出口禽蛋及蛋制品中氟虫腈残留量的测定 液相色谱-质谱法

出口蛋及蛋制品中氟虫腈及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法本标准规定了出口蛋及蛋制品中氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚和氟甲腈的液相色谱-质谱/质谐测定方法本标准适用于鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋等鲜禽蛋，全蛋液、蛋白液、蛋黄液等液蛋制品，全蛋粉、蛋黄粉、蛋白粉等干蛋制品，冰全蛋、冰蛋黄、冰蛋白等冰蛋制品，皮蛋、咸蛋、咸蛋黄、糟蛋、卤蛋等再制蛋中氟虫腈、氯虫腈砜、氟虫硝硫醚和氟甲腈的定性定量测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。几是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件。其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法试样经乙腈提取，中性氧化铝固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定和确证，外标法定量。所有试剂除特殊注明外向为分析纯，水为GBA6682规定的二级水。4.3无水硫酸镁：经650℃烧灼4h,在干燥器内冷却至室温后储于密封容器中备用4.4乙酸铵：色谱纯4.5乙酸铵溶液(5mmol/L):称取0.385g乙酸铵于14水中，混匀。4.6乙腈-乙酸铵溶液(4+6,VN):取40mL乙腈，加人60mL5mmolL.乙酸铵溶液中，混匀。4.7氟虫腈(CAS号：120068-37-3,分子式：C₂H₁C,FN05)标准品：纯度大于等于98.0%。4.8氛虫腈砜(CAS号：120068-36-2,分子式：C₂H₄Cl₂FNO.S)标准品；纯度大于等于98.0%。4.9氟虫腈硫醚(CAS号：120067-83-6,化学式：C₂H₄CI,FN,S)标准品：纯度大于等于98.0%。4.10氟甲腈(CAS号：205650-65-3,化学式：C₂H₂CI,FN.)标准品：纯度大于等于98.0%。4.11空白样品提取液：用不含氟虫腈、氟虫腈砜、氮虫腈硫醚、氯甲腈残留的样品，按照7.1、7.2制备空白样品提取液。4.12标准储备液：分别精确称取每种适量标准物质，用乙腈配制成1000mg/L的标准储备液，-18℃冰箱内避光保存，有效期为6个月。4.13基质混合标准工作溶液：分别准确移取一定体积的每种标准储备液，根据需要用样品提取液稀释成适用浓度的基质标准工作溶液，现用现配4.15固相萃取小柱：中性氧化铝，500mg,6ml,或相当者；使用前用5mL乙腈活化。5.1高效液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源(ESI)。5.2分析天平：感量分别为0.0001g和0.01g。5.3离心机：8000r/min。5.4超声波振荡器。5.6氮吹仪(或旋转蒸发仪)。6试样制备与保存6.1.1鲜蛋、液蛋制品、冰蛋制品取代表性样品约500g,去壳，将蛋液搅匀，装人洁净容器，密封并标明标记。取代表性样品约500g,去壳，切碎或经粉碎机粉碎，混匀，装入洁净容器，密封并标明标记。6.2试样的保存制备好的试样可于-18℃冰箱内保存，在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化7.1.1鲜蛋、液蛋制品、冰蛋制品称取样品5g(精确至0.01g)至50mL离心管中，加入10mL乙腈(4.1),涡旋1min,超声波提取20min,分别加人3g无水硫酸镁(4.3)和0.5g氯化的(4.2),振荡、涡旋2min,8000r/min离心10min,取上清液2mL,待净化。称取样品5g(精确至0.01g)至50mL离心管中，加人10mL水，涡旋)min,再加人10mL乙腈(4.1)。涡旋1min.超声波提取20min,分别加入3g无水硫酸镁(4.3)和0.5g氯化钠(4.2),振荡、涡旋2min,8000r/nin离心10min,取上清液2mL,待净化。称取样品25g(精确至0.01g)至50mL离心管中，加入10mL水，涡旋1min,再加入10mL乙腈(4.1)。涡旋1min,超声波提取20min,分别加入3g无水硫酸镁(4.3)和0.5g氯化钠(4.2),振荡、涡旋2min,8000r/min离心10min,取上清液2mL,待净化。将2mL待净化样液注人活化好的中性氧化铝小柱，控制流速不超过2ml/min,以10mL玻璃试管收集流出液，再以4mL乙腈(4.1)洗脱小柱，收集全部流出液，于40℃下氮吹至近干，残渣以乙腈-乙酸铵溶液(4.6)复溶，定容至1mL。涡旋304,过0.2μm微孔滤膜，待LC-MSMS分析。将2mL待净化样液注入活化好的中性氧化铝小柱，控制流速不超过2ml/min,以10mL玻璃试管收集流出液，再以4mL.乙腈(4.1)洗脱小柱，收集全部流出液，于40℃下氮吹至近干，残渣以乙腈-乙酸铵溶液(4.6)复溶，定容至0.5mL,涡旋30s,过0.2μm微孔滤膜，待LC-MSMS分析a)色谱柱：C.柱，100mm×2.1mm,19μm或相当者；b)流动相：A为乙酸铍溶液(5mmol/L),B为乙腈，梯度洗脱。洗脱程序见表1;e)流速：0.3mL/mind)柱温：30℃;e)进样量：10mL。A055a)离子化模式：电喷雾离子源(ESI),负离子模式：b)质谱扫描模式：多反应监测(MRM);c)其他参考质谱条件参见附录A。7.3.3液相色谱-质谱/质谱测定按照上述条件测定样品和基质混合标准工作溶液，如果待测物质的色谱峰保留时间与基质标准添加水平/(pgkg)0参考质谱条件：a)干燥气温度：200℃;b)干燥气流速：15Lmin;d)鞘气温度：325℃;e)鞘气流速：11L/min;f)毛细管电压：-3500V;g)喷嘴电压：-500V;h)其他质谱参数见表A.1。表A.1多反应监测条件子离子/(mz)55001)非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在安捷伦6495型液质喉用仅上完成的，此处列出试验用(资料性附录)氟虫腈及其代谢物标准品多反应监测(MRM)色谱图鸡蛋中氟虫腈、氮虫腈砜、氟虫腈硫醚和氟甲腈标准品多反应监测(MRM)色谱见图B.1。