微生物分离纯化课件

微生物的分离纯化任务描述任务要求2、能说出微生物分离和纯化的基本原理；3、能说出分离纯化的主要方法技术；4、能对微生物进行分离纯化，具备良好的无菌观念；5、具备一定服务意识、具有接受和执行上级主管布置工作任务的积极态度。任务准备——知识准备为了完成任务，获取所需的相关知识，需完成的思考题：4、什么是稀释倒平板法？微生物的分离、纯化技术相关知识微生物的分离、纯化技术在自然界中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起的，为了生产和科学研究的需要，须从混杂的微生物中分离得到某一种微生物，这种获得纯培养物的方法称为微生物的分离与纯(-)平板划线分离法••••第一区划线I灭菌接种环第二区划线（一）平板划线分离法--注意事项第一区划线I灭菌接种环第二区划线划线时接种环与平皿约成划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂。划线要密而不重复，充分利用平板的表面，划线应占满平皿。每次划完后应灭菌。灭菌接种环第三区划线I灭菌接种环分区交叉划线法连续划线法适用于含菌量较少的标本适用于含菌量较多的标本适用于含菌量较少的标本平板划线方式：划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线,第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区)是逐级稀释的过渡区，第四区(D区)，则是关键区，使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积的分配应是D>C>B>A。https://b23.tv/tg5ogBB划线操作：挑单菌落挑取单个菌落，转移至液体培养基中增菌，重（二）稀释倒平板法挑单菌落挑取单个菌落，转移至液体培养基中增菌，重样品材料稀释，倾入平板，在浓度比较低的平板上可得到单菌落。梯度稀释吸取稀释液1ml，放入培养皿中，然后倒入15-20ml已融化并且冷却至50℃左右的培养基，倒混菌平板加盖后轻轻摇动培养皿，使均匀分布，待凝固后即成平板。倒混菌平板将平板倒置恒温箱中培养保温培养24～48小时，检查分离结保温培养复以上操作数次，便可复以上操作数次，便可得到纯培养。倒平板技术倒平板技术（二）稀释倒平板法l盐水各各各1ml1ml1ml1ml1ml释样品材料系列稀1ml9ml生理盐水将一定量（0.1或0.2mL）的某1ml1ml1ml1ml1ml释样品材料系列稀1ml9ml生理盐水将一定量（0.1或0.2mL）的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面将平板倒置恒温箱中培养24～48小时，检查分离结挑取单个菌落，转移至液体培养基中增菌，重复以上操作数次，便可得到纯培养。梯度稀释涂布菌液保温培养挑单菌落移液器放液卸去吸嘴1.连接恰当的吸嘴；排空枪头中的空气2.按住控制钮至第一停点；3.将移液器吸嘴垂直进入液面下1-6mm（视移液器容量大小而定）；4.松开控制钮，使控制钮缓慢滑回原位；5.移液器移出液面前略等待1-3秒；将液体吸入到移液管中6.缓慢取出吸嘴，确保吸嘴外壁无液体。将液体吸入到移液管中4.按压弹射键弹射出吸嘴。1、采取剁吸液头的方法来进行安装吸液头。2、直接按到第二停点吸液。3、吸液时，移液器本身倾斜，导致移液不准确。4、吸液或排液时速度太快。5、排液时未按到第二停点，吸液头中有残液。6、平放带有残余液体吸液头的移液器(应将移液器挂在移液器架上)。7、用大量程的移液器移取小体积样品(应该选择合适量程范围的移液器)。8、使用强腐蚀性的液体清洗移液器。1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管答1）、（2）需要灭菌3）需要消毒。才才4.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。6.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。7、涂布平板的所有操作都应在火焰附例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧IlI8.为什么在操作的第一步以及每次划线之前要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结束后灼烧