DB37T 4724-2024 驴驹大肠杆菌病防治技术规程

37CodeofpracticeforthepreventionandtreatmentofcolibacillosisindonkeyfoalsI本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1驴驹大肠杆菌病防治技术规程GB39707医疗废物处理处置污染控制NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T5030无公害农产品兽药使用准则3.2驴驹大肠杆菌病donkeyfoalscolibaci784.1病原特点病原为肠杆菌科大肠埃希氏菌属中O78、O101、O8等主要血清型的致病性大肠杆菌。病原菌为革兰氏4.2传染源4.3传播途径该病通过消化道传播，粪-口传播是主要途径。病原菌污染粪便、圈舍、饲料、水槽及饮水等均可24.5发病特点无法站立。发病末期，食欲废绝，腹泻和便秘交包膜下有出血点。心内膜和外膜也有出血点，肠系膜淋巴结肿大、按NY/T541的规定执行，主要采集肛拭子、腹泻将纯化后的细菌接种于葡萄糖、甘露醇、乳糖、麦芽糖、吲哚试验、V-P试验、甲基红试验、枸橼3浓稠悬液，经121℃高压2h，制备O抗原。取洁净玻片，吸提取分离菌基因组DNA为模板扩增16SrDNA序列。引物序列按照附录A。PCR反应体系为模板（基因定。片段大小约为1500bp。回收并纯化PCR产物，按照双脱氧链终止法测序。按NY/T388和NY5027的规定执行。夏季食槽和水槽根据流行病学调查结果，发病率高驴场，在分娩前3d～5d给予母驴微生态制剂或中兽药。49.1.2抗菌药物的使用应根据实验室病死驴及病害驴的处理见《病死及病害动物无害化处理技术规范》（农医发[2017]25号）的规5A.1.1麦康凯选择培养基：大肠杆菌发酵乳糖产酸，PH值降低，麦康凯平板中的显色剂（中性红）显A.1.2革兰氏染色：G+菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙原与抗体结合时，它们之间的亲和力会导致免疫复合物的形成，从而引A.1.4PCR反应：聚合酶链反应（PCR）是80年代中期发展起来的分子生物学技术。其基本原理是用两A.1.5琼脂糖凝胶电泳实验：凝胶电泳的原理是基于DNA分子的电荷和大小差异。DNA分子是带有负电荷的，因此可以在电场中移动。凝胶是一种具有微孔结构的材料，可以限制DNA分子的运动，使其只能A.2试剂或材料A.2.4无菌培养皿。A.2.6载玻片。A.2.8营养肉汤液体培养基。A.2.11琼脂糖。A.2.12TAE缓冲液。A.2.13DNA纯化试剂盒。6A.2.18PCR反应管。A.3仪器设备A.3.1高速冷冻离心机：最大速度：14800转每分，最大RCF：21100xg，温度范围：-9℃~+40℃。A.3.2细菌培养箱：温度范围+28℃~+70℃。A.3.3医用冰箱：冷藏室温度范围：2℃~8℃,冷冻室温度范围：-20℃~-40℃。A.3.4超低温冰箱：温度范围-40℃~-86℃。A.3.6核酸电泳仪。A.3.8正置显微镜。A.4试验步骤将纯化后的细菌接种于葡萄糖、甘露醇、乳糖、麦芽糖、吲哚试验、V-P试验、甲基红试验、枸橼浓稠悬液，经121℃高压2h，制备O抗原。取洁净玻片，吸血清，一滴加入等量生理盐水。轻轻晃动玻片，倾斜玻片30°于1min内观察试验现象，根据试验现象将纯化的大肠杆菌接种于LB液体培养基中，置37℃恒时保存。通过1%