基属于培育基。

（2）M培育基中的马铃薯浸出液为微生物生长供应了多种养分物质，养分物质类型除氮源外还

有（答出两点即可）。氮源进入细胞后，可参加合成的生物大分子有（答出两

点即可）。

（3）若在M培育基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培育，平板上长出菌落后可通过加入显

色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是,该方法能筛选出产淀粉酶微生

物的原理是_______________________________________

（4）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下

得到以下结果：

甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149,取平均值133；乙同学涂布

了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176,取平均值124。有人认为这两位同学的结

果中，乙同学的结果可信度低，其缘由是

解析（1）在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻挡其他种类微生物生

长的培育基，称做选择培育基。若M培育基是用于真菌的筛选，则应加入链霉素以抑制细菌

的生长，其属于选择培育基。（2）马铃薯浸出液中含有淀粉、蛋白质、脂质、无机盐、水等多

种物质，因此，除氮源外其中还有微生物生长所须要的碳源、无机盐

等养分要素。进入细胞的氮源可参加合成蛋白质、核酸（DNA、RNA）等含氮的生物大分子。（3）

加入显色剂碘液后，淀粉遇碘变蓝，而淀粉的水解产物则不发生这种反应。若在M培育基中

用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培育，土壤中能产生淀粉酶的微生物可将淀粉分解，菌落

四周就会出现透亮圈，这样，我们就可以通过是否产生透亮圈来筛选能产淀粉酶的微生物了。

⑷乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了

错误，结果的重复性太差，不能简洁地将3个平板的计数值用来求平均值。

答案（1）细菌选择

（2）碳源、无机盐蛋白质、核酸

（3）碘液淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落四周淀粉被水解，形成透亮圈

（4）乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差

3.（2024•华大新高考联盟联考）如图是对细菌种类进行鉴别的一种装置。试验时先向小试管

中注满PH=6.8的液体培育基，再把小试管倒置放入含相同液体培育基的大试管中。培育基

中含澳甲酚紫，该指示剂在pH6.8以上呈紫色，pH5.2以下呈黄色。甲、乙、丙三种细菌可

利用的糖类和分解糖类的产物见下表。

］一倒置的小试管

丁〉液体培养基

细菌种类可利用的糖类产生有机酸产生气体

甲葡萄糖、乳糖++

乙葡萄糖+—

丙葡萄糖++

注：+代表能产生；一代表不能产生。

分析回答下列问题：

⑴用接种环挑取菌种，接种到培育基中。接种环在运用(填“前”、“后”或“前

和后”)应用法灭菌。

(2)现有两种培育基，培育基A以乳糖为唯一碳源，培育基B以葡萄糖为唯一碳源，若要鉴别

出甲、乙、丙三种细菌，应选用培育基_______o若出现

现象，则为细菌甲。

⑶为确定试验过程中是否存在杂菌污染，本试验还应设置一组比照，比照组的操作应为

答案(1)前和后灼烧

(2)A和B培育基A(或A和B)变为黄色，小试管中有气泡

(3)将未接种的培育基在相同条件下放置相宜的时间，视察培育基是否变浑浊

澄清易错易混•强化科学思维

［易错易混］

易错点1混淆两种“比照组”与“重复组”

