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B23DB12Detectionofgeneticallymodifiedplantsandderivedproducts—QuanlitativePCRmethodforherbicide-resistantso天津市市场和质量监督管理委员会发布I本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院生物技术研究所、天转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2及其衍生品种定量检测实时荧光PCR方法本标准适用于转基因耐除草剂大豆GTS40-3下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版GB/T6682分析实验室用水规格和NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求Lectin基因LectingeneGTS40-3-2转化体特异性序列event-specificsequ进行实时荧光PCR扩增。根据标准样品模板拷贝lec-1269P：5,-AGCTTCGCCGCTTCCGTS40-3-2F：5'-CCTTTAGGATTTCAGCATCAGTGGGTS40-3-2R：5'-GACTTGTCGCCGGGAATG准物质基因组DNA，用0.1×TE或水稀释5.3.6.1标准样品和试样实时荧光P3然后取出PCR管，放入PCR仪中。运行实时荧光PCR反应。反应程序为：95℃变—2.0µL2.0µL—25.0µL表2Lectin内标基因PCR反应体系—0.5µL0.5µL0.5µL2.0µL—25.0µL应设置阴性对照和空白对照。以非转基因大豆材料提取的DNA作为GTS40-3-2转化体特异情况进行调整。设定阈值处，要求不同浓度梯度标准品的扩增曲线平行，而且同一样品的不同平45.3.7.3绘制标准曲线x+b(1yb—标准曲线的截距。以进行结果计算。否则重新进行实时荧光PCR扩增。y-bn—模板拷贝数a—标准曲线的斜率；b—标准曲线的截距。nLectin—大豆内标准基因Lectin拷贝数。的Ct值<36，表明样品中检出耐除草剂大豆GTS40-3-2转化体。表述为“样品中检测出GTS40-3-2转曲线，表明样品中未检出耐除草剂大豆GTS40-3-2转化体。表述为“样品中未检测出GTS40-3-2转化判断；如重复实验GTS40-3-2转化体出现典GTS40-3-2转化体，表述为“样品中检测出GTS40-3-2转化体”。验。如重复实验结果符合6.1-6.4的情况，依照6.1-6.4进行判断；如重复实验Lectin内标基因和A.1Lectin基因实时荧光PCR扩增产物核苷酸序列（AccCTTCTATGCCCCTGACACAAAAAGGCTTGCA1GCCCTCTACTCCACCCCCATCCACATTTGGGACAAAGAAACCGGTAGCGCTTCTATGCCCCTGACACAAAAAGGCTTGCATCTGGCCTTTCCGGAACCGTCCGCATTCCCGGC

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