《2.2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体》讲义案

学而优·教有方PAGE试卷第=1页，共=sectionpages33页PAGE12.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体目标导航目标导航课程标准目标解读动物细胞工程包括细胞培养、核移植、细胞融合和干细胞的应用等技术。阐明动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础。阐明动物细胞核移植一般是将体细胞核移入一个去核的卵母细胞中，并使重组细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的过程。阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段，使两个或多个动物细胞结合成一个细胞的过程。概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。阐明动物细胞培养的条件和过程。简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。阐明利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体的过程，认同单克隆抗体在临床上有重要的应用价值。阐明利用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和该技术的应用前景。课前预习课前预习一、动物细胞融合技术1．概念：使细胞结合形成一个细胞的技术。2．诱导原理和结果(1)诱导原理：。(2)诱导结果：形成细胞。3．诱导方法：法、电融合法和法等。4．意义：突破了的局限，使成为可能。5．动物细胞融合技术的应用(1)成为研究、、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。(2)用于制备。教材中的隐性知识源于选择性必修3P48“相关信息”：(1)灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去，但并不破坏病原体的。(2)灭活病毒诱导细胞融合与病毒和细胞所含的糖蛋白有关。二、单克隆抗体1．制备原理(1)B淋巴细胞特点：一种B淋巴细胞分泌一种抗体。(2)骨髓瘤细胞特点：能在体外大量。(3)杂交瘤细胞特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能又能产生大量。2．制备过程（如图）3．单克隆抗体的优点能准确地识别，与特定抗原发生特异性结合，并且可以。4．单克隆抗体的应用(1)作为，具有准确、高效、简易、快速的优点。(2)用于和。易错易混辨析：(1)植物原生质体融合与动物细胞融合的原理是相同的()(2)杂交瘤细胞进行体内培养，更容易控制培养条件()(3)制备单克隆抗体时，要选用已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞()(4)灭活的病毒能促进动物细胞融合，但不能促进植物细胞融合()(5)相比植物体细胞杂交，动物细胞融合特有的诱导方式是用灭活的病毒处理()(6)杂交瘤细胞进行体内培养，是为了获得能产生单克隆抗体的胚胎()(7)杂交瘤细胞的特点是既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体()一、动物细胞融合技术1．两个或多个2.（1）细胞膜的流动性（2）杂交3.PEG融合灭活病毒诱导4.有性杂交远缘杂交5.（1）细胞遗传细胞免疫（2）单克隆抗体教材中的隐性知识感染能力抗原结构糖蛋白二、单克隆抗体1．（1）特异性(2)增殖（3）大量增殖特定抗体2.杂交瘤细胞能产生所需抗体3．抗原的细微差异大量制备4.（1）诊断试剂（2）治疗疾病运载药物易错易混辨析：√√√√√×√知识讲解知识讲解知识点一动物细胞融合技术1．动物细胞融合技术：是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。细胞融合的实质是核融合。2．原理：动物细胞融合的基本原理为细胞膜的流动性。3．诱导融合的方法(1)化学方法：PEG融合法。(2)物理方法：电融合法。(3)生物方法：灭活病毒诱导法。4．过程：具有不同遗传信息的两个或多个细胞杂交。5．结果：形成单核杂交细胞，具有原来两个或多个细胞的遗传信息，可表现出两个或多个亲本的特点。6．意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。这一技术成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。如利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。知识点二单克隆抗体及其应用1．传统抗体的获得(1)方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。(2)缺陷：制备的抗体产量低、纯度低以及特异性差。2．单克隆抗体的制备：单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞增殖产生的高度专一的抗体。(1)制备原理①B淋巴细胞的特点：每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外不能无限增殖。②骨髓瘤细胞的特点：在体外能大量增殖，但不能产生抗体。③杂交瘤细胞的特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体。(2)制备过程①制备产生特定抗体的B淋巴细胞：用特定的抗原对小鼠进行免疫处理，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。②培养骨髓瘤细胞。③将小鼠的骨髓瘤细胞与从脾中得到的B淋巴细胞融合。④用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有杂交瘤细胞才能生长。⑤克隆化培养和抗体检测：对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。⑥将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖。⑦提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。(3)比较制备单克隆抗体过程中的两次筛选项目第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞从小鼠体内提取的B淋巴细胞有很多种，形成的杂交瘤细胞也有很多种筛选方法用特定的选择培养基筛选未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长用多孔培养板培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群筛选目的得到杂交瘤细胞得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞(4)优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备。(5)单克隆抗体的应用①作为诊断试剂：它在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥着重要的作用：具有准确、高效、简易、快速的优点②用于治疗疾病和运载药物：单独使用时可直接用于癌症和其他疾病的治疗；抗体——药物偶联物(ADC)通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。课后拓展课后拓展拓展动物细胞融合和单克隆抗体的制备动物细胞融合动物细胞融合也称细胞杂交，是指在一定的条件下将两个或多个动物细胞融合为一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。诱导动物细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电刺激）。某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白，可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。动物细胞融合技术最重要的用途是制备单克隆抗体。单克隆抗体的制备单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。在制备单抗过程中，要进行杂交瘤细胞的筛选。在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌特异性单克隆抗体的细胞。因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，再及时进行冻存。单克隆抗体的大量制备主要采用体外培养法和动物体内诱生法。克隆化的细胞在体外进行大量培养，离心去除细胞及其碎片，收集上清液，而获得大量的单一的克隆化抗体。不过体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不能超过特定的细胞浓度，且每天要换培养液。而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传特性。如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤的小鼠（无胸腺的裸鼠），杂交瘤细胞就开始无限地繁殖，直至宿主死亡。约1-2周，可见产生肿瘤细胞的小鼠腹部膨大，用注射器抽取腹水，即可获得大量的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。背诵笔记背诵笔记笔记一：动物细胞融合技术1.概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。2.原理：细胞膜的流动性。3.诱导融合方法：PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法。4.动物细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融合。其中细胞膜融合是细胞融合的先导，在细胞膜融合中体现出细胞膜具有一定的流动性，细胞融合的实质是核融合。动物细胞融合完成的标志是两个或多个细胞核融合为一个细胞核。如下图(以灭活的病毒诱导为例)：5.意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。6.应用：(1)成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。(2)用于制备单克隆抗体。7.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞的增殖融合前处理先除去细胞壁先使细胞分散开使用的酶纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶诱导手段物理法：电融合法、离心法化学法：PEG融合法除物理法和化学法外，也可用灭活的病毒诱导过程结果杂种植株杂交细胞应用培育植物新品种主要用于制备单克隆抗体意义克服了远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合笔记二：单克隆抗体及其应用1.传统抗体的获得：（1）方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。（2）缺陷：产量低、纯度低、特异性差。2.单克隆抗体的制备原理：(1)B淋巴细胞特点：一种B淋巴细胞分泌一种特异性抗体。(2)骨髓瘤细胞特点：能在体外大量增殖。(3)杂交瘤细胞特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能无限增殖又能产生大量特定抗体。3.单克隆抗体的制备过程：4.单克隆抗体制备过程中的两次筛选的比较：项目第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞从小鼠体内提取的B淋巴细胞有很多种，形成的杂交瘤细胞也有很多种筛选方法用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群筛选目的得到杂交瘤细胞得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞5.单克隆抗体的优点：（1）能准确地识别抗原的细微差异；（2）与特定抗原发生特异性结合；（3）可以大量制备。6.单克隆抗体的应用：(1)作为诊断试剂，如定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病；（2）运载药物，如ADC；（3）治疗疾病。课后自测课后自测1．甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体可有效治疗甲流。下列关于其制备过程的叙述，正确的是（