点拨(1)两种比照组作用比较

①推断培育基中“是否有杂菌污染”，需将未接种的培育基同时进行培育。

②推断选择培育基“是否具有筛选作用”，需设置牛肉膏蛋白陈培育基进行接种后培育，视察

两种培育基上菌落数目，进行对比得出结论。

(2)重复组的设置及作用

为解除偶然因素对试验结果的干扰，在每一稀释度下宜设置3个平板作重复组，选择菌落数

均在30〜300且数目相差不大的三个平板，用“平均值”代入计数公式予以计算菌落数。

易错点2不清晰为什么测定活菌的数量不能用平板划线法？

点拨由于在所划的线中，一般只有最终一次划线的末端才会形成只由一个细菌形成的菌落,

而其他一些菌落往往由两个细菌或多个细菌繁殖而成，而在计数时一个菌落对应着一个细菌,

这样在划线所得的平板中，菌落数目远低于活菌的实际数值，所以不能用平板划线法测定活

菌数量。

［深度纠错］

某探讨小组对生活用水中大肠杆菌含量进行检测，并探讨在高盐度（NaCl）工业废水中提取可

降解有机物的耐盐菌，请分析回答有关问题：

⑴大肠杆菌进行检测的操作和配方图如下：

待测样液

\将滤膜转移至

伊红美蓝培养基上基础培养基100mL

一'>20%乳糖溶液2mL

滤膜f2%伊红溶液2mL

0.5%美蓝水溶液1mL

滤液

甲乙

若要将图乙中大肠杆菌检测配方修改后用于培育可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌，

则应去除的成分有——，同时须要添加的成分是o

（2）将高盐度工业废水采纳平板划线法接种在含3%NaCl的固体培育基上（如图一）。然后置于

相宜条件下培育一段时间，视察形成的菌落特征；再将分别纯化后的菌株制成菌液，取等量

菌液，分别加入到不同NaCl浓度的液体培育基中摇床培育35小时，定时取样统计活菌数目，

测定结果（如图二）。

□3%NaCl口5%NaCl口7%NaCl

30

20

1()

051()1520253()35

时间/h

图一图二

图一所示操作，第一次划线前灼烧接种环的目的是,其次次及之后的几次划线

前灼烧接种环的目的是。

图二所示活菌数目在进行统计时，干脆从静置的培育液中取样计数的做法是错误的，正确的

操作是将培育液后取样计数，且每种浓度需设3个重复试验求其平均值。

⑶由图二可知，该耐盐菌最适合处理含（填浓度）NaCl的工业废水，缘由是

解析（1）图乙中伊红、美蓝是用来鉴别大肠杆菌的，因此若用于培育可降解高盐度工业废水

中有机物的耐盐菌，需去除其中的伊红、美蓝，此外由于工业废水中的有机物能够作为碳源,

还应去除乳糖这一碳源；作为选择培育基，同时需加入高浓度的氯化钠溶液。（2）第一次接种

前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染。接种后接种环上有残留的菌种，因此其次次及之后的

几次划线前灼烧接种环的目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种。取样计数时，需将培

育液振荡摇匀，使菌种分布匀称，再吸取培育液。（3）分析图二可知，处理后每隔5小时取样

检测时，3种NaCl浓度下，均是NaCl浓度为3%时该耐盐菌的相对数量最多，这说明该耐盐

菌适合处理NaCl浓度为3%的工业废水。

答案（1）伊红、美蓝、乳糖（高浓度）氯化钠（2）防止杂菌污染杀死上次划线后接种环

上残留的菌种（使下一次划线时，接种环上的菌种干脆来源于上次划线的末端）振荡摇匀

（3）3%据图可知，在3种NaCl浓度下，NaCl浓度为3%时该菌的相对数量最多

随堂•真题&预料

1.（2024•江苏卷，改编）漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用

途。下图是分别、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述错误的是（）

A.生活污水中含有大量微生物，是分别产漆酶菌株的首选样品

B.筛选培育基中须要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落

C.在涂布平板上长出的菌落，在通过划线进一步纯化

D.斜面培育基中含有大量养分物，可在低温下长期保存菌株

解析漆酶降解“木质”，则漆酶菌株多存在于“木质”丰富的场所，虽然生活污水中含有

大量微生物，但不肯定含有产漆酶的菌株，A错误；筛选产漆酶微生物的培育基中应加入木质

素等漆酶降解的底物，可依据不同菌种形成的菌落的不同特点，选择出产漆酶的菌落，B正确;

在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化，C正确；斜面培育基中含有大量养分物，

可在低温下长期保存菌株，D正确。

答案A

2.（2024•全国卷III,37）［生物——选修1：生物技术实践］

回答下列与酵母菌有关的问题：

⑴分别培育酵母菌通常运用（填“牛肉膏蛋白豚”“MS”或“麦芽汁琼脂”）培育基,

该培育基应采纳灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培育一段时间后可视

察到菌落，菌落的含义是____________________________

（2）酵母菌液体培育时，若通入氧气，可促进（填"菌体快速增殖”“乙醇产生”或

“乳酸产生”）；若进行厌氧培育，可促进（填"菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳

酸产生”）o

（3）制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加肯定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的

