SNT 1611-2013 南方菜豆花叶病毒血清学检测方法_第1页
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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准南方菜豆花叶病毒血清学检测方法I 1南方菜豆花叶病毒血清学检测方法本标准规定了植物检疫中南方菜豆花叶病毒基于血清学的DAS-ELISA、免疫电镜和免疫捕获RT-PCR等检测方法。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法3南方菜豆花叶病毒基本信息传播途径：病毒可能以循环型方式由叶甲传播。菜豆种传机率1%～5%,豇豆种传机率为5%~40%。实验中易于机械接种传播。该病毒的其他相关资料参见附录A。SBMV是直径约30nm的球状粒子，为有效的免疫源，可制备高效价的抗血清。在此基础上建立疫捕获RT-PCR验证方法。5仪器设备和主要试剂振荡器。234吐温20(Tween-20)吐温20(Tween-20)20mL溶于900mL的1×PBST中，用HO调节pH至7.4,定容至1000用1×PBST缓冲液定容至1000mL。5氢氧化钠(NaOH)120g溶于1000mL的无菌蒸馏水中，浓度3mol/L。B.7电泳缓冲液TAE(50×)三羟甲基氨基甲烷(Tris)242g冰乙酸52.1mL0.5mol/L乙二胺四乙酸钠(EDTA)100用时加蒸馏水稀释至1×TAE。6C.1.2每孔加入100pL的SBMV的C.2质量控制和结果判定OD₁——重复样品1;OD₂——重复样品2。样品ODos/阴性对照OD₁s值明显小于2,判SBMV-F1:5'-ACTTGTCTGAGGGCAAGTG-3’SBMV-R1:5'-GTGTCAGCCATATCATATTGG-3’Taq酶总体积—用

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