）A．用动物细胞培养液培养甲型流感病毒，以获得充足的抗原B．制备过程需要用到动物细胞培养技术和动物细胞融合技术C．用特定的选择培养基筛选的杂交瘤细胞可生产所需单克隆抗体D．体外培养杂交瘤细胞需定期使用胰蛋白酶处理，使其分散开来2．下列关于动物细胞融合技术及意义的叙述，不正确的是（

）A．可以利用动物细胞融合技术生产细胞因子B．动物细胞融合可打破生殖隔离获得新物种C．细胞融合过程与细胞膜的结构特点直接相关D．动物细胞融合为制备单克隆抗体开辟了新途径3．动物克隆的技术基础是（）A．细胞和组织培养B．细胞融合C．单克隆抗体D．核移植4．使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀死肿瘤细胞，但细胞毒素没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害。构建抗体—药物偶联物（ADC）能对肿瘤细胞进行选择性杀伤，ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成，它的作用机制如图所示。下列叙述错误的是（

）A．构建抗体—药物偶联物的抗体是特异性强、灵敏性高的单克隆抗体B．制备该抗体需要利用动物细胞融合和动物细胞培养等技术手段C．ADC通过胞吞进入细胞，该过程不需要细胞膜上载体蛋白的协助，也不消耗能量D．药物在癌细胞内释放并起作用，同时诱导溶酶体破裂，加速了癌细胞的凋亡5．抗PD-L1单克隆抗体能与癌细胞表面的PD-L1特异性结合，因而具有治疗某些癌症的作用。如图是制备抗PD-L1单克隆抗体的示意图，图中有两次筛选。下列相关叙述错误的是（

）

A．图中第一次筛选所用培养基为选择培养基B．图中第二次筛选的目的是获得产生特异性抗体的杂交瘤细胞C．图中细胞集落b～d，既能大量繁殖，又能产生抗PD-L1抗体D．图中加入的H物质，应该是取自癌细胞表面的PD-L1抗原6．如图是抗HCG（人绒毛膜促性腺激素）单克隆抗体制备流程图，下列叙述错误的是（

）

A．①过程中常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒和电激等B．②过程中筛选出的杂交瘤细胞不一定能产生抗HCG抗体C．③过程中利用了DNA分子杂交的原理D．④过程培养液中所需气体主要有O2和CO2，其中CO2的主要作用是维持培养液的pH7．科研工作者常常将单克隆抗体与细胞毒素类药物偶联起来，制成的“生物导弹”，来定向治疗癌症并降低药物的副作用，其过程如图所示。下列有关叙述不正确的是（

