醋酸奥曲肽质量检验标准

醋酸奥曲肽标准CusuanAoqutaiOctreotideAcetateC49H66N10O10S2.xC2H4O21019.26.x60.02本品系由八个氨基酸组成的合成多肽，为D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-赖氨酰-L-苏氨酰-N-［（1R,2R）-2-羟基-1-（羟甲基）丙基］-L-半胱氨酰胺环（2→7）-二硫键醋酸盐。按无水与无醋酸物计算，含奥曲肽（C49H66N10O10S2）应为97.0%～102.0%。【性状】本品为白色或类白色冻干粉末或疏松块状物。本品在水和冰醋酸中易溶，在乙醚中不溶。比旋度取本品，精密称定，用冰醋酸定量稀释制成每1ml中约含5mg的溶液，依法测定(中国药典2010年版二部附录ⅥE)，按无水与无醋酸物计算，比旋度应为-66.0°至-76.0°。【鉴别】（1）取本品约1mg，加水1ml溶解，加双缩脲试剂（取硫酸铜0.15g，加酒石酸钾钠0.6g，加水50ml使溶解，在搅拌下加入10%氢氧化钠溶液30ml，加水至100ml，即得），即显蓝紫色。（2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。（3）本品的分子离子峰应为1019.26±1。【检查】氨基酸比值取本品1mg，置一玻璃管中，加30%过氧化氢溶液-甲酸（1:9）100µl，置冰水浴中4小时，真空干燥，加6mol/L盐酸溶液100µl，充氮后熔封，置110℃水解24小时，冷却，启封，真空干燥，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中约0.5mg的溶液，作为供试品溶液；另取磺基丙氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸及苏氨醇对照品，制成与供试品中各氨基酸相当的浓度，作为对照品溶液。照适宜的氨基酸分析方法测定。以苯丙氨酸、赖氨酸的总摩尔数的三分之一作为1，计算各氨基酸的相对比值，应符合以下规定：半胱氨酸1.7～2.3，苏氨酸0.8～1.2，苯丙氨酸1.8～2.2，赖氨酸0.9～1.1酸度取本品，加水溶解并制成每1ml中含0.125mg的溶液，依法测定(中国药典2010年版二部附录ⅥH)，pH值应为5.0～7.0。溶液的澄清度与颜色取本品，加水溶解并制成每1ml中含0.125mg的溶液，溶液应澄清无色，如显浑浊，与1号浊度标准液(中国药典2010年版二部附录ⅨB)比较，不得更浓；如显色，与黄色1号标准比色液(中国药典2010年版二部附录ⅨA第一法)比较，不得更深。醋酸取本品适量，精密称定，加稀释液[流动相A-甲醇（95：5）]溶解并定量稀释制成每1ml中含1.25mg的溶液，作为供试品溶液。照合成多肽中的醋酸测定法（中国药典2010年版二部附录ⅦN）测定，含醋酸应为5.0%～12.0%。有关物质取本品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.125mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液100µl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各100µl分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，脱苏氨醇8奥曲肽峰面积不得大于对照溶液的主峰面积的0.25倍（0.5%），其他单一杂质峰面积不得大于对照溶液的主峰面积的0.25倍（0.5%），各杂质峰面积总和不得大于对照溶液主峰面积的0.75倍（1.5%）。残留溶剂乙腈、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、乙醚、哌啶取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含100mg的溶液，作为供试品溶液。另精密称取乙腈、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、乙醚和哌啶各适量，加水定量稀释制成每1ml含乙腈0.041mg、二甲基甲酰胺0.088mg、二氯甲烷0.06mg、乙醚0.5mg和哌啶0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照残留溶剂测定法（中国药典2010年版附录ⅧP第三法）测定，以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或极性相近）为固定液的毛细管柱为色谱柱；初始温度为30℃，维持8分钟，再以每分钟7℃速率升至200℃，维持5分钟；进样口温度为200℃；检测器温度为250℃。取对照品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图，各色谱峰之间的分离度均应符合要求。精密量取供试品溶液与对照溶液各1μl分别注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，含乙腈不得过0.041%，二甲基甲酰胺不得过0.088%，二氯甲烷不得过0.06%，乙醚不得过0.5%，哌啶不得过0.5%。三氟醋酸取本品适量，精密称定，加稀释液[流动相A-甲醇（95:5）]溶解并定量稀释制成每1ml中含5.0mg的溶液，作为供试品溶液。另取三氟醋酸适量，用稀释液[流动相A-甲醇（95:5）]定量稀释制成每1ml中含三氟醋酸0.15mg的溶液，作为对照品溶液。照合成多肽中的醋酸测定法（中国药典2010年版二部附录ⅦN）测定，含三氟醋酸应不得过0.3%。水分取本品，照水分测定法(中国药典2010年版二部附录ⅧM第一法B)测定，含水分不得过5.0%。细菌内毒素取本品，依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅪE），每1mg醋酸奥曲肽中含细菌内毒素的量应小于5EU。【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)测定。色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以四甲基氢氧化铵溶液（取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml，加水880ml，用10%磷酸溶液调pH值至5.4）-乙腈（900:100)作为流动相A；以四甲基氢氧化铵溶液（取10%四甲基氢氧化铵溶液20ml，加水380ml，用10%磷酸溶液调pH值至5.4）-乙腈（400:600)作为流动相B；检测波长为210nm，按下表进行梯度洗脱。取脱苏氨醇8奥曲肽和醋酸奥曲肽对照品适量，加水溶解并制成每1ml中各约含脱苏氨醇8奥曲肽10μg和醋酸奥曲肽0.1mg的混合溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，理论板数按醋酸奥曲肽峰计算不低于3000；脱苏氨醇8奥曲肽峰与奥曲肽峰的分离度应符合要求。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）07327305545317327377327测定法取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释