化学农药环境安全评价试验准则 第15部分：蚯蚓急性毒性试验 编制说明

《化学农药环境安全评价试验准则第15部分：蚯蚓急性毒性试验》编制说明（一）任务来源根据国标委发[2023]64号国家标准化管理委员会关于下达2023年国家标准制修订计划的通知（2023年12月28日发）第881项，由农业农村部农药检定所主持承担“化学农药订工作，项目周期12个月，计划号20233426-T-326。（二）制定背景我国是农业大国，也是农药生产和使用大国。农药是一种特殊商品，它既是农业生产必需的生产资料，它的使用对控制病、虫、草害，保障粮食安全发挥着巨大的作用，但同时也可能对生态环境造成不容忽视的污染和危害，甚至对人类健康产生严重威胁。农药对生态环境的污染危害已成为全球广泛关注的重大环境问题，农药的安全性（包括环境和人体健康）管理也已逐步成为全球农药管理的重点。为了加强农药的环境管理，以便在使用农药的同时保护日益脆弱的生态环境，世界各国都加大了监管力度。农药环境管理的法律、标准不断完善，欧盟、美国、日本、澳大利亚、加拿大、巴西等国家和地区先后建立了农药环境风险评估技术体系。我国也于2016年发布了NY/T2882《农药登记环境风险评估指南》系列农业行业标准，建立了农药对水生生态系统、鸟类、蜜蜂、家蚕、地下水、非靶标节肢动物和土壤生物的环境风险评估方法。土壤是农药在环境中的“贮藏库”与“集散地”。农药在施用过程中只有一部分会被截留在植物上，另一部分则会进入土壤、空气中。虽然土壤自身有一定的净化能力，但当进入土壤的农药量超过土壤的环境容量或超过土壤生物的耐受能力时就会形成土壤污染，威胁陆地生态系统的平衡与土壤质量。因此，明确农药对土壤生物的毒性是评估农药环境安全性的基础。2017年新发布的《农药登记资料要求》（农业部2569号公告）也规定化学农药申请农药登记时需要提交蚯蚓急性毒性试验（3.1.3.8.1）资料以及环境风险评估报告。我国国家标准GB/T31270.15-2014《化学农药环境安全评价试验准则第15部分：蚯蚓急性毒性试验》（以下简称原标准）在我国的农药管理与新农药的开发研制过程中发挥了重要作用。随着绿水青山就是金山银山的理念深入人心，国家、社会和公众对我国的农药管理工作提出了更高的要求。因此，为了满足农药管理的需求，促进我国农药的国际贸易，进一步加强与规范农药对生态环境的安全评价工作，修订《化学农药环境安全评价试验准则第15部分：蚯蚓急性毒性试验》国家标准是非常必要的。《化学农药环境安全评价试验准则第15部分：蚯蚓急性毒性试验》国家标准的修订，旨在进一步完善我国农药环境安全评价技术体系，通过农药登记前的环境安全性评价，从源头控制农药对环境可验结果的准确可靠及可比性。因此，国家标准的修订，对于规范我国农药环境安全评价工作，使之适应新形势的要求，从而更好地为我国的农药登记和农药环境管理提供技术支持具有重要意义。GB/T31270.15-2014至今已实施近10年，广泛应用于农年发布的适用于化学品测试的“蚯蚓急性毒性试验”试验指南（OECDGuidelinefortheTestofChemicals,Earthworm,AcuteToxicityTests,No207,4April1984.）以及ISO（Soilquality—EffectsofpollutantsonearthwormsPart1:DeterminationofacutetoxicitytoEiseniafetida/Eisenia850.3100:EarthwormSubchronicToxicityTest.January2012.）的相关指南文件可以为标准的修订提供方法参考。（三）起草过程（1）成立标准起草工作组。自项目通知下达后，农业农村部农药检定所组织相关专家成立了标准起草工作组,提出标准修订实施方案。起草组成员主要包括：廖建华、袁善奎、周艳明、杨锚、葛峰、朱昱璇、陈朗、周欣欣、柳新菊、王胜翔。（2）文本起草。2024年2-6月，标准起草工作组查阅美国环保署（USEPA）关于蚯蚓急性毒性试验的试验准则，调研了我国农药登记环境影响试验单位的现状，确定了本标准的框架结构和主要内容。并同时按照GB1.1-2020《标准20001.4-2015《标准编写规则第4部分试验方法标准》的要求编写完成标准征求意见稿和编制说明。二、标准编制原则、主要内容及其确定依据，修订标准时，还包括修订前后技术内容的对比。本标准的主要内容包括试验条件、试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤、试验数据处理、质量控制以及试验报告的规定。修订这些内容时遵循科学合理、可操作可重复的原则。科学合理性体现在方法设计以确保能够真实反应化学农药对蚯蚓的急性毒性为目标，从而为农药登记环境风险评估提供数据支持。可操作可重复体现在把科学性第一放在第一位的基础上，标准修订过程中充分考虑国内实验室现有技术能力和平台，确保对试验各相关要素都进行了全面的、充分的描述，确保各要素的有关规定具有可操作性，确保农药登记环境安全性数据的可靠。