缘由是o

解析（1）酵母菌为异养型生物，通常运用麦芽汁琼脂培育基培育；培育基常用高压蒸汽灭菌

法灭菌；由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称为菌落。

（2）酵母菌为兼性厌氧型生物，有氧条件利于其繁殖，无氧条件下其进行酒精发酵。（3）酵母

菌分解葡萄糖可产生二氧化碳，使面包松软多孔。

答案（1）麦芽汁琼脂高压蒸汽由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体（2）菌体

快速增殖乙醇产生

（3）酵母菌分解葡萄糖会产生CO”CO?使面包松软

3.（2024•高考预料）石油煌是石油管道泄漏的主要污染物。为了筛选出分解石油燃实力较强

的微生物，进行了如下系列操作。请回答问题：

（1）分解石油燃的微生物一般从土壤中分别，获得土壤样品的取样地点最好选在_______。

（2）图1表示获得土壤样品后的探讨过程。

土壤样品将单菌落接种进行培养

板上生长.

①②③④⑤⑥⑦⑧

图1

为了能有效地分别出分解石油煌的微生物，①〜③号瓶所用的液体培育基的成分共有的特点

是，从而有利于分解石油煌的微生物的生长。

（3）可采纳图2中平板乙所示的（方法）检测图1的③号瓶中分解石油燃的微生物数

量。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培育一段时间，这样做的目的是

然后，将图1③号瓶中的1mL菌液稀释100倍，在3个平板上用该方法分别接入0.1mL稀释

液；经适当培育后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每毫升该菌液中的

活菌数为个。

图2

（4）I.若试验室采纳图3中的操作分别纯化优良菌种，首次接种最合理的排序是—

图3

II.下列有关操作正确的是（填字母）。

A.划线分别时，须要把接种环深化到培育基中进行接种

B.划线时要将最终一区域的划线与第一区域的划线相连

C.超净工作台在运用前，可用紫外线灯杀菌

答案（1）被石油污染处

（2）以石油烧为唯一碳源

（3）稀释涂布平板法检测培育基灭菌是否合格3.8X101

⑷I.②①④①③②II.C

课后•分层训练

（时间：35分钟）

定生命观念练基础

L（2024•青岛模拟）某学者欲探讨被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石

油的细菌。下列操作错误的是（）

A.利用平板划线法对细菌进行计数

B.以石油为唯一碳源的培育基筛选

C.采纳稀释涂布平板法分别菌种

D.称取和稀释土壤时应在火焰旁

解析平板划线法能对细菌分别纯化，但不能对细菌进行计数，稀释涂布平板法可以分别菌

种还可进行计数，A错误。

答案A

2.下面是微生物平板划线示意图。划线的依次为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是（）

A.在五个区域中划线前后都要对接种环和培育基进行灭菌

B.划线操作时完全打开皿盖，划完马上盖上

C.接种时不能划破培育基，否则难以达到分别单菌落的目的

D.第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数

解析在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，但不能对培育基进行灭菌；进行划线操作时,

左手将培育皿的皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环快速伸入平板内，划三至五条

平行线，盖上皿盖；留意接种时不能划破培育基，否则难以达到分别单菌落的目的；第1区

和第5区的划线不能相连。

答案C

3.（2024•吉林模拟）下面关于土壤中分解尿素的细菌的分别与计数的叙述中，正确的是

（）

A.只有能合成）R酶的微生物才能分解尿素

B.筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培育基中唯一的养分物质

C.统计样品中的活菌数目一般用平板划线法

D.在以尿素为唯一氮源的培育基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到了分解尿

素的细菌

解析只有能合成版酶的微生物才能分解尿素，A正确；筛选分解尿素的细菌的试验中，采纳

的是以尿素为唯一氮源的培育基，B错误；统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法，C

错误；在以尿素为唯一氮源的培育基中加入酚红指示剂，培育某种细菌后，假如pH上升，指

示剂将变红，这样就能初步鉴定该种细菌能够分解尿素，D错误。

答案A

4.（2024•海口调研）通过选择培育基可以从混杂的微生物群体中分别出所需的微生物。在缺

乏氮源的培育基上大部分微生物无法生长；在培育基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的

生长；在培育基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述方法能从混杂的微生物

群体中分别分别出（）

①大肠杆菌②霉菌③放线菌④固氮细菌

A.④②③B.①②③C.①③④D.只有③④

解析缺乏氮源的培育基上大部分微生物无法生长，而固氮细菌能生长；在培育基中加青霉

素可以抑制细菌和放线菌等原核生物细胞壁的合成，而霉菌属于真核生物，故能生长；在培

育基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长，对放线菌的生长无影响。

答案A

5.下表为某培育基的配方，下列叙述正确的是（）

成分蛋白陈葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸储水

含量10g10g2g0.4g0.065g1000mL

A.从物理性质看该培育基属于液体培育基，从用途看该培育基属于选择培育基

B.该培育基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白陈

C.该培育基缺少供应生长因子的物质

D.该培育基调整合适的pH后就可以接种运用

解析分析表中成分可知，该培育基中没有凝固剂，为液体培育基，该培育基的养分成分齐

全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培育基，A错误；该培育基中的蛋白陈既是唯一

的氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源，B正确；该培育基中存在的无

机盐和蛋白陈中的某些物质可以看作是生长因子，C错误；培育基调整完pH还要进行灭菌等

操作后才能运用，D错误。

答案B

6.某探讨小组从有机废水中分别微生物用于废水处理。下列叙述正确的是（）

A.培育基分装到培育皿后进行灭菌

B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线

C.接种后的培育皿须放在光照培育箱中培育

D.培育过程中每隔一周视察一次

解析培育基灭菌后再分装到培育皿中，A错误；转换划线角度后要灼烧接种环，冷却后再从

上次划线的末端起先进行划线，B正确；接种后的培育皿必需放在恒温箱中进行培育，C错误;