）

A．经①形成的细胞都能无限增殖并产生相应抗体B．②过程需要筛选并克隆单个杂交瘤细胞C．未与单克隆抗体偶联的细胞毒素等药物没有选择杀伤癌细胞的功能D．抗癌细胞的单克隆抗体的靶向作用使③过程具有高度特异性8．阿霉素是一种抗肿瘤药物，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对机体其他细胞造成伤害，将阿霉素与能特异性识别肿瘤抗原的抗体利用接头连接制成抗体——药物偶联物（ADC）。下列有关叙述错误的是（

）A．阿霉素有副作用，正常情况下不能大量、长期使用B．ADC中的特异性抗体是杀死肿瘤细胞的有效成分C．接头既要保持稳定，又不能影响抗体与阿霉素的功能D．利用同位素标记的特异性抗体，可用于定位诊断肿瘤9．下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过程注射的物质和A细胞的名称分别为（

）A．抗体、T淋巴细胞 B．抗原、T淋巴细胞C．抗体、B淋巴细胞 D．抗原、B淋巴细胞10．下列有关细胞工程的叙述正确的是（）A．在植物细胞工程中通常用Ca2＋处理植物细胞，以增大细胞壁的通透性B．用以治疗癌症的“生物导弹”就是以单克隆抗体作抗癌药物定向杀死癌细胞C．诱导两种植物细胞的原生质体融合，所获得的融合细胞都具有双亲的遗传特性D．单克隆抗体虽特异性强，但也不能与位于靶细胞内的相应抗原发生特异性结合11．细胞膜的结构特点是具有一定的流动性，下列实例不能反映该特点的是（）A．人的B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞的融合B．吞噬细胞吞噬病菌C．核糖体合成的蛋白质进入细胞核D．变形虫伸出伪足12．某同学在学习“细胞工程”时，列表比较了动植物细胞工程的有关内容，你认为有几处是不正确的（）

植物细胞工程动物细胞工程技术手段植物组织培养和植物体细胞杂交动物细胞培养和单克隆抗体的制备特殊处理机械法去除细胞壁胰蛋白酶处理，制成细胞悬液融合方法物理方法、化学方法物理方法、化学方法、生物方法典型应用人工种子、杂种植株单克隆抗体的制备培养液区别生长素和细胞分裂素影响脱分化和再分化动物血清（血浆）不可缺少A．1 B．2 C．3 D．413．制备单克隆抗体时需要经过两次筛选，第一次筛选需要用HAT培养基，已知哺乳动物细胞可通过D途径和S途径合成DNA，而小鼠的骨髓瘤细胞只能通过D途径合成DNA．其中进行D途径合成时叶酸及其衍生物是必不可少的，而氨基蝶呤是叶酸的拮抗剂。第二次筛选需要用96孔培养板进行克隆化培养和抗体检测。下列相关叙述正确的是（）A．HAT培养基中要加入叶酸从而把杂交瘤细胞筛选出来B．在HAT培养基中杂交瘤细胞可通过D途径和S途径合成DNA因此可以大量增殖C．用96孔培养板克隆化培养时要用培养液对第一次筛选所得的杂交瘤细胞进行充分稀释以保证分配到每个孔中的细胞数不超过1个D．克隆化培养后需要向每个孔中加入相应抗体从而进行抗体检测，呈阳性反应的孔中的细胞即为能产生所需抗体的杂交瘤细胞14．除杂交瘤单克隆技术之外，制备单克隆抗体的常用方法还包括单个B细胞抗体技术，可通过下图所示的技术流程制备抗体用于治疗人类疾病。下列说法错误的是（

）

A．上述技术可一定程度避免机体对传统鼠源单克隆抗体的免疫反应B．选用单个B淋巴细胞是为了最终获得纯度较高的抗体C．应在95%空气加5%二氧化碳的培养箱中对受体细胞进行培养D．将基因表达载体导入受体细胞前需要用钙离子处理受体细胞15．精准爆破肿瘤细胞的“生物导弹”——ADC（抗体偶联药物）能对肿瘤细胞进行选择性杀伤，该物质由抗体（导弹体）、药物（核弹头）和接头三部分组成，ADC的作用机制如图。下列相关叙述错误的是（

）

A．ADC的制备过程运用了细胞培养和细胞融合技术B．制备ADC中的抗体需要经过两次筛选C．ADC能精准地识别肿瘤细胞，进入癌细胞需要消耗ATPD．癌细胞的凋亡是由于溶酶体中水解酶的水解作用16．动物细胞融合技术就是。17．用作诊断试剂的原理：。18．动物细胞融合技术就是使或动物细胞结合形成细胞的技术。融合后形成的具有原来或细胞的。19．动物细胞融合技术的应用（1）细胞融合技术成为研究、、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。（2）利用动物细胞融合技术发展起来的，为制备开辟了新途径。20．单克隆抗体制备过程中，第二次筛选的目的是，方法是。

