SNT 1569.2-2013 出口河豚鱼中河豚毒素检测方法 第2部分：小鼠生物法_第1页
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出口河豚鱼中河豚毒素检测方法第2部分：小鼠生物法I本部分为SN/T1569的第2部分。本部分按照GB/T1.1—2001GB14925实验动物环境及设施豚毒鱼类及其他生物体内含有的一种剧毒的生物碱，又称蝶螈毒素、东方鲀毒素等，分子式为C₁H₁₇O₈N₃,相对分子质量319,是一种通过阻断钠离子通道抑制神经冲动的非蛋白类神经毒素。样品应立即置于-18℃以下冷冻保存。根据河豚毒素易溶于酸性溶液的原理，试样制备后经2次0.5%乙酸溶液煮沸提取，20000g离心25.2.10.5%乙酸溶液：将5mL乙酸(C₂H₄O₂)用水稀释至1L。5.4.1.2对于肌肉组织，准确称取样品10.0g/于50mL离心管中，加入0.5%乙酸溶液11mL,充分5.4.1.4向沉淀中加入0.5%乙酸溶液l1mL,充分混匀，沸水浴中煮沸5min,不断搅拌以防止组织5.4.1.5冷却至室温，20000g高速离心20min,取上清液，将2次离心上清液合并混匀，用0.5%乙酸定容至25mL。此提取液1mL相当于原脏器或者组织的0.4g。5.4.2.1选取19.0g~21.0g的无特定病原体级(SPF)昆明系雄性健康小鼠6只，称取并记录质量。随机分为实验组和空白对照组2组，每组3只。35.4.2.2对每只试验小鼠腹腔注射1mL提取液或空白对照液(0.5%乙酸)。注射过程中若有1滴以5.4.2.3记录注射完毕时间，仔细观察并记录小鼠停止呼吸时的死亡时间(到小鼠呼出最后一口5.4.2.4若注射样品原液后，小鼠死亡时间小于7min,则按附录A中表A.1计算出样品原液1mL3只小鼠以确定样品的毒力。稀释时使用0.5%乙酸。5.4.2.5若注射样品原液后，小鼠的死亡时间大于13min,则直接根据中间致死时间确定样品的中但不正好处于中间时，则取更接近于中间致死时间的值)。若小鼠体重不正好为20.0g,中表B.1进行MU的误差补正，通过补正后的MU中间值表示出稀释液的毒量。1M出的MU值乘以稀释倍数计算出1g原样品相对应的MU。每克样品中河豚毒素的含量按式(1)计算：D——稀释倍数；a)若小鼠的死亡时间大于30min,结果报告为<3.11MU/g肌肉组织/肝脏/皮肤。b)若小鼠的死亡时间小于30min,结果按照5.4.3.1计算得到实际结果报告，待测样品中河豚c)若3只小鼠死亡时间不都小于30min

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