养殖场饮水管线绿色杀菌技术规程

B41DB13养殖场饮水管线绿色杀菌技术规程河北省市场监督管理局发布IDB13/Txxx—2024本标准按照GB/T1.1－2020给出的规则起草。本标准由河北省农业农村厅提出。本标准起草单位：河北工程大学。本标准主要起草人：张永英、张志永、李宁、王风申、杨惠峰、张占丽、王海英、李中习、栾英凡、王方方、杨硕、钟翠红、梁东亮、郑国君、朱阵、刘月、吴丽丽、霍志闯、汲佳佳、苏子轩、董润蕾。1DB13/Txxx—2024养殖场饮水管线绿色杀菌技术规程本标准规定了养殖场饮水管线细菌生物被膜的术语和定义、饮水管线被细菌生物被膜污染的判定以及控制细菌生物被膜污染饮水管线措施。本标准适用于养鸡场饮水管线的细菌生物被膜消除，其它动物养殖场饮水管线的生物被膜清除也可参照此方法。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。引用文件的最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB18596畜禽养殖业污染物排放标准GB5749生活饮用水卫生标准GB4789.5食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.3食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB/T32148家禽健康养殖规范GB/T13663给水用聚乙烯（PE）管材GB/T5750.12生活饮用水标准检验方法NY/T1665畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法NY5027无公害食品畜禽饮用水水质NY/T388畜禽场环境质量标准NY/T555动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法NY/T4146动物源沙门氏菌分离与鉴定技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1饮水管线细菌生物被膜2DB13/Txxx—2024养鸡场饮水管线中常见的微生物主要有大肠杆菌、空肠弯曲菌、志贺氏菌假单胞菌属和沙门氏菌属细菌，附着在管壁内部后，其分泌物将细菌包裹而形成的有组织结构的微生物群落。4饮水管线被细菌生物被膜污染的判定从养鸡场饮水管线进水端、饮水杯开口处、压力调节器取水样，参照GB/T5750.12测定水的菌落总数。若水中菌落总数超过100CFU/ml时，表明饮水管线存在生物被膜污染；若水中菌落总数低于100CFU/ml，表明饮水管线未存在生物被膜污染。5控制饮水管线被细菌生物被膜污染措施5.1饮水管线材质和安装要求选用的饮水管线管材质量都必须符合GB/T13663要求，管材内壁光滑；养鸡场安装饮水管线时，接口处不漏水。5.2水源水质要求参照NY5027检查方法检查水源水质，水的感官性状、一般化学指标、细菌学指标和毒理学指标均应符合NY5027要求。5.3预防细菌生物被膜污染饮水管线的方法5.3.1饮水管线清洗鸡出栏后和鸡舍补栏前，清洗饮水管线，其方法是采用反向高压冲洗饮水管线，冲洗前关闭水源出口，打开反洗阀门，然后打开进水口，借助高压水泵或利用水压力差，使水反向流动，冲洗时间为7-10分钟，水的色、浑浊度均应符合NY5027要求，停止冲洗。必要时拆解水线接口，先利用水线毛刷清洗水线，再采用反向高压冲洗饮水管线。5.3.2饮水管线消毒鸡出栏后和补栏前，先用过氧乙酸（1:1000）或二氯异氰尿酸钠（1:1000）浸泡饮水管线24h，同时观察水线是否漏水。用清水清洗，水的色、浑浊度、pH均应符合NY5027要求时，停止冲洗。5.3.3生物处理饮水管线内的细菌秋季、冬季和春季每隔15-20天，夏季每隔7-10天，先用水溶性异绿原酸盐处理水线，再用噬菌体处理饮水管线。DB13/Txxx—20245.3.3.1水溶性异绿原酸盐处理饮水管线利用饮水设备投喂药物方式向饮水管线中加入0.5mg/ml水溶性异绿原酸盐，浸泡处理时间为4h。5.3.3.2噬菌体处理饮水管线首先，从饮水管线中分离鉴定细菌：按照GB/T5750从养殖场饮水管道采集水样，分别按照4789.3、GB4789.4、GBGB4789.5离鉴定沙门氏菌、大肠杆菌和志贺氏菌；按传统细菌分离纯化方法和16srRNA鉴定铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌。其次，噬菌体的分离鉴定。按照GB/T5750从养殖场饮水管道采集水样，8000r/min离心15min，取上清液，弃沉淀，经0.22μm微孔滤器过滤，滤液备用。将鉴定的病原菌作为诱导菌，利用双层琼脂平板法培养噬菌体，挑选大小一致噬菌斑；再利用双层琼脂平板法纯化培养噬菌体。吸取噬菌体纯化液，加至电镜专用铜网上，用2%醋酸铀染色，干燥，通过透射电子显微镜观察噬菌体超微结构。再利用双层琼脂平板法对具有典型形态特征的噬菌体进行纯化。第三，噬菌体鸡尾酒制剂制备。将上述纯化后的大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌和志贺氏菌噬菌体按照1:1:1:1:1的比例，制备成噬菌体鸡尾酒制剂，噬菌体效价应不低于109PFU/ml。第四，用水溶性异绿原酸盐处理饮水管线4h后，再利用饮水投药方式向水线中加入噬菌体鸡尾酒制剂（效价均不低于0.75×105PFU/mL），噬菌体制剂处理饮水管线时间8h。5.4被细菌生物被膜污染的饮水管线处理方法处理被细菌生物被膜污染的饮水管线的时间通常选择在晚上，先反向高压冲洗饮水管线，再用消毒剂处理，最后利用生物制剂处理饮水管线。5.4.1冲洗饮水管线鸡舍熄灯后，打开水线末端的阀门,彻底排净饮水管线内的污水。采用反向高压冲洗饮水管线，操作方法是关闭水源出口，打开反洗阀门，再打开进水口，利用高压水泵或水压力差，使水反向流动，冲洗时间为7-10分钟，水的色、浑浊度均应符合NY5027要求，停止冲洗。必要时拆解水线接口，先利用水线毛刷清洗水线，再采用反向高压冲洗饮水管线。5.4.2饮水管线消毒冲洗饮水管线后，选用过氧乙酸（1:1000）或二氯异氰尿酸钠（1:1000）浸泡饮水管线6-8h，或者用4DB13/Txxx—2024100-200mg/L臭氧自动脉冲冲洗30分钟。天亮前，用不低于2倍的水线水量的清水冲洗水线，冲洗时间为7-10分钟，水的色、浑浊度均应符合NY5027要求，停止冲洗。5.4.