第5章 动物细胞制药课件

第四节动物细胞的培养

条件和培养基细胞体外培养基本条件:①无菌②营养充足,防止有害物质③氧气第5章动物细胞制药2④随时清除代谢有害物质⑤良好的生存外环境⑥及时分种第5章动物细胞制药2一、动物细胞的培养条件⒈器材的清洗和消毒⑴器材的清洗浸泡、刷洗、泡酸、冲洗⑵器材的消毒灭菌物理消毒化学消毒第5章动物细胞制药2第5章动物细胞制药2第5章动物细胞制药2⒉水质:电阻值大于18MΩ,

去热原。⒊pH:7.2～7.4⒋渗透压:290～300mOsm/kg⒌温度:37±0.5C⒍空气:氧的饱和质60%,氧分压

4～0.7kPa第5章动物细胞制药2第5章动物细胞制药2二、动物细胞的培养

基的种类和组成分3类:⒈天然培养基⒉合成培养基⒊无血清培养基第5章动物细胞制药2⒈天然培养基

血清、羊水、腹水等,成分复杂、成分不稳定⒉合成培养基

DME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640第5章动物细胞制药2⑴氨基酸⑵维生素⑶糖类⑷无机盐⑸其它成分添加小牛血清：第5章动物细胞制药2添加小牛血清的作用⑴提供生长因子和激素⑵提供贴附因子和伸展因子⑶提供结合蛋白⑷提供必需脂肪酸和微量元素第5章动物细胞制药2⒊无血清培养基①提高重复性②减少微生物污染③供应充足稳定④产品易纯化⑤避免血清因素对细胞的毒性⑥减少血清中蛋白对生物测定的干扰第5章动物细胞制药2无血清培养基加入添加剂⑴生长因子和激素⑵结合蛋白⑶贴附因子和伸展因子⑷有利细胞生长的因子和元素第5章动物细胞制药2第五节动物细胞培养方

法和操作方式一、动物细胞大规模培养的方法依细胞种类:

原代培养、传代培养依培养基:

液体培养、固体培养第5章动物细胞制药2

依培养器和方式:

静止培养、旋转培养、搅拌培养、微载体培养、中空纤维培养、固定床或流化床培养第5章动物细胞制药2

从生产实际分为:

悬浮培养贴壁培养贴壁-悬浮培养第5章动物细胞制药2⒈悬浮培养让细胞自由的悬浮于培养基内生长繁殖。⒉贴壁培养让细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培养方法。⒊贴壁-悬浮培养第5章动物细胞制药2⒊贴壁-悬浮培养⑴微载体培养⑵包埋和微囊培养⑶结团培养第5章动物细胞制药2二、动物细胞培养的操作

方式⒈分批式操作⒉半连续式操作⒊灌流式操作第5章动物细胞制药2第六节动物细胞生物反应

器及其检测控制系统一、动物细胞生物反应器的类型及其基本结构⒈搅拌式生物反应器⒉气升式生物反应器⒊中空纤维式生物反应器⒋透析袋或膜式生物反应器⒌固定床或流化床式生物反应器第5章动物细胞制药2⒈搅拌式生物反应器第5章动物细胞制药2⒉气升式生物反应器第5章动物细胞制药2⒊中空纤维式生物反应器第5章动物细胞制药2平床式中空纤维式生物反应器第5章动物细胞制药2⒋透析袋或膜式生物反应器第5章动物细胞制药2⒌固定床或流化床式生物反应器第5章动物细胞制药2CellGenplus生物反应器第5章动物细胞制药2二、动物细胞生物反应器的

检测控制系统⒈培养过程需检测的物化参数直接在线检出取样离线检测检测后计算⒉主要参数的检测和控制方法第5章动物细胞制药2⒉主要参数的检测和控制方法⑴温度⑵pH①在培养初期，控制进氧量②当细胞密度提高后控制

NaHCO3的量第5章动物细胞制药2⑶溶氧⑷搅拌⑸进出液流量⑹其它第5章动物细胞制药2第七节动物细胞制药的前

景与展望一、提高产量降低成本和改进质量方面的研究二、转基因动物的研究三、组织工程的研究第5章动物细胞制药2一、提高产量、降低成本和改

进质量方面的研究

为了提高产量,要提高细胞表达水平。为降低成本，须改进培养基配方。为改进产品质量，关键是糖基化质量。改进工艺，生产设备等第5章动物细胞制药2二、转基因动物的研究

自1982年Palimiter提出用转基因动物来生产药用蛋白以来，发展迅速。优点：产量高成本低质量与天然一样。现还有不成熟之处。对动物和人的健康的影响。第5章动物细胞制药2三、组织工程的研究

组织工程：通过对大量细胞的培