义翘讲堂《基于Beacon®平台的单B细胞抗体开发分享》

基于Beacon平台的单B细胞抗体开发分享孙月红北京义翘神州科技股份有限公司义翘神州CONTENTB细胞分化与发育1义翘神州抗体制备平台简介2Beacon简介3Beacon抗体筛选案例分享4B细胞分化与发育01义翘神州B细胞分化与发育中枢发育外周发育immatureBmatureBpro-BcommonLymphoidprogenitorgermminalcentercentroblastcentrocytememoryBplasmapre-B义翘神州抗体筛选平台简介02义翘神州杂交瘤技术技术路线成熟可进行功能性、亲和力筛选成本低融合效率低：1/1000周期长物种限制CellfusionPrimaryBCell(HGPRTpos)MyelomaBCell(HGPRTneg)HATselectionHybridomaSingleBcellcultureELISA义翘神州噬菌体展示技术种属适用范围广可获取全人抗体成本低易受抗体库影响亲和力有限非天然抗体对tissueRNAcDNASCFVphagemidTransformationinfectionlibrary义翘神州单B细胞技术种属适用范围广天然抗体对抗体多样性高开发周期短抗体亲和力高操作复杂

依赖大型设备LaserbeamVHDJHCY1VKJKCK义翘神州种属流式分选——人、鼠、兔...Beacon——鼠细胞类型流式分选——记忆B细胞Beacon——浆细胞抗体功能性验证流式分选——无Beacon——细胞结合、竞争检测通量流式分选——高，10000cell/sBeacon——4块芯片，80k细胞T1234义翘神州Beacon平台简介

02义翘神州义翘神州FlowDiffusion义翘神州

01细胞分离02细胞导入03验证实验04导出05ImmunizationandASCEnrichmentNanopenLoadOEPGravityIn-ChannelFluorescent”Bloom”AssayOEPNanopenExportVH/VLrecovery,cloning,expression30-60minutes30-60minutes3-4minutesperNanopenImportExport义翘神州细胞分离细胞导入验证实验导出样本细胞孵育抗体磁性微粒目的细胞免疫磁性捕获义翘神州细胞分离细胞导入验证实验导出义翘神州细胞分离细胞导入验证实验导出antigenantibodySecondaryantibodyAvidinbeadscell义翘神州细胞分离细胞导入验证实验导出阻断非阻断antibodySecondaryantibodyAvidinbeadsAvidinbeadsligandantigen义翘神州细胞分离细胞导入验证实验导出cellcellcell荧光配体阻断非阻断义翘神州细胞分离细胞导入验证实验导出义翘神州Beacon抗体筛选案例分享03义翘神州抗独特型抗体（Anti-idiotypeantibody,Anti-IDAbs）筛选能够特异性结合待测抗体位于可变区的独特位(Idiotype)的抗体抗体药物的药代动力学（PK）和药效动力学（PD）分析免疫原性分析：配体中和试验和抗体阻断试验的对照药物抗体抗独特型抗体靶点蛋白药物抗体抗独特型抗体靶点蛋白抗原阻断型抗原非阻断型阻断抗原抗体结合

检测游离型抗体药不阻断抗原抗体结合

检测抗体药总量（游离，半结合，结合）义翘神州01020304动物免疫（2周）Beacon筛选（1天）抗体基因扩增（1周）抗体表达纯化及检测（2周）全长抗体药物结合人IgG结合靶点蛋白竞争义翘神州导入11978全长抗体药检测772人IgG检测151靶点蛋白竞争检测竞争54，非竞争97

抗原/IgG结合检测竞争抑制率检测义翘神州修饰性抗体筛选磷酸化多肽筛选非磷酸化多肽筛选靶点导入细胞数磷酸化+磷酸化+非磷酸化-sinoA1240010963蛋白修饰指的是蛋白质经过翻译后进行的基团修饰，常见的有乙酰化、泛素化、甲基化、磷酸化等义翘神州CD47抗体筛选CD47bindingDomainofSIRPαBlockstheDON’TEATMEsignalfromCD47butdoesnotbindtoredbloodcellsDeliversanEATMEsignaltoMacrophagesthroughFcγRs:DifferentiatedfromlgG4antibodiesSIRPαFctriggersactivationofFcγRsonmacrophagesHumanlgG1FcFcγRSIRPαFcCD47义翘神州SampleIDIC50(ug/mL)CD47-M0002-10.273CD47-M00650.074CD47-M0137-10.198CD47-M0091-10.183CD47-M0075-10.155CD47-M01200.103CD47-M0126-20.134Control-10.033Control-20.204SampleIDKD(M)kon(1/Ms)kdis(1/s)Control-15.97E-102.62E+051.56E-04Control-21.92E-092.50E+054.81E-04CD47-M0002-13.68E-107.42E+052.73E-04CD47-M00651.11E-095.45E+056.08E-04CD47-M0091-14.52E-103.87E+051.75E-04CD47-M0075-11.44E-094.41E+056.34E-03CD47-M01201.60E-095.75E+059.18E-04CD47-M0126-26.90E-104.40E+053.04E-04Control-1Control-2M0002-1M0065M0091-1M0075-1M0120M0126-2BlockingAffinityBindingwithCellsTargetCellonBeaconPCRELISABlockingWeakBindingwithRBCCD47331255,77.04%108732JurkatRBC义翘神州猴痘A29抗体筛选靶点导入细胞数抗原+A2911390321WesternBlotAssayELISAAssayTheEC50=23.98ng/ml义翘神州关于“北京义翘神州”坚持自主研发生产打造中国生命科学研究“一站式”试剂与服务支撑平台人才与设施荣誉资质设施：---27,100+平米研发中心

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