同时，本标准还遵循以下1.规范性原则一是格式的规范性，本标准的编制要符合GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》等基础标准的规定；二是指内容的规范性，标准规定的试验方法，力求做到试验条件的规范化。2.前瞻性、先进性原则充分考虑与国际通用试验准则的接轨。注意吸收国内外相关标准，国际农药环境安全性评价技术最新进展。1.范围。给出了本标准的适用范围。2.规范性引用文件。规定了试验用水标准、土壤pH的测定方法、土壤水分测定方法以及试验生物培养应采用的方3.术语和定义。给出了生殖带、成蚓、半致死浓度、参比物等本标准涉及的术语、定义。4.原理。介绍了化学农药蚯蚓急性毒性试验的基本原5.试验条件。给出了化学农药蚯蚓急性毒性试验温度和6.试剂或材料。给出了开展化学农药蚯蚓急性毒性试验所需的试剂、供试生物，规定了供试土壤的配比、配方等要7.仪器设备。给出了开展化学农药蚯蚓急性毒性试验所8.样品。规定了被试物需了解的信息、对参比物做了要9.试验步骤。规定了蚯蚓急性毒性试验中预试验、正式试验以及限度试验的浓度设置、受试生物的准备、被试物添加、染毒、培养与观察等试验操作具体要求。10.试验数据处理。规定了试验结果的处理方式。11.质量控制。规定了空白对照组、参比物试验结果质量控制要求。12.试验报告。给出了试验报告中至少应包含的内容。附录A（规范性）人工土壤的配制。规定了人工土壤配方及配制方法，对每种成分的含量及要求做了说明。经济合作与发展组织（OECD）于1984年发布了化学品蚯蚓急性毒性试验准则（OECDGuidelinefortheTestofChemicals,Earthworm,AcuteToxicityTests,No207,4April1984.该文件是国际通行的研究农药在土壤中蚯蚓毒性的试验准则，大多数国家农药管理机构接受按该准则开展的农年更新了污染物对蚯蚓的急性毒性测定准则《Soilquality—EffectsofpollutantsonearthwormsPart1:DeterminationofacutetoxicitytoEiseniafetida/Eiseniaandrei》（ISO11268-1，2012）。美国环保署（EPA）2012年发布的蚯蚓亚慢性毒性试验准则（EPAEcologicalEffectsTestGuidelines.OCSPP850.3100:EarthwormSubchronicToxicityTest.January2012.该方法的试验系统、试验程序等与国际方法略有不OECD207经过多年使用已较为完善，本标准在其基础上制定。除文字性修改外，本标准与OECD207的技术内容基本一致，但为适应我国土壤性质等实际情况，在以下方面1.在规范性引用文件中列出了试验用水标准、土壤pH的测定方法、土壤水分测定方法以及试验生物培养标准，且在国家标准、行业标准满足要求的情况下优先列出国家标2.未采纳OECD207中滤纸接触毒性试验方法。考虑到滤纸接触毒性试验方法操作性要求高，使用频率低，试验结果准确性不如人工土壤试验，因此只采用了人工土壤试验方1.增加了“规范性引用文件”一章（见第2中要求测定试验用土壤的pH、含水量等信息，但未规定相应的检测方法。土壤pH、含水量的测定有多种方法，易造成不同试验室之间采用不同的检测方法，导致数据无法对比，本标准规定了土壤理化性质的检测方法。试验生物的培养好坏直接影响试验生物结果，我国于2022发布了《农药行标对试验生物饲养设施与饲料、引种与验收、饲养管理等都做了明确规定，因此，试验生物的培养直接参考行标。2.删除了部分术语与定义（见第3章，2014年版的第2章）。删除了原标准中“化学农药”、“原药”、“制剂”、“有效成分”等农药领域已广为人知、不需要定义的术语和定义。3.增加了“试验条件”一章，删除了对试验湿度的要求（见第5章，2014年版的4.1.5）。原标准规定环境湿度80%±10%，OECD207对环境湿度没有要求，但是明确需要报告试验开始和结束时试验介质的含水率，要求更有针对性，降低了试验环境湿度要求。4.增加了“试剂或材料”一章，细化了试剂、供试生物试剂、供试生物和供试土壤是开展蚯蚓试验的基础，本标准对此做了细化。5.增加了“仪器设备”一章，列出了试验所需的仪器设备信息（见第7章，2014年版的4.1.4）。原标试验所需的部分仪器，本标准参考OECD207，列出了试验所需的主要仪器。6.增加了“样品”一章，细化了被试物信息（见8.1，2014年版的4.1.3）。原标准中规定被试物为农药纯品、原药或制剂，本标准在此基础上，规定了试验开始前需对被试物基本理化及行为参数进行了解，以确保试验人员能根据被试物基本信息采取合理的试验方法。7.增加了“试验步骤”一章，更改了被试物添加方式、OECD207在浓度设置等方面有差异，本标准根据OECD207的要求做了相应更改。