8.动物细胞融合与单克隆抗体

动物细胞融合与单克隆抗体专项2细胞工程蛇身马首鹿角兽脚鬣尾鹰爪鱼鳞虎须。。。受精卵来自精子来自卵细胞一、动物细胞融合1、动物细胞融合的过程不同DNA的两个细胞AB思考题1、植物体细胞杂交中诱导原生质体融合惯用的办法有哪些？离心、振动和电激等物理办法；PEG等化学办法2、动物细胞融合能运用上述两类方法吗？尚有其它办法吗?能能够运用灭活的病毒进行诱导灭活病毒诱导细胞融合的原理用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核病毒颗粒细胞核灭活丧失感染性保存融合活性为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞进行有丝分裂AB3、植物体细胞杂交过程应先进行原生质体融合再进行组织培养形成完整的个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？4、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？不能思考题2、动物细胞融合的概念动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一种细胞（单核的杂交细胞）的过程。4、动物细胞融合的应用生物新品种哺育细胞遗传细胞免疫肿瘤运用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞，制备单克隆抗体3、动物细胞融合的意义突破了有性杂交办法的局限，使远缘杂交成为可能。如果你掌握了动物细胞融合技术，你想用它来解决什么问题？植物体细胞杂交和动物细胞融合在原理、细胞融合的办法、诱导办法等方面有什么差别呢？小结：杂种植株融合的原生质体AB再生出细胞壁脱分化愈伤组织再分化植物细胞的融合植物组织培养植物细胞A原生质体B原生质体A杂种细胞AB去壁去壁人工诱导办法？增进融合的办法？融合完毕的标志植物细胞B复习:植物体细胞杂交技术重要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学办法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导办法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的办法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较1.抗体是由何种细胞产生的？提问？二、单克隆抗体2.运用已学知识，考虑如何得到抗体？

抗体抗原刺激浆细胞通过免疫的B淋巴细胞（浆细胞）动物体内抗体的传统生产办法从血清中分离抗体多个浆细胞动物体内多个抗体抗原

抗原动物体内刺激浆细胞

抗体抗原不纯抗体不纯不能增殖产生大量抗体二、单克隆抗体产量低、纯度低，抗体特异性差3.此办法得到的抗体的缺点是什么？该法制备抗体的特点：1、如何确保抗体的纯度？如何获得化学性质单一、特异性强的高产抗体？（一）、单克隆抗体的制备设计方案：小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖2、如何提高抗体的产量？一种B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体杂种细胞小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖一种B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体BB-BB-瘤瘤-瘤瘤3、细胞融合后培养液中有几个细胞？4、如何从中筛选出杂交瘤细胞？用特定的选择性培养基进行筛选：在培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞5、如何选择出分泌所需专一抗体的杂交瘤细胞？克隆化培养和抗体检测。经多次筛选，获得足够数量的能分泌所需专一抗体的细胞。体外大规模培养或注射到小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中，可提取大量的单克隆抗体。6、如何获得大量单克隆抗体？总结:单克隆抗体的制备过程分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把下列代表单克隆抗体制备过程环节的图解的字母按对的次序连接起来。次序是？（一）、单克隆抗体的制备诱导其融合的办法有哪些？融合后培养液中有几个细胞如何筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点注射特定抗原的目的是什么为什么要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选大量增殖杂交瘤细胞获得单克隆抗体的办法制备过程由单个B淋巴细胞通过无性繁殖（克隆），形成基因型相似的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。单克隆抗体最重要的优点：特异性强、敏捷度高并可能大量制备。①在基础理论研究中含有重要意义

②（二）、单克隆抗体的应用诊疗试剂——最广泛应用精确、高效、简易、快速同位素标记的单克隆抗体，在特定组织中成像，定位诊疗有关疾病运载药品(“生物导弹”—单抗导向，药品为弹头)③用于治疗疾病和运载药品比较植物体细胞杂交和单克隆抗体的制备比较项目植物体细胞杂交单克隆抗体的制备原理融合前处理促融方法

