GB∕T 39104.1-2020 纺织品 抗真菌性能的测定 第1部分：荧光法

纺织品抗真菌性能的测定国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会I本部分为GB/T39104的第1部分。本部分按照GB/T1.1—2009给本部分使用重新起草法修改采用ISO13629-1:2012《纺织品抗真菌性能的测定第1部分：荧光本部分与ISO13629-1:2012相——将ISO13629-1:2012的8.5内的悬置段内——将ISO13629-1:2012第10章内的悬置段内容调整为10.1,其后条号顺延； ●增加引用了GB/T20944.2—2007(见第2章);———明确了ISO13629-1:2012的8.5.1 补充了14.3抗真菌效果评价：——将3.1的英文由“controlspecimen”修改为“controlfabric”,与国内外其他抗菌标准保持一致；——明确了7.5中生物安全柜的等级；——明确了7.20中血球计数板的计数单位为“CFU/mL”; 将8.4.2中腺嘌呤核苷-5'-三磷酸酯二钠盐三水合物的分子式调整为“C₀H₄N₅Na₉OaP。 明确了第10章、中孢子数量单位为“CFU/mL”:-—对10.7中的注进行了修改。ⅡⅢ基于以上因素，ISO/TC38/WG23在2007年制定了ISO20743,并继续开展纺织产本部分采用ATP荧光法作为抗真菌性能的定量分析方法。 GB/T39104的其他部分为： 第2部分：平皿计数法。1GB/T39104的本部分规定了通过检测酶反应[三磷酸腺苷(ATP)法]所产生的荧光强度测定纺织2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引GB/T20944.2—2007纺织品抗菌性能的评价第2部分：吸收法抗真菌整理antifungaltreatment2测定真菌细胞中ATP数量的方法。4原理将试样和对照样分别用试验真菌孢子悬液接种，试验用真菌菌株应从附录A的表A.1中选取。7.3干燥灭菌器：温度能保持在160℃~180℃。7.7L型铂接种钩。7.8培养箱：温度能保持在20℃~37℃,允差为±2℃。7.17试管振荡器。7.18离心机：离心加速度约为2000×g。37.23光度计：测试波长为300nm～650nm,在8.4和第11章规定的分析条件下能测定浓度为7.25冰箱：温度能保持在2℃~10℃。4纯水250mL(最终定容至)8.4.4ATP荧光剂在8.4和第11章规定的试验条件下，ATP荧光剂应能使光度计(7.23)检测浓度为1×10-⁸mol/L~荧光素酶D-荧光素牛血清白蛋白缓冲液(见8.4.3)一次完全溶解，在使用前置于室温中15min。制备后在3h内使用。8.4.5ATP萃取剂ATP萃取剂应具有从培养真菌中萃取细胞内的ATP的能力，萃取率不低于80%。N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸45mg苯扎氯铵，10%水溶液0.2mLpH(使用氢氧化钠调节pH)12.0±0.5如果在萃取液中使用除上述成分的其他试剂应在报告中记录。8.4.6ATP消除剂当在SDB(8.5.2)中加入其1/10体积的ATP消除剂时，应在15min内将培养基中的ATP浓度降低到10-¹¹mol/L以下。制备后在8h内使用。成分如下：三磷酸腺苷双磷酸酶(EC:)4.6IU/mL腺苷酸脱氨酶(EC:或7)46IU/mL蔗糖37mg牛血清白蛋白20mg0.05mol/L2-吗啉乙磺酸一水合物缓冲液10mL如果使用其他消除剂，应在报告中记录其成分。8.4.7生理盐水溶液将8.5g氯化钠加入盛有1000mL纯水的烧瓶中。使其完全溶解并根据蒸汽压力灭菌的需要分装到试管中。8.4.8含阴离子表面活性剂的无菌水将50mg阴离子表面活性剂溶解到纯水中，定容至1000mL,并根据高压蒸汽灭菌的需要分装到试管中。8.5培养基使用按8.5.2～8.5.5制备的培养基。经验证后可用商业培养基代替。5对于制备后不立即使用的培养基，宜在5℃~10℃条件中储存，保质期1个月。灭菌后pH8.5.3马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)将10mL完全溶解并预热后的PDA(8.5.3)倒入试管中。用棉塞封口并用蒸汽灭菌后pH1000mL(最终定容至) 将传代培养斜面培养基在25℃±2℃条件下的培养箱(7.8)中放置至少8d,并确认在5℃~10℃条件下保存前已经产生足够的孢子。——每3个月传代一次。传代培养的真菌菌落传代次数最多应不超过5次。不要使用超过3个月6图1斜面培养基传代培养示意图9.2真菌的使用为制备第10章中规定的孢子悬液中的真菌，将9.1中保藏的真菌转移到平板培养基上，在25℃±2℃条件下培养至少8d。当培养后的真菌不立即使用时，将其放置在5℃~10℃条件下保存并在7d内使用。10孢子悬液孢子悬液的制备和调节过程见图2。图2孢子悬液的调节步骤7——分5次将其分散到琼脂平板中心的孢子中，缓慢清洗表面(步骤2)。——用短巴斯德吸管(7.13)或类似装置吸取10.2中孢子悬液；-—吸吹100次或用试管振荡器搅拌或用低超声波清洗5min,以便孢子能充分分散；——过滤后，在25℃±2℃条件下以2000×g加速度离心分离5min,当离心机(7.18)无控温装-—加入5mL含阴离子表面活性剂的无菌水(8.4.8);散(步骤5)。