2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体目标导航目标导航课程标准目标解读动物细胞工程包括细胞培养、核移植、细胞融合和干细胞的应用等技术。阐明动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础。阐明动物细胞核移植一般是将体细胞核移入一个去核的卵母细胞中，并使重组细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的过程。阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段，使两个或多个动物细胞结合成一个细胞的过程。概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。阐明动物细胞培养的条件和过程。简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。阐明利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体的过程，认同单克隆抗体在临床上有重要的应用价值。阐明利用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和该技术的应用前景。课前预习课前预习一、动物细胞融合技术1．概念：使细胞结合形成一个细胞的技术。2．诱导原理和结果(1)诱导原理：。(2)诱导结果：形成细胞。3．诱导方法：法、电融合法和法等。4．意义：突破了的局限，使成为可能。5．动物细胞融合技术的应用(1)成为研究、、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。(2)用于制备。教材中的隐性知识源于选择性必修3P48“相关信息”：(1)灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去，但并不破坏病原体的。(2)灭活病毒诱导细胞融合与病毒和细胞所含的糖蛋白有关。二、单克隆抗体1．制备原理(1)B淋巴细胞特点：一种B淋巴细胞分泌一种抗体。(2)骨髓瘤细胞特点：能在体外大量。(3)杂交瘤细胞特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能又能产生大量。2．制备过程（如图）3．单克隆抗体的优点能准确地识别，与特定抗原发生特异性结合，并且可以。4．单克隆抗体的应用(1)作为，具有准确、高效、简易、快速的优点。(2)用于和。易错易混辨析：(1)植物原生质体融合与动物细胞融合的原理是相同的()(2)杂交瘤细胞进行体内培养，更容易控制培养条件()(3)制备单克隆抗体时，要选用已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞()(4)灭活的病毒能促进动物细胞融合，但不能促进植物细胞融合()(5)相比植物体细胞杂交，动物细胞融合特有的诱导方式是用灭活的病毒处理()(6)杂交瘤细胞进行体内培养，是为了获得能产生单克隆抗体的胚胎()(7)杂交瘤细胞的特点是既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体()一、动物细胞融合技术1．两个或多个2.（1）细胞膜的流动性（2）杂交3.PEG融合灭活病毒诱导4.有性杂交远缘杂交5.（1）细胞遗传细胞免疫（2）单克隆抗体教材中的隐性知识感染能力抗原结构糖蛋白二、单克隆抗体1．（1）特异性(2)增殖（3）大量增殖特定抗体2.杂交瘤细胞能产生所需抗体3．抗原的细微差异大量制备4.（1）诊断试剂（2）治疗疾病运载药物易错易混辨析：√√√√√×√知识讲解知识讲解知识点一动物细胞融合技术1．动物细胞融合技术：是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。细胞融合的实质是核融合。2．原理：动物细胞融合的基本原理为细胞膜的流动性。3．诱导融合的方法(1)化学方法：PEG融合法。(2)物理方法：电融合法。(3)生物方法：灭活病毒诱导法。4．过程：具有不同遗传信息的两个或多个细胞杂交。5．结果：形成单核杂交细胞，具有原来两个或多个细胞的遗传信息，可表现出两个或多个亲本的特点。6．意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。这一技术成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。如利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。知识点二单克隆抗体及其应用1．传统抗体的获得(1)方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。(2)缺陷：制备的抗体产量低、纯度低以及特异性差。2．单克隆抗体的制备：单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞增殖产生的高度专一的抗体。(1)制备原理①B淋巴细胞的特点：每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外不能无限增殖。②骨髓瘤细胞的特点：在体外能大量增殖，但不能产生抗体。③杂交瘤细胞的特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体。(2)制备过程①制备产生特定抗体的B淋巴细胞：用特定的抗原对小鼠进行免疫处理，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。②培养骨髓瘤细胞。③将小鼠的骨髓瘤细胞与从脾中得到的B淋巴细胞融合。④用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有杂交瘤细胞才能生长。⑤克隆化培养和抗体检测：对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。⑥将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖。⑦提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。(3)比较制备单克隆抗体过程中的两次筛选项目第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞从小鼠体内提取的B淋巴细胞有很多种，形成的杂交瘤细胞也有很多种筛选方法用特定的选择培养基筛选未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长用多孔培养板培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群筛选目的得到杂交瘤细胞得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞(4)优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备。(5)单克隆抗体的应用①作为诊断试剂：它在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥着重要的作用：具有准确、高效、简易、快速的优点②用于治疗疾病和运载药物：单独使用时可直接用于癌症和其他疾病的治疗；抗体——药物偶联物(ADC)通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。课后拓展课后拓展拓展动物细胞融合和单克隆抗体的制备动物细胞融合动物细胞融合也称细胞杂交，是指在一定的条件下将两个或多个动物细胞融合为一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。诱导动物细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电刺激）。某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白，可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。动物细胞融合技术最重要的用途是制备单克隆抗体。单克隆抗体的制备单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。在制备单抗过程中，要进行杂交瘤细胞的筛选。在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌特异性单克隆抗体的细胞。因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，再及时进行冻存。单克隆抗体的大量制备主要采用体外培养法和动物体内诱生法。克隆化的细胞在体外进行大量培养，离心去除细胞及其碎片，收集上清液，而获得大量的单一的克隆化抗体。不过体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不能超过特定的细胞浓度，且每天要换培养液。背诵笔记而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传特性。如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤的小鼠（无胸腺的裸鼠），杂交瘤细胞就开始无限地繁殖，直至宿主死亡。约1-2周，可见产生肿瘤细胞的小鼠腹部膨大，用注射器抽取腹水，即可获得大量的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。背诵笔记笔记一：动物细胞融合技术1.概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。2.原理：细胞膜的流动性。3.诱导融合方法：PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法。4.动物细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融合。其中细胞膜融合是细胞融合的先导，在细胞膜融合中体现出细胞膜具有一定的流动性，细胞融合的实质是核融合。动物细胞融合完成的标志是两个或多个细胞核融合为一个细胞核。如下图(以灭活的病毒诱导为例)：5.意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。6.应用：(1)成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。(2)用于制备单克隆抗体。7.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞的增殖融合前处理先除去细胞壁先使细胞分散开使用的酶纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶诱导手段物理法：电融合法、离心法化学法：PEG融合法除物理法和化学法外，也可用灭活的病毒诱导过程结果杂种植株杂交细胞应用培育植物新品种主要用于制备单克隆抗体意义克服了远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合笔记二：单克隆抗体及其应用1.传统抗体的获得：（1）方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。（2）缺陷：产量低、纯度低、特异性差。2.单克隆抗体的制备原理：(1)B淋巴细胞特点：一种B淋巴细胞分泌一种特异性抗体。(2)骨髓瘤细胞特点：能在体外大量增殖。(3)杂交瘤细胞特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能无限增殖又能产生大量特定抗体。3.单克隆抗体的制备过程：4.单克隆抗体制备过程中的两次筛选的比较：项目第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞从小鼠体内提取的B淋巴细胞有很多种，形成的杂交瘤细胞也有很多种筛选方法用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群筛选目的得到杂交瘤细胞得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞5.单克隆抗体的优点：（1）能准确地识别抗原的细微差异；（2）与特定抗原发生特异性结合；（3）可以大量制备。6.单克隆抗体的应用：(1)作为诊断试剂，如定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病；（2）运载药物，如ADC；（3）治疗疾病。课后自测课后自测1．甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体可有效治疗甲流。下列关于其制备过程的叙述，正确的是（

