医疗保健产品灭菌 第7部分：生物指示物选择、使用和结果判断指南

ICS11.080.01

CCSC47

中华人民共和国国家标准

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

代替GB/T19972—2018

医疗保健产品灭菌生物指示物第7部分：

选择、使用和结果判断指南

Sterilizationofhealthcareproducts—Biologicalindicators—Part7:Guidancefor

theselection,useandinterpretationofresults

（ISO11138-7:2019，IDT）

(征求意见稿)

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

国家市场监督管理总局

发布

国家标准化管理委员会

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

目  次

前  言.............................................................................IV

引  言..............................................................................V

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3术语和定义.........................................................................1

4总则...............................................................................4

5生物指示物特性.....................................................................6

5.1概述...........................................................................6

5.2产品直接染菌用的试验微生物悬液.................................................6

5.3染菌载体.......................................................................7

5.4自含式生物指示物...............................................................7

6供方的选择.........................................................................7

6.1概述...........................................................................7

6.2文件............................................................................8

7过程开发中的生物指示物..............................................................9

7.1概述............................................................................9

7.2过度杀灭处理...................................................................10

7.3生物指示物和生物负载组合法.....................................................10

7.4生物负载法.....................................................................11

8灭菌确认的生物指示物...............................................................11

8.1概述...........................................................................11

8.2生物指示物的放置和处理.........................................................11

8.3灭菌器鉴定.....................................................................12

8.4性能鉴定.......................................................................12

8.5确认的审核和批准...............................................................12

8.6再次鉴定.......................................................................12

9常规监测中的生物指示物.............................................................12

9.1概述...........................................................................12

9.2生物指示物的放置和处理.........................................................13

9.3过程挑战装置（PCD）............................................................13

10结果判断和接受标准................................................................13

10.1概述..........................................................................13

10.2结果判断......................................................................14

I

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

11生物指示物标准的应用..............................................................14

11.1使用者对生物指示物性能的一般评价..............................................14

11.2试验微生物标称总数............................................................14

11.3抗力测定......................................................................15

11.4z值的测定.....................................................................17

11.5F（T，z）等效灭菌值的测定.........................................................19

11.6建立芽孢对数减少（SLR）.......................................................19

11.7无菌保证水平（SAL）的计算.....................................................20

11.8测试设备.....................................................................20

12培养条件.........................................................................20

12.1概述.........................................................................20

12.2培养温度.....................................................................21

12.3培养时间.....................................................................21

12.4生长培养基的选择.............................................................21

13对第三方的要求...................................................................22

13.1概述.........................................................................22

13.2对重复样本和生物指示物总数的最低要求.........................................22

13.3测试设备.....................................................................22

14人员培训.........................................................................23