a)孢子数量及形态：确保孢子数量为1×10⁶CFU/mL～3×10⁶CFU/mL,且90%以上为无菌丝b)当孢子数量较多时：用含阴离子表面活性剂的无菌水(8.4.8)稀释悬液，使孢子数量降至1×节孢子数量至1×10⁶CFU/mL～3×10⁶CFU/mL,再次检查孢子数量；d)对于12.1.3中的转移法，孢子数量应调节至1×10⁸CFU/mL～3×10⁸CFU/mL,该浓度的孢——用含5%SDB的阴离子表面活性剂溶液将孢子悬液浓度调至1×10⁵CFU/mL～3×10⁵CFU/mL8a)用纯水稀释8.4.2中的ATP标准储备溶液，以制备准确浓度分别为1×10-⁸mol/L、1×10-7mol/L和1×10-⁶mol/L的3个稀释度；h)将0.1mLATP萃——系数B通过式(1)在Y=0时，代入系数A并将空白样2荧光强度的均值代入X计算9照样和6个试样。c)如果为地毯或具有类似结构的样品，剪取样品上的起绒部分作为试b)将覆有铝箔的螺口玻璃瓶(7.d))将瓶盖和装有试样的螺口玻璃瓶(7.9)放入高压灭菌锅(7.4),于121℃(103kPa)灭菌立即按第13章规定测定试样的荧光强度。等。样品宜足够大(至少0.5m²)以满足重复性试验的需求。试样宜取自同一批且避开布边或起梗分别称量并记录每个试样和对照样的质量(mA)。制备6个对照样和6个试样，其中3个用于转移后立即使用，3个用于接种培养后。将每个试样放mp=mc一(mA+mg)按转移后，在25℃±2℃的湿度箱中培养42h±2h。荧光强度测定的准备过程如下(见图3):5——步骤10;图3荧光强度测定准备过程a)将0.1mLATP消除剂加入12.2.1制备的试样中，并加入4.7mL生理盐水(步骤6);b)盖紧瓶盖并混匀。手工摇晃30次或使用试管振荡器振荡5次，每次5s。在室温中静置20min(步骤7);c)加入5.0mLATP萃取剂(步骤8);d)盖紧瓶盖并混匀。手工摇晃30次或使用试管振荡器振荡5次，每次5s。在室温中静置10min(步骤9);e)摇匀，将0.2mLd)中制备的溶液分别转移到两个塑料试管中(步骤10);f)将0.1mLATP荧光剂分别加入到e)中制备的样液中，用试管振荡器搅拌5s,随后立即用光度计(7.23)测定荧光强度(步骤11);g)测定两个试样的荧光强度。具体过程如下：b)用吸管吸吹约30次使其混匀，倾斜培养皿以便于移液，在室温中静置20min;c)加入5.0mLATP萃取剂；d)用吸管吸吹约30次使其混匀，倾斜培养皿以便于移液，在室温中静置10min;注2:若试样漂浮在真菌悬液上，用玻璃棒按压使试样充分沉浸。e)通过吸吹的方式混匀，吸取0.2mLd)溶液分别转移到两个塑料试管中；g)测定两个试样的荧光强度。14.1试验有效性的判定a)根据式(2)计算对照样的增长值F;当所用对照样的真菌增长值小于1.5时，宜使用100%棉织物进行重复试验。Aa——抑菌值；lgC₀——3个对照样接种后立即测得的ATP量均值的对数；lgC,——3个对照样接种并培养42h±2h后的ATP量均值的对数；lgT₀——3个试样接种后立即测得的ATP量均值的对数；lgT,——3个试样样接种并培养42h±2h后的ATP量均值的对数。a)本部分的编号；h)式(2)中的增长值F;A.1总则表A.1真菌菌株由世界菌种保藏联合会(WFCC)成员提供。表A.1试验用真菌菌株菌株类型拉丁名菌株编号国内保藏号/getinfo.htm?sid=WDCM/getinfo.htm?sid=WDCM芽枝状枝孢菌/getinfo.htm?sid=WDCM须癣毛癣菌/getinfo.htm?注2:参考WDCM及其网址：http://refs.wdcm.erg/search.htm.(WDCM代表世注3:CICC为中国工业微生物菌种保藏管理中心的英文简称，其网址为：.(资料性附录)抗真菌效果表B.1给出了抗真菌效果的评价示例。表B.1抗真菌效果示例抗真菌效果说明中等抗真菌[1]GB/T8629纺织品试验用家庭洗涤和干燥程序[3]ISO846:1997Plastics—Evaluationoftheactionof[4]ISO3801:1977Textiles—Wovenfabrics—Determinationofmass[5]ISO7218:2007Micrguidanceformicrobio[6]ISO9022-11:1994Opticsandopticalinstru[7]ISO11721-1:2001Textiles—Determinationofresistanceofcellulose-containingtextilestomicroorganisms—Soilburialtest—Part1:Assess[8]ISO11721-2:2003Textiles—Determinationofresistanceofcellulose-containingtextilestomicroorganisms—Soilburialtest—Part2:Identificationoflong-termresistanceofaro[9]ISO16869:2008Plastics—Assessmentofd[12]AATCCTestMethod174:2007Ant[13]AS1157.2—1999Australianstandard—Methodsoftestingmateriafungalgrowth—Part2:[14]AS1157.3—1999Australianstandard—Methodsoftestingmafungalgrowth—Part3:Resi[15]AS1157.4—1999Australianstandard—Methodsoftestingmafungalgrowth—Part4:Resistanceoftextilestofungalgrowth.Section2—Resistance[16]ASTMDesignationG21-96:2002Standardpracticefo[18]BS6085:1992Methodsfo[19