）A．用动物细胞培养液培养甲型流感病毒，以获得充足的抗原B．制备过程需要用到动物细胞培养技术和动物细胞融合技术C．用特定的选择培养基筛选的杂交瘤细胞可生产所需单克隆抗体D．体外培养杂交瘤细胞需定期使用胰蛋白酶处理，使其分散开来【答案】B【分析】单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞；利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，用特定的选择培养基进行筛选，得到杂交瘤细胞；再进行克隆化培养和抗体检测，多次筛选后得到足够数量的能分泌所需抗体的细胞；最后将所需的杂交瘤细胞在体外或小鼠腹腔内培养，从细胞培养液或小鼠腹水中提取单克隆抗体。【详解】A、甲型H1N1流感病毒无细胞结构，必须寄生在活细胞内才能生存，在动物细胞培养液中无法培养，A错误；B、单克隆抗体的制备过程包括动物细胞培养和动物融合技术，B正确；C、用特定的选择培养基筛选得到杂交瘤细胞后，还要进行克隆化培养才能生产所需的单克隆抗体，C错误；D、杂交瘤细胞是一种癌细胞，无接触抑制现象，不需要用胰蛋白酶处理，D错误。故选B。2．下列关于动物细胞融合技术及意义的叙述，不正确的是（

）A．可以利用动物细胞融合技术生产细胞因子B．动物细胞融合可打破生殖隔离获得新物种C．细胞融合过程与细胞膜的结构特点直接相关D．动物细胞融合为制备单克隆抗体开辟了新途径【答案】B【分析】动物细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性。动物细胞融合的方法：物理法（离心、振动、电刺激等）、化学法（聚乙二醇（PEG））以及生物法（灭活病毒等）。【详解】A、细胞因子由T细胞产生，可以利用T细胞与骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞生产细胞因子，A正确；B、动物细胞融合可以突破有性杂交的局限，实现远缘杂交，但无法获得新物种，B错误；C、细胞膜的结构特点是细胞膜具有流动性，动物细胞融合过程与细胞膜的流动性直接相关，C正确；D、动物细胞融合技术为制备单克隆抗体提供了新思路，开辟了新途径，D正确。故选B。3．动物克隆的技术基础是（）A．细胞和组织培养B．细胞融合C．单克隆抗体D．核移植【答案】A【分析】1、动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。2、细胞融合是两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称细胞杂交。3、单克隆抗体制备过程：用抗原刺激小鼠使之产生特异性免疫反应，从小鼠体内提取B淋巴细胞，B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，再筛选合适的杂交瘤细胞,进行相应的克隆,对单克隆抗体进行大量的制备。4、动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。5、动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。【详解】A、细胞和组织培养是动物克隆的技术基础，A正确；B、动物细胞融合是动物细胞工程常用的技术手段，但不是动物克隆的技术基础，B错误；C、单克隆抗体是动物细胞工程常用的技术手段，但不是动物克隆的技术基础，C错误；D、核移植是动物细胞工程常用的技术手段，但不是动物克隆的技术基础，D错误。故选A。4．使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀死肿瘤细胞，但细胞毒素没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害。构建抗体—药物偶联物（ADC）能对肿瘤细胞进行选择性杀伤，ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成，它的作用机制如图所示。下列叙述错误的是（

