人凝血酶原复合物制造及检定规程

人凝血酶原复合物制造及检定规程

RequirementsforProthrombinComplex

本品系由健康人的血浆，经低温乙醇蛋白分离法或经国家药品监督管理部门批准的其他方法提制，并经病毒灭活处理而得的冻干制剂，内含凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及适宜稳定剂。不含防腐剂和抗生素。1基本要求

1.1.1设施与生产质量管理

按中国《药品生产质量管理规范》要求实施。厂房设施必须专用，不得与其他异种蛋白制剂混用。1.1.2原料及辅料

生产中所用的稀释剂、稳定剂、防腐剂、灭活剂、佐剂，及其他化工原料，其质量应符合现行《中国药典》或《中国生物制品主要原辅材料质控标准》的要求。

辅料品种与用量应当无害，不影响制品的安全性和有效性，并应对规定的检定方法无干扰。

化工及食品原料作为原料时，必须制定符合药用要求的标准，并需经国家药品监督管理部门批准。1.1.3生产用水

生产用水源水应符合饮用水标准，纯化水、注射用水及灭菌注射用水应符合现行《中国药典》标准。1.1.4生产用器具

直接用于生产的金属或玻璃等器具，必须专用，并经过严格清洗及去热原质处理或灭菌处理。2制造

2.1原料血浆

2.1.1血浆的来源、采集及质量应符合本版规程通则《原料血浆采集规程》要求。血浆应无凝块，无纤维蛋白析出，非脂血，无溶血。

2.1.2去除冷沉淀、凝血因子Ⅷ的血浆及组分Ⅲ沉淀均可用于生产。

2.1.3组分Ⅲ沉淀存放于-30℃以下，保存时间不得超过6个月。2.2原液制备

2.2.1可采用直接从血浆中用凝胶吸附法或低温乙醇和聚乙二醇分离蛋白并经凝胶吸附法制备，亦可用经国家药品监督管理部门批准的其他方法制备。生产过程中不能加任何防腐剂或抗生素。

2.2.2蛋白质透析和浓缩，应采用超滤法。澄清及除菌过滤，应使用无石棉的介质。

2.2.3原液检定

按3.1项进行。2.3半成品制备

2.3.1配制

按出品规格配制，制品内可加适宜的稳定剂。若加肝素，则每１.0IU因子Ⅸ肝素加量不超过0.5IU。

2.3.2半成品检定

按3.2项进行。2.4成品制备

2.4.1分批

应符合本版规程通则《生物制品分批规程》的有关规定。

2.4.2分装及冻干

按本版规程通则《生物制品分装规程》进行。除菌过滤分装的制品应立即冻结。冻干过程制品温度不得超过35℃，真空封口。

2.4.3规格

每瓶人凝血因子Ⅸ的效价可分为100、200、300、400、1000IU5种，同时制品还含有人凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ。

2.4.4包装

应符合本版规程通则《生物制品包装规程》的有关规定。2.5病毒去除和灭活

生产过程中应有特定的去除和灭活脂包膜和非脂包膜病毒处理。如果应用灭活剂（如有机溶剂、去污剂）灭活病毒，则应规定人用安全的灭活剂残留量最高限值。3检定

3.1原液检定

3.1.1pH值

按3.3.3.2项进行。

3.1.2活性测定

3.1.2.1人凝血因子Ⅸ活性及比活性

每1ml人凝血因子Ⅸ效价应不低于10IU（附录1），比活性应不低于0.3IU/mg蛋白。3.2半成品检定

3.2.1热原质试验

按本版规程通则《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量按家兔体重每1kg注射30IU人凝血因子Ⅸ，应符合规定。

3.2.2无菌试验

按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，符合规定。3.3成品检定

每批制品应抽样作全面质量检定，不同机柜冻干的制品分别抽样做无菌试验和水分测定。以下检定项目除真空度、溶解时间、水分外，其余项目按制品标示量加入灭菌注射用水溶解后进行检定。

3.3.1鉴别试验

按《中国生物制品规程》2002年增补本《血液制品鉴别试验》A法进行。仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛、抗猪、抗羊血清不产生沉淀线。

3.3.2物理检查

3.3.2.1外观

应为白色或灰绿色疏松体，复溶后应为无色、淡黄色、淡蓝色或黄绿色澄明溶液，不应有异物或沉淀。

3.3.2.2真空度

以高频火花真空测定器检测，瓶内应出现蓝紫色辉光。

3.3.2.3溶解时间

向已平衡至20～25℃的制品，加入标示量的20～25℃灭菌注射用水，轻轻摇动，应于15分钟内完全溶解。

3.3.3化学检定

按本版规程附录《生物制品化学及其他检定方法》进行。

3.3.3.1水分

应不高于3.0%。

3.3.3.2pH值

在20℃±2℃测定，pH值为6.5～7.5。

3.3.3.3PEG含量

应不高于0.5g/L。

3.3.3.4钠离子含量

应不高于160mmol/L。

3.3.3.5枸橼酸离子含量

应不高于25mmol/L。

3.3.4效价测定

3.3.4.1人凝血因子Ⅸ

3.3.4.1.1效价

按附录1法测定，凝血因子Ⅸ活性应不低于10IU。按3.3.2.3项加入的溶剂量，计算每瓶人凝血因子Ⅸ效价，应为标示量的80%～140%。

3.3.4.1.2比活性

应不低于0.3IU/mg蛋白质。

3.3.4.2人凝血因子Ⅱ效价

按3.3.2.3项加入的溶剂量及每1ml人凝血因子Ⅱ活性（附录2），计算每瓶人凝血因子Ⅱ效价，应不低于标示量的80%。

3.3.4.3人凝血因子Ⅶ效价

按3.3.2.3项加入的溶剂量及每1ml人凝血因子Ⅶ活性（附录3），计算每瓶人凝血因子Ⅶ效价，应不低于标示量的80%。

3.3.4.4人凝血因子Ⅹ效价

按3.3.2.3项加入的溶剂量及每1ml人凝血因子Ⅹ活性（附录4），计算每瓶人凝血因子Ⅹ效价，应不低于标示量的80%。

3.3.5人凝血酶活性

按附录5方法测定。不得有凝块或纤维蛋白析出。

3.3.6肝素含量

按附录6法测定，每1IU人凝血因子Ⅸ肝素含量应不高于0.5IU。

3.3.7活化的凝血因子

按附录7方法测定，凝固时间应不低于150秒。

3.3.8无菌检查

按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，符合规定。

3.3.9异常毒性检查

按本版规程通则《生物制品异常毒性试验规程》进行。豚鼠每只注射供试品5ml（每1ml含10IU人凝血因子Ⅸ），小鼠每只注射供试品0.5ml（每1ml含10IU人凝血因子Ⅸ），应符合规定。

3.3.10热原质检查

按本版规程通则《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量按家兔体重每1kg注射30IU人凝血因子Ⅸ，应符合规定。

3.3.11HBsAg

按试剂盒说明书测定，应为阴性。

3.3.12根据病毒灭活方法，应增加相应的检定项目。若采用磷酸三丁酯和吐温-80法灭活病毒，则应检测磷酸三丁酯和吐温-80残留量。

3.3.12.1磷酸三丁酯残留量