生物碱类成分分析2

生物碱类成分分析熟悉生物碱类成分结构特征及理化性质※掌握生物碱类制剂定性鉴别常用方法※掌握生物碱类制剂定量分析常用方法§概述定义：生物碱是生物界除生物体必须的含氮化合物（如氨基酸、蛋白质和B族微生素等）之外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性。

绝大多数具有显著的生理活性中药材中生物碱多以有机酸盐的状态存在§结构特征及理化性质结构特征：大多含有C、H、O、N理化性质：物理性状：结晶性固体；液体、小分子固体（挥发性、升华性），多无色

溶解性：多样化

沉淀反应：生物碱沉淀试剂，定性（蛋白质、多肽、鞣质，避免假阳性）显色反应：用于纯品，少用于制剂中生物碱分析碱性：多呈碱性，碱性强成盐，弱游离，供试品制备及分析方法建立及条件

选择的依据紫外光谱：共轭体系，紫外吸收§定性鉴别一般理化鉴别沉淀反应：酸性条件下或酸性稀醇下，生物碱能与一些试剂生成沉淀。（注意多肽，鞣质，蛋白质等假阳性）色谱鉴别TLC—吸附剂：硅胶，氧化铝（不能用酸性）展开剂：氯仿，苯等及一些相应极性的调节剂显色剂：改良的碘化铋钾，碘蒸汽等

此外还可用某些生物碱的特殊颜色反应，如麻黄碱与印三酮

PC—正相色谱，BAW系统展开剂，固定相为滤纸中的水，不能用含硫酸的做显色剂。在碱性系统或碱性环境下展开注意

HPLC—高效液相色谱法对结构十分相似的生物碱有很好的分离效果，在恒定的高效液相色谱条件下，各生物碱有一定的保留时间，可作为定性鉴别的参数。

优点：快速，灵敏，微量等§总生物碱含量测定化学分析法：样品供试品溶液中总生物碱成分纯度较高，常用与处方药味较少，内含成分较简单的中药制剂。分光光度法：多用单波长光度法，要求干扰成分在测定波长基本无吸收。样品分离、净化（化学法、柱色谱法、TLC、PC法等）

化学分析法酸碱滴定法（主要使用）

（1）游离生物碱：多不溶于水，可先将生物碱溶于过量标准酸溶液中,再用标准碱溶液回滴；

（2）生物碱盐:在水或乙醇介质中，用强酸溶液滴定。一般使其溶于90％乙醇溶液中，可用标准酸乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。

酸碱滴定法测定中药制剂中生物碱的含量，因中药复方制剂中成分复杂，样品溶液需进行净化处理。（氧化铝）注意按操作方法分类（1）（2）操作方法将生物碱从中药制剂中提取，用适宜的方法使其生成沉淀，干燥后直接称重。加入某些试剂，使生物碱生成不溶性盐沉淀，称量沉淀，计算生物碱含量。优点计算简便，不用换算因数，也不必考虑生物碱的分子量。取样量少，灵敏度高缺点①挥发性生物碱②蒸发提取溶剂或加热、干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离时可发生水解的不宜使用③取样量大、操作时易乳化、费时。计算方法复杂，繁琐，影响因素较多，干扰多（沉淀试剂、PH、T、以及与试剂生成沉淀的非生物碱成分）表一两种重量分析法异同比较表

分光光度法直接测定法：

不经化学反应，利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色测定的方法。

适用：一般用于药味较少，内含成分简单，干扰不大的中药制剂中总生物碱的含量测定。（戊己丸、驻车丸）

戊己丸和驻车丸

分光光度法离子对萃取比色法：在一定的PH介质中，有机碱与一些酸性染料或磺酸类、酸类的阴离子，定量结合为有色离子对，定量地溶于某些有机溶剂中，然后在一定波长下，测定有机溶剂或经碱化后释放出来的染料的吸收度，按分光光度法计算含量。

适用：中药制剂中微量生物碱成分的含量测定。

分光光度法离子对萃取比色法：酸性染料比色法：

B+H+BH+HInH++In-

BH++In-BH+In-本法测定的关键在于：介质的pH值，酸性染料的性质，有机溶剂的性质。

分光光度法离子对萃取比色法：雷氏铵盐比色法：

BH++[Cr(NH3)2(SCN)]2[Cr(NH3)2(SCN)]2

将沉淀分离，溶于丙酮，于520～526nm波长处比色测定吸收度，换算生物碱的含量。

分光光度法离子对萃取比色法：异羟污酸铁比色法：含有酸酯键结构的生物碱，在介质中加热，酯键水解，产生羧基与羟胺生成异羟污酸，与Fe3+JDS生成紫红色配合物，在一定浓度下符合Beer定律，比色法进行含量测定。

供试品溶液中必须不存在其他酯类成分

注意！§单体生物碱的含量测定TLC：简便、快速

样品需纯化，吸附剂、展开剂及显色与鉴别相似，要求更严格HPLC:适用于单体生物碱成分的含量测定

液—液分配色谱，液—固分配色谱，离子交换色谱GC：只适用于有挥发性，遇热不分解的生物碱类。如麻黄碱、槟榔碱、苦参碱、颠茄类生物碱等（！！生物碱盐在急速加热器中产生的酸对色谱柱和检测器不利）HPLC色谱柱中的硅醇基酸性较大，使保留时间延长，峰行变宽，拖尾。改进流动相：

①加入硅醇基抑制剂，竞争或部分阻断硅醇剂的影响，最常用硅醇基抑制剂是二乙胺、三乙胺（TEA)等。

②合适的pH下，加入低浓度离子对试剂，通过与生物碱类成分生成离子对而掩蔽其碱性基团。常用离子对试剂：辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠。注意：清洗柱子，避免过夜，保证色谱柱的寿命。③加入季铵盐试剂，掩蔽固定相表面的硅醇基，如在水－甲醇中加入0.01mol/L的溴化四甲基胺。

④加入电解质缓冲盐，通过改变流动相离子强度，稳定pH值及促进离子对相互作用，起到改善峰形及分离效果的作用。改进固定相：封尾技术，即键合反应结束后，用三甲