15贮存和搬运.......................................................................23

16生物指示物的处理.................................................................23

附录A（资料性）微生物灭活动力学和计数方法.........................................24

附录B（资料性）过程挑战装置.......................................................28

附录C（资料性）部分阴性法测定D值.................................................29

附录D（资料性）使用者准备的生物指示物的文字记录示例...............................45

附录E（资料性）z值的计算.........................................................49

附录F（资料性）存活曲线方法测量D值..............................................52

附录G（资料性）存活与杀灭反应特性.................................................56

参 考 文 献.......................................................................57

II

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

引  言

GB/T18281《医疗保健产品灭菌生物指示物》是有关生物指示物的通用性和专用性标准。GB/T18281

旨在提供生物指示物的要求、选择和使用指南和缩短培养时间的方法，拟由八个部分构成：

——第1部分：通则。目的在于提供生物指示物的通用要求。

——第2部分：环氧乙烷灭菌用生物指示物。目的在于提供环氧乙烷灭菌用生物指示物的专用要求。

——第3部分：湿热灭菌用生物指示物。目的在于提供湿热灭菌灭菌用生物指示物的专用要求。

——第4部分：干热灭菌用生物指示物。目的在于提供干热灭菌用生物指示物的专用要求。

——第5部分：低温蒸汽甲醛灭菌用生物指示物。目的在于提供低温蒸汽甲醛灭菌用生物指示物的

专用要求。

——第6部分：过氧化氢灭菌过程用生物指示物。目的在于提供过氧化氢灭菌用生物指示物的专用

要求。

——第7部分：选择、使用和结果判断指南。目的在于提供生物指示物的正确选择和使用的指南。

——第8部分：缩短生物指示物培养时间的确认方法。目的在于提供缩短生物指示物培养时间的确

认方法。

应用于灭菌过程的开发、确认和监测时，本文件对生物指示物的选择、使用和结果判断提供指南。

本文件所叙述的步骤具有通用性质，其本身并不能作为医疗保健产品灭菌开发，确认以及监测综合的程

序。本文件的目的并非为某个过程中强制使用生物指示物，而是在假若使用生物指示物时，为其正确选

择和使用提供指南，避免出现误导的结果。

本文件中，使用者可获得针对特定灭菌过程以及关键参数的生物指示物选择指南，及正确使用该生

物指示物的指南。

使用者宜选择适合其采用的特定灭菌过程的生物指示物。由于各灭菌过程的差异很大，生物指示物

制造商难以预见其产品所有可能的用途，故制造商只能标识其生物指示物用于某特定用途。为所采用的

特定灭菌过程恰当地选择、使用、回收和结果判断，宜由使用者负责。

生物指示物使用前贮存和运输的条件、生物指示物的使用或灭菌器过程参数可能对生物指示物产生

不良影响，此外暴露于过程后使用的培养技术，包括培养温度、培养基类型、厂家和特定批次也可能影

响到与复苏和生长相关的实测抗力。因此，宜遵照生物指示物制造商的建议贮存和使用。灭菌处理后，

生物指示物宜无菌转移（如适用）以及按生物指示物制造商规定进行培养。

宜指出，生物指示物并非用来指示灭菌后的物品确实无菌。而是用来测试某一已知灭菌过程和采用

的灭菌设备的有效性，这种测试是按照无菌保证水平对微生物致死性进行评估的原理进行的。这类研究

宜由训练有素合适的人员进行。

注：本文件提供的一般信息，同样适用于现行国家标准未提及的过程和生物指示物。例如：新的和正在开发的灭菌

过程。

IV

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

医疗保健产品灭菌生物指示物第7部分：选择、使用和结果判断

指南

1范围

应用于灭菌过程的开发、确认和常规监测时，本文件提供了对生物指示物的选择、使用和结果判断

的指南。

本文件适用于所有的生物指示物。

本文件未考虑那些仅靠物理方式去除微生物的过程，如过滤法。

本文件不适用于各种组合过程的使用，如，清洗消毒器或者管道的冲洗和汽蒸。

本文件未规定用于在大气压下对隔离器和室内生物去污过程的汽化过氧化氢过程进行监测的生物

指示物的选择和使用的要求。

本文件不适用于液体浸泡灭菌过程。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

无菌技术aseptictechnique

用于微生物污染引入风险最小化的条件和程序

［来源：ISO11139:2018,3.16］

3.2

生物负载bioburden

一件产品和/或无菌屏障系统的表面或内部的存活微生物的总数。

[来源：ISO11139:2018,3.23]

3.3

生物指示物biologicalindicator

BI

含有对规定的灭菌过程具有确定抗力的活微生物的测试系统。

[来源：ISO11139:2018,3.29]

1

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

3.4

D值Dvalue

D10值D10value

在规定条件下，灭活90%的试验微生物总数所需的时间或剂量。

[来源：ISO11139:2018，3.75]

3.5

持续时间holdingtime

过程参数持续保持在其规定公差内的时间。

[来源：ISO11139:2018，3.133]

3.6

染菌载体inoculatedcarrier

已在其上或其内放置了一定数量的活性测试微生物的支持材料

[来源：ISO11139:2018，3.144]

3.7

染菌inoculation

在物品内部或者表面添加规定数量的特定微生物实体。

3.8

对数减少值logreduction

LR

存活微生物数目的减少值。

注：以lg为单位表示

3.9

运行鉴定operationalqualification

OQ

获得证据，并形成文件的过程，证明按照设备运行程序使用设备时，已安装的设备是在预定范围内

运行。

[来源：ISO11139:2018,3.220.3]