培育过程中一般每隔12h或24h视察一次，D错误。

答案B

7.（2024•江苏卷，31）酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有

些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培育，这样既可削减污染又可降低生产成本。探讨

人员拟从土壤样品中分别该类酵母，并进行大量培育。如图所示为操作流程，请回答下列问

题：

①称量土样②梯度稀释③平板浇注分离④划线纯化⑤扩大培养

⑴配制培育基时，依据培育基配方精确称量各组分，将其溶解、定容后，调整培育基的

，刚好对培育基进行分装，并进行灭菌。

⑵取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培育皿中，在步骤③中将温度约

（在25°C、50°C或80°C中选择）的培育基倒入培育皿混匀，冷凝后倒置培育。

（3）挑取分别平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有o

a.为保证无菌操作，接种针、接种环运用前都必需灭菌

b.划线时应避开划破培育基表面，以免不能形成正常菌落

c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量

d.可以通过逐步提高培育基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株

⑷步骤⑤中，为使酵母数量快速增加，培育过程中需保证足够的养分和供应。为监

测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25X16型血

细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上_______色细胞的个数应不少于，才

能达到每毫升3X10,个活细胞的预期密度。

解析（1）配制培育基时，依据培育基配方精确称取各组分，之后溶解定容，再调整培育基的

pH,一般状况下，采纳高压蒸汽灭菌法对培育基进行灭菌。（2）对培育基进行高压蒸汽灭菌后,

需将温度降至50℃左右后倒入培育皿混匀，冷凝后倒置培育。（3）在对酵母菌进行划线纯化

时，为保证无菌操作，接种针、接种环运用前都必需灭菌；且在划线时应避开划破培育基表

面，以免不能形成正常菌落；本试验是为了获得能以工业废甲醇作为碳源的酵母，故在试验

过程中可以通过逐步提高培育基中甲醇的浓度，获得甲醇耐受株。（4）酵母菌是兼性厌氧型真

菌，有氧条件下大量繁殖。酵母菌扩大培育时，需保证足够的养分和氧气供应。“用等体积

台盼蓝染液染色”，即计数室中培育液体积实际只有一半，即0.1+2=0.05mm',设5个中

方格中无色（活细胞不被台盼蓝染色）的细胞数目为x个，则3X109=X/5X104X1（）3X2,解得

x=30。

答案（l）pH高压蒸汽（湿热）（2）50℃

（3）a、b、d（4）氧气无30

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8.下列关于微生物分别和培育的叙述，错误的是（）

A.应依据微生物代谢类型选择合适培育基并限制好培育基pH

B.试验操作时应避开已灭菌处理的材料用具与四周物品接触

C.待培育基冷却至室温后，在酒精灯火焰旁边倒平板

D.运用过的培育基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃

解析不同的微生物所需的养分条件和pH不尽相同，A正确；四周物品是没有经过灭菌处理

的，已灭菌的材料用具与它们接触易染上杂菌，B正确；待培育基冷却至50。。左右时，在酒

精灯火焰旁边倒平板，C错误；运用过的培育基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃，以防污染

环境，D正确。

答案C

9.微生物接种方法许多，平板划线法是最常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的依次

为①②③④。下列操作方法错误的是（）

A.划线操作时，将沾有菌种的接种环插入培育基

