56℃加热灭活病毒与常温放置对试管法血型鉴定结果的影响

血型鉴定是保证输血安全的关键[1]。但血液标本会携带病毒,出于对安全防护的考虑,血液标本的检验应在具有生物安全柜和二级安全防护的条件下进行,而大多数医院并未配备相关设施,实验人员在对血液样本进行检验时会有职业暴露的风险[2-3]。因此,对于血液、体液等血液标本,采用56℃加热30min的方式灭活病毒,可减少实验人员在检测中的感染风险[4],而此灭活方式对血型鉴定的影响鲜有报道。故本研究将通过对血液标本进行56℃加热灭活,观察这一灭活方式对试管法血型鉴定的影响。1资料与方法1.1标本来源选择2023年2月本血站的血液标本共40例,其中A、B、O、AB型各10例,均为3d内抽取且全血标本≥3mL,采用EDTA·2K抗凝。每例患者血液标本均分为2份,分为观察组(n=40)和对照组(n=40)。1.2试剂和仪器56℃恒温水浴箱[上海一恒科学仪器有限公司,型号:CU-420型];离心机[湖南湘仪实验室仪器开发有限公司,型号:TDZ4-WS];正反定型血型卡[英科新创(厦门)科技股份有限公司,批号:20163400540];凝聚胺试剂(包括低离子、凝聚胺、悬浮液,珠海贝索生物技术有限公司,批号:BA1003A、BA1003B、BA1003C);抗A、抗B[上海血液生物医药有限责任公司,批号:20220608];标本释放剂(武汉明德生物科技股份有限公司,批号:20200438);标准的A、B悬浮红细胞[长春博德生物技术有限责任公司,批号:20221219];显微镜[江西凤凰光学科技有限公司Phenix]。1.3方法观察组放入56℃水浴箱30min进行灭活处理,对照组置于常温环境中做对比实验。将观察组灭活后的标本取出,放入离心机以1500g离心3min后取上层血清备用,同时予以生理盐水将红细胞配成3%悬浮红细胞备用。取6mL的玻璃试管5个,分为正定型和反定型,分别标记正定型抗-A、抗-B、抗-D,反定型Ac、Bc。向正定型的3个试管中加入相应单克隆抗体100μL,再加入待检标本3%悬浮红细胞50μL;向反定型的2个试管中加入待检标本血浆100μL,再依次加入标准的A、B型3%悬浮红细胞50μL。均用离心机以120g离心1min后观察结果,出现凝集则为阳性,当不能确定是否凝集时,可借助显微镜观察,正反定型均不符即为可凝血型。两组的血液通过试管法血型鉴定后,记录两组的血液标本的凝集强度并计算积分,标准见表1。并选择来自相同血液标本的观察组2例A型血、2例B型血,对照组2例A型血、2例B型血,分别标记为观A1、观A2、观B1、观B2和对A1、对A2、对B1、对B2,进行IgM型抗-A、抗-B和抗-M效价检测。表1血型鉴定评价凝集强度积分1.4观察指标(1)观察56℃加热灭活后对红细胞血型鉴定的影响;(2)两组凝集强度积分对比;(3)两组来自相同血液标本的IgM型效价检测变化。2结果2.1两组红细胞血型鉴定比较两组血型检测结果一致,Kappa值为1.000,见表2。表2两组红细胞血型鉴定比较2.2两组凝集强度积分对比观察组凝集强度积分均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),见表3。表3两组凝集强度积分对比分)2.3两组来自相同血液标本的IgM型效价检测结果观察组4例标本和对照组4例标本抗-A、抗-B、抗-M效价检测结果相同,Kappa值为1.000,见表4。表4两组来自相同血液标本的IgM型效价检测结果3讨论检验科的工作人员在对血液标本进行检验的过程中,或直接或间接接触到血液标本,根据卫健委要求血清标本的检测应在生物安全二级实验室内进行,尽可能在生物安全柜中检测,同时检验人员应采用生物安全三级实验室的个人防护[5-6]。但由于条件限制,大多数医院检验科的生物安全防护能力还比较低,血液标本会因离心、检测等环节造成气溶胶污染,检验人员职业暴露产生感染的风险巨大[7]。为有效避免操作过程中的职业暴露,考虑是否可通过对血液标本经56℃灭活病毒,以减少检验人员职业暴露的风险。试管法血型鉴定因其操作简单、准确度可靠等优势,被广泛运用于血型的初次鉴定,是交叉配血试验中最基础的试验方法之一,并且待测的红细胞经过稀释,减少了血液中非特异性抗体的浓度,可提高试验的敏感性[8-9]。因此本研究将观察经56℃加热灭活病毒后与常温放置的血液标本,通过试管法检测是否会对血型鉴定结果产生影响。本研究数据显示,观察组经过56℃加热灭活30min后与常温放置的对照组相比,血型仍能通过试管法准确检出;观察组凝集强度积分均明显低于对照组。这说明经过56℃灭活处理后,试管法血型鉴定的凝集强度虽然会减弱,但不影响后续对血型的检测,并且还可有效灭活病毒,减少检验人员因职业暴露而感染的风险。这可能与红细胞特殊性质有关,加热会对红细胞造成弱凝集的现象,但在加热通过立即离心可从一定程度上避免激活补体[10-11]。目前国家对于各厂商血型正反定型卡中抗-A、抗-B有严格规定,需保证A、B抗原表达量在20万～100万之间时,反应强度仍可达到“++++”。本研究观察组经过56℃灭活后的A、B抗原与所用的反应卡仍可达“++++”的反应强度,表明观察组经56℃30min加热灭活后,A、B抗原凝集强度减弱不会干扰血型鉴定。本研究结果还显示,观察组4例标本和对照组4例标本抗-A、抗-B、抗-M效价检测结果相同。灭活时也不会降低血清中IgM型抗-A、抗-B的效价,保证输血前的检测不会遗漏重要抗体,还可提高输血的安全性。这也说明了通过试管法测定血型,对加热处理过后的观察组反定型结果无误。分析原因56℃灭活处理不会降低血型抗原的特性,并且在灭活过程中本研究是通过全血直接灭活,血浆可能会对红细胞起到一定的保护作用,因此56℃热灭活处理对血型鉴定的影响小[12]。这与李爱敏等学者[13]研究结果类似。