被试物添加方式根据溶解性划分了3类，相比原标准做了进一步细化；原上限浓度设置为100mg对于高含量农药来说提高了试验浓度，明确了环境毒性风险，降低了毒性不确定性；每个浓度的重复数由3个改为4个，可靠性得到了提高；原标准对试验蚯蚓的体重做了规定，OECD207还规定对开始和结束时蚯蚓的体重进行称重，可对蚯蚓生长的体重指标进行效应分析，进一步明确农药对蚯蚓的效应指标。此外，试验介质的重量规定由500g干土修改为750g湿土。8.增加了“试验数据处理”一章（见第10章，2014年死亡率分别为0和100%，以其几何平均值作为LC50。9.增加了“质量控制”一章（见第11章，2014年版的10.删除了“农药对蚯蚓毒性等级划分”（2014年版的附（14d）>10mga.i./kg干土为低毒，1.0﹤LC50≤10.0mga.i./kg干土为中毒，0.1﹤LC50≤1.0mga.i./kg干土为高毒，LC50≤0.1mga.i./kg干土为剧毒。国际上对农药对蚯蚓的急性毒性划分没有统一标准。在管理中也采用环境评估的方法综合农药的使用方法、环境归趋和生态毒性等多方面因素确定农药的环境风险，而不是仅根据农药的毒性采取对应的管理措施。因此本标准删除了该附录。三、试验验证的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效益、社会效益和生态效益；为验证该方法在国内实验室的可行性和各实验室间结果的可重复性，标准制定工作组组织开展了验证试验。由北京绿城堡农业科技有限公司、沈阳沈化院测试技术有限公司安全评价中心、浙江省农业科学院农产品质量安全与营养研究所等三家试验室开展了95%吡虫啉原药对蚯蚓急性毒性验证试验。蚯蚓急性毒性验证试验结果汇总见表1。表1蚯蚓急性毒性验证试验结果汇总表验证试验结果表明三家实验室的试验结果（14d半致死浓度）基本一致，表明试验方法在国内实验室的具有较好的可重复性。目前国际通行的研究农药对蚯蚓急性毒性的试验准则是经济合作与发展组织（OECD）于1984年发布了化学品蚯蚓急性毒性试验准则（OECDGuidelinefortheTestofChemicals,Earthworm,AcuteToxicityTests,No207,4April1984.大多数国家农药管理机构接受按该准则开展的农药对蚯蚓急性毒性试验资料。国际标准化组织（ISO）于2012年更新了污染物对蚯蚓的急性毒性测定准则《Soilquality—EffectsofpollutantsonearthwormsPart1:DeterminationofacutetoxicitytoEiseniafetida/Eiseniaandrei》（ISO11268-1，2012）。美国环保署（EPA）2012年发布的蚯蚓亚慢性毒性试验准则（EPAEcologicalEffectsTestGuidelines.OCSPP850.3100:EarthwormSubchronicToxicityTest.January2012.该方法的试验系统、试验程序等与国际方法略有不同。本标准在OECD207基础上制定，除文字性修改外，本标准与OECD207的技术内容基本一致，但为适应我国土壤性质以及试验可操作性等实际情况做了部分修改（见主要内容确定依据部分）。与OECD、ISO、EPA等试验方法标准相比，本标准主要技术内容与其基本相同，具有国际先进水本标准2014年第一次发布，此次为我国第一次修订，将为农药的环境毒理试验与登记管理、为检验检测机构开展相关测试工作提供直接的方法标准支持。本标准的修订，将进一步提升我国农药环境安全试验技术水平，满足新时代农药管理的需求，促进我国农药的国际贸易，加强与规范农药对生态环境的安全评价工作，保障生态环境与人体健康安全，具有重要的现实意义。据估计，我国农药的有效利用率约为40%，其余部分多数进入土壤。农药对土壤中的蚯蚓等土壤生物的影响以及易淋溶农药对地下水的影响引起人们的广泛关注。农药对土壤生物的毒性是评估农药环境安全性的基础，我国《农药登记资料要求》也规定化学农药申请农药登记时需要提交蚯蚓急性毒性试验报告。本标准的制定实施有利于规范农药的蚯蚓急性毒性试验，明确农药对土壤生物的毒性，试验结果可用于农药对土壤生物的环境风险评估，减少高风险农药的登记使用，促进农业的可持续发展、保障生态环境安全。四、与国际、国外同类标准技术内容的对比情况，或者与测试的国外样品、样机的有关数据对比情况；本标准制定和起草过程中参考了国际通行的OECD试验准则，结合我国土壤实际情况，与欧美发达国家和国际组织现行的试验准则水平相当。本标准没有专用仪器设备和专用标准样品，不存在国内外样机与样品对比问题。五、以国际标准为基础的起草情况，以及是否合规引用或者采用国际国外标准，并说明未采用国际标准的原因；本标准技术内容主要参照经济合作与发展组织（OECD）《化学品测试准则》No.207（1984年）蚯蚓急性毒性试验准