B.平板划线后培育微生物时要倒置培育

C.不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连

D.在②〜④区域中划线前后都要对接种环进行灭菌

解析平板划线法在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上

灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在每个区域中，只要有单个活细菌，通过培育即可

获得所需菌落；平板划线后培育微生物时要倒置培育；接种是让细菌在培育基表面生长，所

以不能将接种环插入培育基中，A错误。

答案A

10.下图表示培育和纯化X细菌的部分操作步骤，下列有关叙述正确的是（）

①②③④

A.步骤①操作时，倒好平板后应马上将其倒置，防止水蒸气落在培育基上造成污染

B.步骤②接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管中蘸取菌液

C.步骤③沿多个方向划线，使接种物渐渐稀释，培育后可依据出现的单个菌落计数

D.步骤④是将培育皿放在恒温培育箱中培育，一段时间后所得到的都是X细菌的菌落

解析步骤①操作时，倒好平板后应待其冷却凝固后，马上将其倒置，防止水蒸气落在培育

基上造成污染，A错误；步骤②接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管

中蘸取菌液，B正确；步骤③沿多个方向划线，使接种物渐渐稀释，培育后可出现的单个菌落,

但不能用于计数，C错误；步骤④是将培育皿放在恒温培育箱中培育，一段时间后所得到的不

肯定都是X细菌的菌落，D错误。

答案B

1L下列有关微生物分别、纯化及计数的叙述，错误的是（）

A.常用富含纤维素的培育基富集培育纤维素分解菌

B.平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散并计数

C.稀释涂布平板法通过系列梯度稀释可将微生物分散

D.用血细胞计数板计数微生物时，试验结果往往偏大

解析平板划线法可以用于分别微生物，但不能用于计数，稀释涂布平板法可以计数。用血

细胞计数板计数微生物时，死菌、活菌都统计在内，试验结果往往偏大。

答案B

12.关于试验室培育和纯化大肠杆菌过程中的部分操作，下列说法正确的是（）

A.配培育基、倒平板、接种须要在酒精灯火焰旁进行

B.倒平板时，倒入的培育基冷却后盖上培育皿的皿盖

C.划线接种时，灼烧接种环后马上进行再次划线

D.划线接种结束后，需将平板倒置后放入培育箱中培育

解析倒平板、接种须要在酒精灯火焰旁进行，而配培育基不须要在酒精灯的火焰旁进行，A

错误；倒入培育基后马上盖上培育皿，冷却后将平板倒过来放置，B错误；划线接种时，灼烧

接种环后要等待其冷却后才能进行再次划线，C错误；划线接种结束后，需将平板倒置后放入

培育箱中培育，D正确。

答案D

13.下列有关“微生物的分别与培育”试验的叙述正确的是（）

A.高压蒸汽灭菌锅加盖时应按顺时针方向依次旋紧螺栓

B.选择培育基可以鉴定某种微生物的种类

C.待培育基冷却至室温时倒平板

D.统计样品中活菌数量时，接种方法可采纳稀释涂布平板法

解析高压蒸汽灭菌锅加盖时，将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内，再以两两对

称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一样，勿使漏气，A错误；鉴别培育基可以鉴

定某种微生物的种类，B错误；待培育基冷却至50℃左右时倒平板，C错误；统计样品中活菌

数量时，接种方法可采纳稀释涂布平板法，D正确。

答案D

14.（2024•河南信阳开学考）为了解鲜奶中细菌数量，某爱好小组尝试对某品牌鲜奶中细菌含

量进行测定。他们用无菌吸管从锥形瓶中吸取1mL鲜奶稀释液至盛有

9mL无菌水的试管中，混合匀称，如此再重复两次，操作如下图所示。请回答有关问题：

（1）鲜奶常采纳消毒，这种消毒方法使鲜奶的养分成分不被破坏。

（2）为了对鲜奶中细菌进行计数，常采纳法。运用该方法时，可取最终的鲜奶稀释液