3.10

性能鉴定performancequalification；PQ

获得证据，并形成文件的过程，证明已安装且按运行程序运行的设备，能按预定的标准持续稳定地

生产出满足产品规范要求的产品。

[来源：ISO11139:2018,3.220.4]

3.11

过程挑战装置processchallengedevice；PCD

2

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

对于清洁、消毒或灭菌过程构成特定的抗力的装置，用于评价过程的性能。

[来源：ISO11139:2018,3.205]

3.12

过程挑战位点processchallengelocation；PCL

能模拟灭菌因子在一批拟灭菌的物品中处于“最不利状态”的位置。

[来源：ISO11139:2018,3.206]

3.13

过程参数processparameter

过程变量的规定值。

注1：灭菌过程的规定值包括过程参数及其公差。

[来源：ISO11139:2018,3.211]

3.14

过程变量processvariable

清洁、消毒，包装或灭菌过程范围内的化学或物理特征，其变化可改变过程的有效性。

示例：时间，温度，压力，浓度，湿度，波长。

[来源：ISO11139:2018,3.213]

3.15

参考微生物referencemicroorganism

通过公认的菌种保藏机构获得的微生物菌株。

[来源：ISO11139:2018,3.228]

3.16

抗力仪resistometer

设计用于在灭菌过程产生物理和/或化学变量组合的测试设备。

[来源：ISO11139:2018,3.233]

3.17

芽孢对数减少值spore-log-reduction

SLR

用来描述芽孢数减少的底数为10的负指数。

注1：用对数表示。

[来源：ISO11139:2018,3.260]

3.18

无菌的sterile

无存活微生物的。

[来源：ISO11139:2018,3.271]

3

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

3.19

无菌保证水平sterilityassurancelevel

SAL

灭菌后产品上存在单个活微生物的概率。

[来源：ISO11139:2018,3.275]

3.20

灭菌sterilization

经确认的使产品无存活微生物的过程。

注：在灭菌过程中，微生物灭活的性质是呈指数级的关系；这样在单个产品上微生物的存活能用概率来表示。虽然

这个概率能被降到很低，但不可能降到零。

[来源：ISO11139:2018,3.277]

3.21

存活与杀灭区间survival-killwindow

在规定的条件下灭菌处理时，生物指示物从全部存活微生物过渡到全部杀灭微生物的暴露程度。

[来源：ISO11139:2018,3.292]

3.22

第三方thirdparty

在所涉及的问题上公认的独立于有关各方的个人或机构。

注1：有关各方通常是供方（第一方）和需方（第二方）。

3.23

z值zvalue

热力灭菌或消毒过程中，使D值变化十倍所需的暴露温度变化值。

注1：以摄氏度（℃）表示

[来源：ISO11139:2018,3.326]

4通则

4.1本文件提供生物指示物的指南，生物指示物通常适用于所有的灭菌过程，包括ISO14937中的新灭

菌过程。

4.2生物指示物的使用通常记录在使用者的标准操作规程、规程和/或说明书中。

注：采用质量管理体系例如ISO13485通常满足此条款的要求。

4.3生物指示物宜与物理和/或化学的测量方法结合以证实灭菌过程的有效性。当灭菌过程中的物理和/

或化学变量超出了规定限值，宜对灭菌器不能获得其过程参数的原因进行评价，并对问题进行修正。类

似地，物理和/或化学变量在规定限值内，而生物指示物出现失败，宜对灭菌器不能获得其过程参数的

原因进行评价，并对问题进行修正。宜建立系统和/或程序用以评价周期过程限值的任何偏离，并将偏

离可接受的原因完整地形成文件。

4.4一个合格的生物指示物包括载体材料、包装和无需特殊容器设备便可处理的某种微生物成分。生长

条件宜恰当地形成文件，使用宜简单并恰当的描述以尽可能避免使用者误解。

4

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4.5生物指示物代表一种灭菌过程的微生物挑战，并用于验证某个灭菌过程能否灭活那些对于灭菌过程