）A．构建抗体—药物偶联物的抗体是特异性强、灵敏性高的单克隆抗体B．制备该抗体需要利用动物细胞融合和动物细胞培养等技术手段C．ADC通过胞吞进入细胞，该过程不需要细胞膜上载体蛋白的协助，也不消耗能量D．药物在癌细胞内释放并起作用，同时诱导溶酶体破裂，加速了癌细胞的凋亡【答案】C【分析】1、单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的浆细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能产生抗体，又能无限增殖。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原的特异性抗体即单克隆抗体。2、题图分析：ADC可以被癌细胞识别并被吞噬进入细胞，进入细胞后ADC被水解释放药物，药物起作用，同时诱导溶酶体破裂，加速癌细胞死亡。【详解】A、构建抗体—药物偶联物的抗体目的是让药物只对肿瘤细胞起作用，因此使用的抗体要是特异性强、灵敏性高的单克隆抗体，A正确；B、制备该抗体需要把骨髓瘤细胞与能合成抗体的细胞融合，再对融合后的细胞进行扩大培养，所以制备该抗体要利用动物细胞融合和动物细胞培养等技术手段，B正确；C、ADC通过胞吞进入细胞，需要消耗细胞的能量，C错误；D、据图所示，药物在癌细胞内释放并起作用，同时诱导溶酶体破裂，加速了癌细胞的凋亡，D正确。故选C。5．抗PD-L1单克隆抗体能与癌细胞表面的PD-L1特异性结合，因而具有治疗某些癌症的作用。如图是制备抗PD-L1单克隆抗体的示意图，图中有两次筛选。下列相关叙述错误的是（

）

A．图中第一次筛选所用培养基为选择培养基B．图中第二次筛选的目的是获得产生特异性抗体的杂交瘤细胞C．图中细胞集落b～d，既能大量繁殖，又能产生抗PD-L1抗体D．图中加入的H物质，应该是取自癌细胞表面的PD-L1抗原【答案】C【分析】题图分析：用PEG将B淋巴细胞和癌细胞融合，放在多孔玻璃板上进行培养，在选择培养基中筛选，筛选出的abcd细胞集落为杂交瘤细胞，再加入PD-L1抗原，只有a细胞集落呈现阳性。【详解】A、图中第一次筛选所用培养基为选择培养基，其目的是筛选出杂交瘤细胞，A正确；B、图中第二次筛选的目的是获得产生特异性抗体的杂交瘤细胞，进而通过培养获得单克隆抗体，B正确；C、图中a-d是经过筛选的杂交瘤细胞，所以既能大量繁殖，又能产生抗体，但只有a能产生抗PD-L1单克隆抗体，C错误；D、题目中的目的是制备抗PD-L1单克隆抗体的过程，为了筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，因而图中加入的H物质，应该是取自癌细胞表面的PD-L1抗原，D正确。故选C。6．如图是抗HCG（人绒毛膜促性腺激素）单克隆抗体制备流程图，下列叙述错误的是（

）

A．①过程中常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒和电激等B．②过程中筛选出的杂交瘤细胞不一定能产生抗HCG抗体C．③过程中利用了DNA分子杂交的原理D．④过程培养液中所需气体主要有O2和CO2，其中CO2的主要作用是维持培养液的pH【答案】C【分析】单克隆抗体制备的基本步骤：对小鼠进行免疫→提取B淋巴细胞→将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合→通过筛选、克隆化培养和扩大化培养→最终注入小鼠体内→从腹腔腹水中提取单克隆抗体。【详解】A、动物细胞的融合原理是细胞膜具有一定的流动性，诱导细胞融合的方法有三种：生物方法-病毒、化学方法-聚乙二醇(PEG)、物理方法-离心、震动、电刺激，据图可知，①过程表示B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒和电激等，A正确；B、②过程中筛选出的杂交瘤细胞不一定都能产生抗HCG抗体，还需要进行抗体专一性检测，B正确；C、③过程表示筛选出能够产生特异性抗体的细胞群，利用的时抗原-抗体杂交原理，C错误；D、④过程表示体外大规模培养，培养液中所需气体主要有O2和CO2，其中CO2的主要作用是维持培养液的pH，O2是细胞代谢必需的，D正确。故选C。7．科研工作者常常将单克隆抗体与细胞毒素类药物偶联起来，制成的“生物导弹”，来定向治疗癌症并降低药物的副作用，其过程如图所示。下列有关叙述不正确的是（

）

A．经①形成的细胞都能无限增殖并产生相应抗体B．②过程需要筛选并克隆单个杂交瘤细胞C．未与单克隆抗体偶联的细胞毒素等药物没有选择杀伤癌细胞的功能D．抗癌细胞的单克隆抗体的靶向作用使③过程具有高度特异性【答案】A【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。【详解】A、经①诱导融合过程形成的细胞不都能无限增殖并产生相应抗体的细胞，还需要经过两次筛选才能获得无限增殖并产生相应抗体的杂交瘤细胞，A错误；B、②过程需要筛选出既能无限增殖又能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞并克隆单个杂交瘤细胞，获得单克隆抗体，B正确；C、用以治疗癌症的“生物导弹”就是以单克隆抗体的定位导向作用将药物定向带到癌细胞，在原位杀死癌细胞，其中，构成“弹头”的化学药物、细胞毒素等物质没有选择杀伤癌细胞的功能，而单克隆抗体能将这种杀伤功能定位，C正确；D、过程③中由于单克隆抗体具有高度特异性，使其靶向作用非常准确，D正确。故选A。8．阿霉素是一种抗肿瘤药物，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对机体其他细胞造成伤害，将阿霉素与能特异性识别肿瘤抗原的抗体利用接头连接制成抗体——药物偶联物（ADC）。下列有关叙述错误的是（