0.1mL滴在培育基上，选择下列工具中的（填序号）进行试验操作。若其中一个平板

经培育后的菌落分布如图甲所示，出现图甲结果可能的操作失误是。

（3）若用上述方法培育设置3个培育皿，菌落数分别为35个、33个、34个，则可以推想鲜奶

中每毫升含细菌数为个。运用这种方法统计的结果往往较实际值________（填“偏

高”或“偏低”），缘由是。

⑷消毒后的鲜奶中绝大部分细菌被杀死，若接着用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，

则在操作步骤上应做什么改动？o

解析（1）巴氏消毒法是指70〜75℃煮30分钟或80©煮15分钟，运用这种方法对生鲜牛

奶进行消毒的好处是牛奶的养分成分不被破坏。（2）常用稀释涂布平板法对鲜奶中的细菌进行

计数；据图分析，图B为稀释涂布平板法中运用的涂布器；图甲细菌分布不匀称可能是涂布

不匀称导致的。（3）依据题意分析，鲜奶中每毫升含细菌数为（35+34+33）+3+0.1X1O4=

3.4X10'个。由于经此方法接种培育时当两个或多个菌落重叠在一起时按一个菌落计算，所以

运用这种方法统计的结果往往较实际值偏低。（4）消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若接

着用稀释涂布平板法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤上应削减稀释次数。

答案（1）巴氏消毒法（2）稀释涂布平板B涂布不匀称（3）3.4X106偏低个别菌落

可能是由两个或多个细菌形成的（4）稀释次数削减

15.细菌经人工诱变后，部分细菌调整机制中的某种酶被破坏，其细胞代谢中某些化学反应不

能进行，就形成了养分缺陷型菌株，在工业生产上有广袤的应用前景。以下是试验人员利用

影印法初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程。请回答下列问题。

灭菌的丝绒布

（2）n揭起丝绒布

O，-1®-©­三卜本培养;4黑：菌落B

经诱变待测丝绒布竺上菌落A

处理的培养皿吸附菌体2dW

菌液完全培养基

（1）微生物生长须要的养分物质有水、碳源、和,制备上图的培育基还须要

加入»

（2）制备培育基的步骤包括、灭菌、倒平板，调整pH应当在灭菌________（填

“前”或“后”），培育基的灭菌方法一般为。

（3）依据用途分类，图中基本培育基属于（填“选择”或“鉴别”）培育基。过程①的

接种方法为。

（4）采纳影印法培育的优点是不同培育基中同种菌株的接种位置相同。为了完成对初检的养分

缺陷型菌株的鉴定，试验人员应挑取（填“菌落A”或“菌落B”）接种培育，并进一

步鉴定。

解析（1）微生物生长须要的养分物质包括水、无机盐、碳源、氮源等，图示培育基上最终都

长出了菌落，说明为固体培育基，因此制备培育基时须要加入凝固剂，常见的凝固剂是琼脂。

⑵制备培育基的基本步骤包括计算、称量、溶化、调整pH、灭菌、倒平板，该过程中留意应

当先调整pH再灭菌，以防止杂菌污染；培育基灭菌的常用方法是高压蒸汽灭菌法。（3）图示

过程最终筛选出了氨基酸缺陷型菌株，说明图中基本培育基属于选择培育基；过程①使菌落

匀称分布，因此该接种方法为稀释涂布平板法。（4）比较基本培育基和完全培育基中的菌落可

知，菌落A为氨基酸缺陷型菌株，因此须要用接种针挑取菌落A接种培育，并进行进一步的

鉴定。

答案（1）氮源无机盐凝固剂（或琼脂）（2）计算、称量、溶化前高压蒸汽灭菌法（3）

选择稀释涂布平板法（4）菌落A

亮剑高考23微生物的分别与培育

（时间：15分钟）

1.下列检测某熟制食品中大肠杆菌是否超标的试验操作，不合理的是（）

A.待检测食品须要经过灭菌操作后取样检测

B.应设置未接种的培育基，作为试验的比照

C.用稀释涂布平板法接种计数大肠杆菌的活菌数

D.接种后将培育皿倒置并在相宜温度下培育

解析待检测食品不能经过灭菌操作后取样检测，否则检测不到大肠杆菌，或者统计值偏小。

答案A

2.在三个培育皿中各加入等量但不同种的大肠杆菌培育基，在培育皿中培育36h后统计细菌

菌落数（见下表）。下列叙述错误的是（）

培育皿培育基成分培育皿中的菌落数

I琼脂、糖类35

II琼脂、糖类和维生素250

III