图B.1鸡蛋中氟虫睛、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚和氟甲睛标准品多反应监测(MFM)色谱图(1.0ng/mL)Determinationoffipronilanditsmetaboliteresidu4.8Standardsoffiponilsulfone(CASNo:120068-36-2.molecularfonmulacC₂H₂CL₂FN,O.S)Purty4.9Standanlsofpmilalfide(CASNoc120067-83-6,modlecaularfomola:C₀HCI4.10Sandanlsofpronildesalfinyl.(CASNoc205650-65-3,moleanlarfommleC₂HC₁FN):Purnty≥=98.0%.4.11Blankmatrixextrictsolution:Extractthetestsampleswhichtherearenofipronilsulbdeandfipmnildesulfinylresiduesaccondingtothe7.14.12Standardstocksolution:Weighaccuratelyappropriateamountofeachstandard,tofinalconcentrationof1000mg/Lrespectively,thesolut4.13Matrixmisstandanlworkingsolution:Accordingtotherequirement,neasureacuratelyavolumeofeachstandandstocksolution,anddilutewithmatrixextractsolationtoconcentrationmatrixstandandworkingsolution.Thesessolutionsshouldb4.14Micmponefilm:0.2μm,org4.15Alumina-NSPEcartridge:500mg.6mLoreuivalent.Itshouldh5.1Liquidchomatography-landemmassspectomety,equippedwibhelectriosprayi5.2Aalyticalbalance,accuracy:0.0001gand5.4Uhtrasonieappa5.6Nitmgnevaporator(orRotarywacimmeuporator)6.1Preparationoftest6.1.1Fresheggs,liquideg9productsandfrozenegAbout500grpresemtativesanplesbooldbetakenfomallsamples.Discardeggshellsandpoducehomngeneoussamples,whichareplaradinrleancontainers,thensealedandlabel6.1.2driedeggproductsAbout500grepresentativesamplesshouldhetakportionsaremincedorcnshedbyatisaoehomogenizer.ThenplaciThepreparedsamplesshouldhestorsdinanfrigeratorat-18℃.Wpleaseavoideontaminationoranyfactorsthatmaychangeresidue7.1.1Fresheggs,iquideggWeight5g(accurateto0.01g)ofthetestsampleintoa50mLcentrifuge(4.1),vortesfor1minfollowedbyanultrasonicestrationfor20min.Ad(4.3)and0.5gsodiumchloride(4.2)respeetively,shakeandvortesforat8000rhmin.Take2mLsupematantlayerforWeight5g(accurateto0.01g)ofthetestsampleintoa50mLcentrifugtubefor1min,ad10mLacelonitrle(4.1)andvortesfor1mi3ganhydousmagnesiumsaulfate(4.3)and0.5gsodiumchloride(4.2)rspectively,shakeandminandthencentrifugefor10minatWeight25g(accurateto0.01g)ofthetestsampleinatoa50mLentrifugehabe,forImin,add10mLacetoitrle(4.1)andwortesforIminflloealbyanultraanhydousmagnesiumsulfate(4.3)and0.5gsodumchlbride(4.2)respotively,shakethencentrifugefor10minat8000pmin.Take2mLsupnutn7.2.1Fresheggs,liquideggpLoad2mLoftheabonesolutionintotheactivatslAlunina-Neartridgewithlownomoandcollecttheclatesintoa10mLdlasstube.Elutetheelates,whichisevaporntellonenbdonesundernitmoprnat40acetonitrile-ammomimmetayaimo(4.6),vantesfor30s.Atierbeingfiltratadwith0.2Load2mLoftheabovesolutionintotheaictivatrdXumina-Ncartndgewithandeollettheelutesintoa10mLglasnobe.Eutetheelotes,whichisevaporatedtonealydynessundernitrogenat40℃Theresiduesacrtonitrile-ammoniumacctatesolution(4.6),vo