）A．阿霉素有副作用，正常情况下不能大量、长期使用B．ADC中的特异性抗体是杀死肿瘤细胞的有效成分C．接头既要保持稳定，又不能影响抗体与阿霉素的功能D．利用同位素标记的特异性抗体，可用于定位诊断肿瘤【答案】B【分析】分析题干信息可知：阿霉素是一种抗肿瘤抗生素，没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对机体其它细胞造成伤害，即具有较大的副作用。为了解决这一问题，可将阿霉素与能特异性识别肿瘤抗原的抗体结合制成抗体–药物偶联物（ADC）。【详解】A、阿霉素在杀伤肿瘤细胞的同时还会对机体其它细胞造成伤害，说明阿霉素有副作用，正常情况下不能大量、长期使用，A正确；B、特异性抗体能和肿瘤抗原结合形成复合物，但是不能杀死肿瘤细胞，B错误；C、接头既要保持稳定，避免阿霉素从抗体中脱落，同时也不能影响抗体与阿霉素的功能，C正确；D、抗体和抗原的结合具有特异性，故利用同位素标记的特异性抗体在特定组织中的成像技术，可定位诊断肿瘤，D正确。故选B。9．下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过程注射的物质和A细胞的名称分别为（

）A．抗体、T淋巴细胞 B．抗原、T淋巴细胞C．抗体、B淋巴细胞 D．抗原、B淋巴细胞【答案】D【分析】题图分析，A细胞表示B淋巴细胞，B细胞表示骨髓瘤细胞，C细胞表示杂交瘤细胞，D表示产生的单克隆抗体。1表示给小鼠注射抗原，2表示提取B细胞，3表示动物细胞融合，4表示筛选出能产生抗体的杂交瘤细胞，56表示提取单克隆抗体。【详解】由于制备单克隆抗体的细胞来源是B淋巴细胞（已经免疫的）和骨髓瘤细胞；由分析可知，1表示给小鼠注射抗原，使得小鼠产生免疫反应，形成能产生抗体的B淋巴细胞，故A细胞为B淋巴细胞，即D正确。故选D。10．下列有关细胞工程的叙述正确的是（）A．在植物细胞工程中通常用Ca2＋处理植物细胞，以增大细胞壁的通透性B．用以治疗癌症的“生物导弹”就是以单克隆抗体作抗癌药物定向杀死癌细胞C．诱导两种植物细胞的原生质体融合，所获得的融合细胞都具有双亲的遗传特性D．单克隆抗体虽特异性强，但也不能与位于靶细胞内的相应抗原发生特异性结合【答案】D【分析】1、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。2、生物导弹：单克隆抗体+放射性同位素、化学药物或细胞毒素（借助单克隆抗体的定位导向作用将药物定向带到癌细胞，在原位杀死癌细胞。疗效高，副作用小，位置准确。）【详解】A、在基因工程中通常用CaCl2处理微生物细胞，以增大细胞壁通透性，A错误；B、用以治疗癌症的“生物导弹”=单克隆抗体+放射性同位素、化学药物或细胞毒素，其借助单克隆抗体的定位导向作用将药物定向带到癌细胞，在原位杀死癌细胞，C错误；C、诱导两种植物细胞的原生质体融合，所获得的两两融合细胞有AA型、BB型、AB型，不都具有双亲的遗传特性，C错误；D、某一种浆细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后培养，获得特异性强的单克隆抗体，但当相应抗原位于靶细胞内时，该抗体不能与之发生特异性结合，D正确。故选D。11．细胞膜的结构特点是具有一定的流动性，下列实例不能反映该特点的是（）A．人的B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞的融合B．吞噬细胞吞噬病菌C．核糖体合成的蛋白质进入细胞核D．变形虫伸出伪足【答案】C【分析】细胞膜的结构特点：具有流动性（膜的结构成分不是静止的，而是动态的）；细胞膜具有一定的流动性，常出现的流动性的实例：草履虫取食过程中食物泡的形成、变形虫捕食和运动时伪足的形成、白细胞吞噬细菌、动物细胞分裂时细胞膜的缢裂过程、细胞杂交时的细胞融合等。【详解】A、人的B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞的融合，体现了细胞膜的流动性，A不符合题意；B、吞噬细胞通过胞吞作用吞噬病菌，体现了细胞膜的流动性，B不符合题意；C、核糖体中合成的蛋白质通过核孔进入细胞核，没有通过膜结构，所以不能反映细胞膜具有一定的流动性，C符合题意；D、变形虫伸出伪足，通过变形运动来摄食和运动，体现细胞膜的结构特点具有一定的流动性，D不符合题意。故选C。12．某同学在学习“细胞工程”时，列表比较了动植物细胞工程的有关内容，你认为有几处是不正确的（）