用途过程第一步第二步第三步第四步细胞膜的流动性、细胞的全能性膜的流动性、细胞增殖酶解法去壁小鼠免疫解决、细胞分散物理法化学法物理、化学、生物法原生质体的制备融合亲本细胞的准备原生质体的融合与筛选动物细胞融合与两次筛选杂种细胞的形成与培养产特定抗体的杂交瘤细胞培养杂种植株的鉴定单克隆抗体的分离提纯单抗有助于疾病的诊疗、治疗、防止获得具优良性状的杂种植株小结两个过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程三个“一”一种诱导细胞融合的新办法－－灭活病毒一种新细胞－－杂交瘤细胞一种优势－－单克隆抗体特异性强、敏捷度高的优势1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是A.通过免疫的B淋巴细胞B.不通过免疫的T淋巴细胞C.通过免疫的T淋巴细胞 D.不通过免疫的B淋巴细胞B不要灰心，再来一次！ADC不要灰心，再来一次！不要灰心，再来一次！恭喜你，答对了！再接再厉！知识闯关2、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合后要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是①B淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞本身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞本身融合细胞⑤杂交瘤细胞A.①②③④B.①③⑤C.②④D.①③B不要灰心，再来一次！ADC不要灰心，再来一次！不要灰心，再来一次！恭喜你，答对了！再接再厉！3、试管婴儿、试管苗和克隆羊这三者能够说是当代生物科技的杰出成果,下列对其生物学原理及技术的叙述,对的的是A.都属于无性生殖B.都运用了细胞工程的某些技术C.都不会发生基因重组

D.都体现了已分化的细胞含有全能性B解题思路探究对克隆与组织培养、试管动物(婴儿)分辨不清克隆组织培养试管动物(婴儿)生殖方式无性无性有性遗传物质来源2个亲本1个亲本2个亲本性别决定提供核亲本一般没有精子类型用途优良种畜快速繁育,可选择性别快速繁殖无病毒植株解决不孕不育4、将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体，其根据是

A.B淋巴细胞能够产生抗体，但不能无限增殖

B.B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才干产

生抗体

C.骨随瘤细胞能够无限增殖，但不能产生抗

体

D.骨髓瘤细胞能够产生抗体，但不能无限增

殖多选题（A、C）下课啦！5、右图为某同窗根据杂交瘤技术的办法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：⑴该方案能达成预期效果吗？因素是⑵图中②为过程，可在诱导下完毕。杂交瘤细胞繁殖进行的是分裂，该细胞的特点是⑶淋巴细胞能与骨髓瘤融合成一种细胞，两种细胞膜也能融合在一起，阐明细胞膜不能没有抗原注入小鼠体内，无法获得产生此种抗体的B细胞细胞融合有丝灭活的病毒或聚乙二醇又能产生专一的抗体。既能快速大量繁殖，含有一定的流动性⑷将诱导后产生的多个细胞，放在含培养基的多孔培养板上培养，筛选。⑸该方案的目的是。单克隆抗体的精拟定义为。A.一类特殊抗体B.无性繁殖系C.单一抗体细胞的无性繁殖系D.单一抗体细胞的有性繁殖系⑹单克隆抗体与普通的血清抗体相比，含有的优点是。特定的选择性制备单克隆抗体C特异性强，敏捷度高并可大量制备抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的含有免疫功效的球蛋白。什么是抗体？已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但普通不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不停分裂增殖。小资料：思考与探究1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？提示：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相似，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。思考与探究

2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？提示：动物在免疫反映的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞含有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不停增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。4.为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？就现在惯用的细胞融合办法来看，不管是用物理的、化学的办法，还是生物的办法，其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者盼望得到的细胞类型。现在动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来阐明这一问题。我们懂得，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一种B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一种脾细胞（含B淋巴细胞）和一种瘤细胞杂交，我们不能拟定该脾细胞分泌的抗体与否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就能够从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。5.如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，普通用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超出一种，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（惯用酶联免疫吸附实验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能确保是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，普通需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。对位训练3.运用细胞工程办法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列有关叙述对的的是（）A.用纯化的核衣壳蛋白重复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体B.体外培养单个B淋巴细胞能够获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞D.运用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的办法可诊疗出病毒感染者D1、从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状() A.难以预测B.像甲C.像乙D.像丙2．（2004年，全国）用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验环节中错误的是（）A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B．用纤维素酶解决B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D．筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体基础训练巩固BB3.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较