具有确定抗力的参考微生物。生物指示物所采用的试验微生物对灭菌具有的抗力，往往超过通常的生物

负载微生物的抗力，不过，亦有一些微生物可能表现出超过试验微生物的抗力。一个合适的生物指示物

对特定灭菌过程的挑战宜超过器械上实际生物负载对这个灭菌过程的挑战，这种挑战是微生物的数量及

其抗力的联合。若有理由认为待处理的物品可能受到某种具有特殊抗力的微生物污染，则可根据生物负

载情况，要求延长灭菌加工。

4.6生物指示物不用于制造商在其产品标签上规定以外的灭菌过程，作为生物指示物候选微生物及菌株

的选择基于它们对特定灭菌方法中的已知抗力。使用不恰当的生物指示物可能出现误导性的结果。使用

者宜保证生物指示物已经被认定适用于所用的特定灭菌条件。除标签中给出的信息外，这可能还需要其

他信息。当在参考条件之外使用生物指示物时，使用者可要求提供有关指示物预期反应的信息，例如次

优湿度条件对环氧乙烷过程中使用生物指示物的影响。在生产商标示的建议使用范围外使用生物指示物，

宜充分说明该生物指示物对于特定灭菌过程的抗力。生物指示物的反应与过程参数之间的关系宜论证清

楚。

4.7负责产品灭菌的使用者宜确保用于验证和/或常规监测给定灭菌过程的生物指示物类型适合该用途。

4.8宜始终遵循制造商关于生物指示物的运输、贮存和使用的建议。否则会影响生物指示物的性能特征。

如果使用者从生物指示物的初级包装中取出染菌载体，或在初级包装上添加额外的包装，其抗力特性会

发生变化。关于这种变化的程度，宜向制造商寻求指导，或者使用者可测定抗力特性的变化。使用者宜

将染菌载体的性能特征适合其使用形成文件。

4.9生物指示物的使用不得超过制造商规定的有效期

4.10用生物指示物进行灭菌过程开发、对灭菌进行确认和/或常规监测的使用者，宜经过使用生物

指示物的合适的培训。

4.11灭菌过程完成和培养之间的时间宜在生产商规定时间内，或按8.2.3所述进行判定。

4.12宜采用无菌技术，把经过灭菌过程处理后的微生物转种到合适的复苏培养基。

4.13自含式生物指示物是专门为消除无菌处理的需要而设计，因为所有影响后处理所有培养的成分

都包含在其无需打开的初级包装。（见5.4）

4.14ISO11138对制造商应提供的生物指示物信息提出了要求。这些信息可以在标签上提供，作为

插页或作为生物指示物的通用规格。ISO11138还包括抗力特性的最低要求。所给出试验条件和方法作

为参考方法。

4.15生物指示物使用者来自各个工业部门，私人企业和医疗保健机构。通常，并不要求这些使用者

进行生物指示物的抗力检验，但对他们各自的质量保证体系会有不同的要求，其中可能包括监管机构或

公告机构的审核（见6.2.2）。如使用者希望进行微生物数量和/或抗力测定，需按生产商规定的方法

进行。

4.16必要时，使用者对抗力特性的验证是审核的替代和/或补充。

5生物指示物特性

5.1概述

5

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5.1.1生物指示物提供了直接评估灭菌过程的微生物致死性的方法（见参考文献[8]和[9]）。当与物理和/