植物细胞工程动物细胞工程技术手段植物组织培养和植物体细胞杂交动物细胞培养和单克隆抗体的制备特殊处理机械法去除细胞壁胰蛋白酶处理，制成细胞悬液融合方法物理方法、化学方法物理方法、化学方法、生物方法典型应用人工种子、杂种植株单克隆抗体的制备培养液区别生长素和细胞分裂素影响脱分化和再分化动物血清（血浆）不可缺少A．1 B．2 C．3 D．4【答案】B【分析】植物细胞工程的技术手段主要有植物组织培养和植物体细胞杂交，其中植物组织培养是植物细胞工程的基础；动物细胞工程的技术手段主要有动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体的制备、胚胎移植和核移植，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。动、植物细胞工程的原理和技术手段有相似之点，但也存在不同之处，需要考生在平时的学习过程中注意列表比较。【详解】①技术手段：植物细胞工程的技术手段有植物组织培养和植物体细胞杂交；动物细胞工程技术有动物细胞培养、动物细胞融合、动物细胞核移植等技术，单克隆抗体的制备是动物细胞融合的应用，①错误；②特殊处理：植物体细胞杂交时，需要用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除细胞壁，动物细胞培养时需要用胰蛋白酶处理制备细胞悬浮液，②错误；③融合方法：诱导植物细胞融合的方法有物理（离心、振动和电激等）和化学方法（聚乙二醇）；诱导动物细胞融合的方法有物理、化学和生物方法（灭活的病毒），③正确；④应用：植物细胞工程技术可应用于制备人工种子、培育杂种植株；动物细胞工程中的动物细胞融合技术可以用于制备单克隆抗体，④正确；⑤培养液：植物细胞工程中的培养基中需要用生长素和细胞分裂素以影响愈伤组织的生长和分化；动物细胞工程的培养液中需要加入动物血清、血浆等天然成分，⑤正确。故选B。13．制备单克隆抗体时需要经过两次筛选，第一次筛选需要用HAT培养基，已知哺乳动物细胞可通过D途径和S途径合成DNA，而小鼠的骨髓瘤细胞只能通过D途径合成DNA．其中进行D途径合成时叶酸及其衍生物是必不可少的，而氨基蝶呤是叶酸的拮抗剂。第二次筛选需要用96孔培养板进行克隆化培养和抗体检测。下列相关叙述正确的是（）A．HAT培养基中要加入叶酸从而把杂交瘤细胞筛选出来B．在HAT培养基中杂交瘤细胞可通过D途径和S途径合成DNA因此可以大量增殖C．用96孔培养板克隆化培养时要用培养液对第一次筛选所得的杂交瘤细胞进行充分稀释以保证分配到每个孔中的细胞数不超过1个D．克隆化培养后需要向每个孔中加入相应抗体从而进行抗体检测，呈阳性反应的孔中的细胞即为能产生所需抗体的杂交瘤细胞【答案】C【分析】1、单克隆抗体的制备：（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。（2）获得杂交瘤细胞：①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。（3）克隆化培养和抗体检测。（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。2、单克隆抗体的作用：①作为诊断试剂：（最广泛的用途）具有准确、高效、简易、快速的优点。②用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症，可制成“生物导弹”。由于单克隆抗体的特异性强，能特异性识别抗原，因此可以把抗癌细胞的单克隆抗体跟放射性同位素、药物等相结合，制成“生物导弹”，借助单克隆抗体的定位导向作用将药物定向带到癌细胞，在原位杀死癌细胞，疗效高，副作用小，位置准确。【详解】AB、进行D途径合成时叶酸及其衍生物是必不可少的，而氨基蝶呤是叶酸的拮抗剂，所以在HAT培养基中需要添加氨基蝶呤以阻断D途径。在HAT培养基上瘤-瘤杂交细细胞由于不能合成DNA而无法增殖，B-B杂交细胞虽然可通过S途径合成DNA但本身无法增殖，只有杂交瘤细胞能通过S途径合成DNA且具有骨髓瘤细胞的增殖特性而能大量增殖，AB错误：C、第二次筛选前先要用培养液对第一次筛选所得的杂交瘤细胞进行充分稀释以保证分配到每个孔中的细胞数不超过1个，C正确：D、克隆化培养后应向每个孔中加入相应抗原从而进行抗体检测，D错误。故选C。14．除杂交瘤单克隆技术之外，制备单克隆抗体的常用方法还包括单个B细胞抗体技术，可通过下图所示的技术流程制备抗体用于治疗人类疾病。下列说法错误的是（

）

A．上述技术可一定程度避免机体对传统鼠源单克隆抗体的免疫反应B．选用单个B淋巴细胞是为了最终获得纯度较高的抗体C．应在95%空气加5%二氧化碳的培养箱中对受体细胞进行培养D．将基因表达载体导入受体细胞前需要用钙离子处理受体细胞【答案】D【分析】1、基因工程技术的基本步骤：(1)目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。(2)基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。(3)将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化