2,4-二氯苯氧乙酸纯度标准物质定值方法及不确定度评估

背景介绍2,4-二氯苯氧乙酸是无味的白色至棕褐色固体，可溶于大多数有机溶剂，不吸湿，具有一定的腐蚀性。目前，2,4-二氯苯氧乙酸主要应用在除草剂、植物生长调节剂和水果保鲜剂方面。随着2,4-二氯苯氧乙酸广泛应用，其残留量、检测方法以及毒性危害引起相关部门重视并开展相应研究。2,4-二氯苯氧乙酸对人体神经系统、免疫系统及精子数量造成影响，可能诱发癌症。因此，GB2763-2021中明确规定了2,4-二氯苯氧乙酸的最大限量值。尽管如此，2,4-二氯苯氧乙酸因其有效性和低成本仍被应用于农产品，为保障农产品重量安全对2,4-二氯苯氧乙酸的溯源、检测迫在眉睫。本文采用质量平衡法和定量核磁法两种不同原理定值方法研制具有准确纯度及不确定度水平的2,4-二氯苯氧乙酸一级纯度标准物质。详细描述了不确定度评估过程，提供了两种定值方法中可优化的方向。明确了质量平衡法和定量核磁法在方法优化中可考虑的参数。

文章亮点01.研制2,4-二氯苯氧乙酸纯度标准物质。采用质量平衡法和氢谱定量核磁法对2,4-二氯苯氧乙酸纯度标准物质候选物进行纯度定值；02.2,4-二氯苯氧乙酸纯度标准物质的纯度值为99.6%，符合国家有证标准物质条件并获得国家一级标准物质认定，编号为GBW09291；03.此纯度标准物质为监测食品中2,4-二氯苯氧乙酸提供溯源性、可比性，填补了国内2,4-二氯苯氧乙酸一级纯度有证标准物质空白，为2,4-二氯苯氧乙酸药物相关检测提供了量值溯源与传递的基础，保障了检测结果的可靠性、可比性及溯源性。内容介绍1实验部分1.1

主要仪器与试剂1.2

实验方法1.2.1

定值方法1.2.1.1

质量平衡法定值1.2.1.2

定量核磁共振法定值随机抽取7个分装样品，进行定量核磁共振法定值。采用国家一级标准物质苯甲酸作为内标物，将6mg2,4-二氯苯氧乙酸标准物质、3mg苯甲酸内标物溶于氘代二甲基亚砜，振荡至完全溶解后置于0.8mL核磁试管（d=5mm）中待测。1.2.2

均匀性检验随机抽取15个2,4-二氯苯氧乙酸标准物质进行均匀性检验。每个包装单位称取3个子样品，称样量为3mg，配置成浓度为1000mg/L的甲醇溶液，对其进行编号，每个单元进行3次平行测定。均匀性实验结果采用单因素方差分析法（ANOVA）和F检验进行统计检验。1.2.3

稳定性考察长期稳定性考察是通过依次对0、1、3、6、12个月样品进行稳定性检测，每次实验随机抽取2个样品，每个样品进行3次平行实验，采用重量-容量法配制成1000mg/L的溶液。2结果与讨论2.1

定值测量本研究将购买的2,4-二氯苯氧乙酸纯品经过红外光谱法、高分辨质谱法以及核磁氢谱定性分析后分装于4mL棕色玻璃瓶，每瓶为100mg，共200个包装单元，作为纯度标准物质候选物，置于-20

℃冷冻避光保存。2.1.1

质量平衡法定值基于查阅相关文献，选用AgilentPlusC18柱做为本实验色谱柱，流动相选用磷酸甲醇混合溶液。为确保杂质的充分响应，本实验分别配制了100、500、1000mg/L浓度的甲醇中2,4-二氯苯氧乙酸，结果如图1所示。2.1.2

定量核磁共振法定值根据标准物质技术规范要求，同一家实验室应采用不少于2种的不同原理定值方法定值。因此，本文开展了2,4-二氯苯氧乙酸定量核磁定值研究。选择内标物时应考虑其结构的稳定性，在氘代试剂中的溶解度以及是否与目标物反应，因此对选取苯甲酸做为内标物，结果如图3所示。2.1.2.1

定量峰的选择2.1.2.2

脉冲驰豫延迟时间的选择为了保证定量峰的原子核能够达到99.9%以上的弛豫，必须使D1/T1≥7。本实验通过优化D1/T1的比值，以达到定量核磁的要求。2.1.2.3

定量核磁法定值结果随机抽取7个2,4-二氯苯氧乙酸标准物质候选物进行平行测定，结果见表2。由定量核磁法测定的2,4-二氯苯氧乙酸纯度标准物质的纯度值为99.65%。2.2

2,4-二氯苯氧乙酸纯度定值2.3

均匀性检验均匀性检验采用高效液相色谱峰面积归一法，本实验按照封装时间的前、中、后顺序随机抽取15个2,4-二氯苯氧乙酸标准物质进行均匀性检验，结果如图4所示。2.4

稳定性考察按照JJF1343-2012，本研究中长期稳定性评估采用的是经典稳定性评估方案，短期稳定性评估采用的是同步稳定性评估方案。短期稳定性结果如图5a所示，通过t检验观察斜率β1的显着性来评估短期稳定性。2.5

不确定度评定基于前期研究报道的不确定度评估与计算方法[34]，系统分析评估2,4-二氯苯氧乙酸纯度标准物质在研制过程确定度，评估方法及结果如表3所示。3结论本研究建立了质量平衡法和定量核磁法2种不同原理的方法用于2,4-二氯苯氧乙酸纯度标准物质定值，以上方法的精密度和准确度达到纯度标准物质的研制需求。本研究详细描述了不确定度评估过程，提供了两种定值方法中可优化的方向。明确了质量平衡法和定量核磁法在方