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出口食品过敏原成分检测第11部分：实时荧光PCR方法2013-03-01发布2013-09-16实施I 本部分为SN/T1961的第11部分。1出口食品过敏原成分检测第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分(Gliadin)、黑麦管家基因(Secl)、燕麦管家基因(Avenin)的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR2名称序列(5'-3’)目的基因内参照5’端引物内参照3’端引物内参照探针AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCFAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAA真核生物18SrRNA基因AACAGCTAAACCCATGCAAGFAM-TCCTCCAGCAGCAGTGCAGCCCT大麦Hordein基因小麦探针FAM-CATGCCGACACACATCAAGGTTGAC小麦Gliadin基因黑麦3'端引物黑麦探针AAAAGAACAATCATATCCGCAFAM-TCACACCAACCATTTCCCACACCGC黑麦Secl基因AGCCCTTGTAGTGTTCTTAGAFAM-CCCACCGCAGTGCCCTGTCGC燕麦Avenin基因10%盐酸调pH至8.0,121℃,高压灭菌20min,备用。5.1070%乙醇。36.4冰箱：2℃~8℃,-20℃。c=A₂6×N×50………………47.3.2实时荧光PCR反应参数50℃/2min,95℃/10min;45个循环为95℃/15s,58℃/1min。a)如Ct值≤35.0,则判定为被检样品阳性.扩增靶标序列参见附录A。c)如35.0<Ct值<40.0,则重复一次。如再次扩增后Ct值仍为<40.0,则判定被检样品阳性；检测过程中防止交叉污染的措施按照GB/T27403中的规定执行。5(资料性附录)过敏原麸质成分的基因扩增靶标参考序列A.1过敏原大麦成分hordein基因扩增靶标参考序列(150bp)

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