T-DALN 037-2024 青贮饲料有机酸含量的测定高效液相色谱法

IICS65.120CCSB40T/DALN037-2024Determinationoforganicacidcontentinsilage—High-performance2024-05-20发布1T/DALN037-2024本文件按GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规则起本文件由沈阳农业大学提出。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省奶业协会归口。本文件起草单位：辽宁省奶业协会、沈阳农业大学、辽宁奉牧联合奶业有限公司。本文件主要起草人：白春生、李晓明、赵波、徐环宇、佟艳、周丛。本文件首次发布。1T/DALN037-2024青贮饲料有机酸含量的测定高效液相色谱法本文件规定了青贮饲料中4种有机酸（乳酸、乙酸、丙酸和丁酸）含量的测定方法——高效液相色谱法。本文件适用于青贮饲料样品中4种有机酸（乳酸、乙酸、丙酸和丁酸）含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6435GB/T6682NY/T2129饲料中水分的测定分析实验室用水规格和试验方法饲草产品抽样技术规程3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理将青贮饲料样品加水匀浆制备为浸提液后，用离子交换色谱柱分离，利用高效液相色谱仪的紫外检测器在波长210nm处测定，相对保留时间定性，外标法定量。5试剂或材料如无特殊说明，水为符合GB/T6682规定的一级水。5.1浓硫酸（H2SO4），色谱纯。5.2乳酸标准品（CH3CHCOOH，CAS号：79-33-4），纯度≥98%。5.3乙酸标准品（CH3COOH，CAS号：64-19-7），纯度≥99%。5.4丙酸标准品（CH3CH2COOH，CAS号：79-09-4），纯度≥99%。5.5丁酸标准品（CH3CH2CH2COOH，CAS号：107-92-6），纯度≥99%。5.62.5mmol/L硫酸溶液：准确称取0.5152g浓硫酸（4.1），用水定容至2L容量瓶，混匀。5.7标准储备液：分别准确称取乳酸（4.2）0.1g、乙酸（4.3）0.1g、丙酸（4.4）0.05g、丁酸（4.5）2T/DALN037-20240.05g，精确至0.0001g，用水定容至10mL。储备液中乳酸、乙酸、丙酸和丁酸浓度分别为100mg/mL、100mg/mL、50mg/mL和50mg/mL。于4℃保存，保存期3个月。5.8标准系列工作液：准确吸取标准储备液（4.7）0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、3.00mL，用水定容于10mL。现配现用。5.9水系微孔滤膜：0.45μm。6仪器设备6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器。6.2电子天平：感量0.1g和0.1mg。6.3组织捣碎机。6.4电热鼓风干燥箱。7样品采集与浸提液制备7.1青贮饲料样品采集按照NY/T2129规定执行。7.2青贮饲料的干物质含量测定按照GB/T6435规定执行。7.3浸提液制备称取青贮饲料样品20g，精确至0.1g，加入180mL水，组织捣碎机匀浆1min，用4层纱布粗滤，之后经定性滤纸过滤得青贮饲料浸提液。浸提液经0.45μm微孔滤膜过滤后待测。8试验步骤8.1色谱参考条件8.1.1色谱柱：离子交换色谱柱，5μm，7.8mm×300mm（或相当型号色谱柱）。8.1.2流动相：2.5mmol/L硫酸溶液（4.6）。8.1.3流速：0.6mL/min。8.1.4柱温：55℃。8.1.5检测波长：210nm。8.1.6进样量：10μL。8.2标准曲线绘制3T/DALN037-2024将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准品液相色谱图参见附录A的图A.1。8.3样品测定将青贮饲料样品浸提液（见6.3）注入高效液相色谱仪中，得到相应的峰面积，根据标准曲线得到浸提液中各种有机酸的浓度。9结果的表述样品中的4种有机酸含量按式（1）计算：式中：X——样品中各组分的含量，单位为百分比（%）；c——由标准曲线得到样品浸提液中各组分的含量，单位为毫克每毫升（mg/mLV——制备浸提液时水的体积，单位为毫升（mL）；m——制备浸提液是的样品质量，单位为克（g）；d——青贮饲料的干物质含量，单位为百分比（%）。计算结果保