或化学过程监测器结合使用时，生物指示物能指示给定灭菌过程的有效性。

生物指示物最简单的形式是装在初级包装里的一个染菌载体。染菌载体可有多种形式，包括纸

条，细线，金属片或其他适合染菌的载体。选择的初级包装允许灭菌剂进入染菌载体，且处理后保持无

菌屏障。

5.1.2只有在通过适当的灭菌过程开发、验证和监测计划确定的所需物理和/或化学参数和微生物结果

得到实现时，灭菌过程宜视为合格。未能达到所需的物理和/或化学参数和/或微生物挑战是宣告灭菌过

程不合格的基础（见ISO13485和ISO9001）。

5.1.3生物指示物包含规定数目的试验微生物，其呈现方式便于灭菌过程后的复苏。例如采用环氧乙

烷灭菌过程的试验微生物可以是枯草杆菌芽孢或萎缩芽孢杆菌，见ISO11138-2。对于蒸汽灭菌或湿热

灭菌，所用的试验微生物可以是嗜热脂肪地杆菌芽孢的合适菌株的孢子，见ISO11138-3。如果证明除

细菌孢子外的试验微生物对灭菌过程具有适当的抵抗力，则可以使用试验微生物。

5.1.4确定生物指示物抗力特性，例如D值的所有计算方法，都基于灭活遵循一级动力学。其要求是：

存活曲线的线性相关性的r2值不小于0.8（见附录E和附录F）。试验微生物的菌株、生产方式、菌悬

液、载体和包装材料及测试条件等都会影响生物指示物的抗力特性（见ISO11138-1）。

5.1.5生物指示物的设计和结构可导致独特的抗力特性，也可根据生物指示物用于灭菌过程的开发，

确认还是常规监测而不同，如果用于常规监测的生物指示物的设计与用于确认灭菌过程的设计不同，则

确认过程中的挑战宜与常规监测过程中的过程挑战相关联。

5.1.6取决于装载内部的放置以及在分散位点上特定的灭菌过程条件，同一生产批次的生物指示物可

显示不同的存活能力（见7.2.3）。生物指示物使用者宜注意将10个生物指示物分布于装载内部并不

能保证测试的可重复性，这是由于整个腔室以及装载内存在致死性的差异（见11.3.1的注）。

5.2产品直接染菌用的试验微生物悬液

5.2.1若生物指示物在周期开发和其他研究中无法应用时，有必要将试验微生物直接染菌在产品上或

产品中。直接染菌可适用于评估灭菌相关因素：例如产品的可灭菌性、装置中较难灭菌位点的证实，以

及局部微生物的影响，例如湿热与干热环境的比较。

选择产品或灭菌装载内“最难灭菌”的原理形成文件，该文件宜基于实验数据或者从特定灭菌方法

学的事先知识。实际上，“最难灭菌”位点就是对灭菌过程具有最高抗力的位置。可参考专门的灭菌标

准（例如：ISO17665-1和ISO11135-1）的指南来确定和选择“最难灭菌”位置。

5.2.2为了评估产品上特定位点或位置的灭菌效能，可将特定种类和数目的试验微生物染菌在那些位

点上。对采用试验微生物的悬液制备染菌载体或染菌产品需谨慎细心。试验微生物染菌的材料可改变试

验微生物的抗力特性。抗力的高低变化取决于单层或多层（聚合），涂层效果，和/或材料的抗菌或杀

菌效果。

5.2.3复苏试验微生物的方法宜确认，用于保证从产品中获得合适的复苏水平。（见ISO11737-1）。

试验微生物回收率宜以原始染菌数目的百分比来表示。染菌引起的试验微生物的存活特性的变化可影响

观察到的原始染菌数目的回收率。采用试验微生物悬液直接在产品或材料上染菌，可导致试验微生物存

活的延长或缩短。可用存活曲线法（计数法/直接计数法），亦可以用部分阴性法（见图A.4）对染菌

产品进行测定。以上操作需使用无菌技术。

5.2.4D值，如适用，连同z值，只有在特定条件下才是恒定值。由生物指示物制造商和供方提供的

芽孢菌悬液的抗力特性，可能与直接产品染菌研究的抗力特性不一致。采用载体（固体载体材料或液体）

及特定灭菌周期时需对抗力特性进行测量。

5.3染菌载体

6

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

5.3.1染菌载体含有规定数目的试验微生物，染菌在合适的载体材料上或材料中（见ISO11138-1:2017，

附录B）。宜注意保证所选载体材料能经受灭菌过程，不会对其性能特性产生负面影响，并能减少染菌

试验微生物在运输和装卸过程中的损失。

5.3.2由于菌悬液要承载在在载体上或者载体中，菌悬液中的试验微生物的抗力特性会因此发生相当

大的变化。能影响抗力特性变化的因素有好几种，例如菌悬液所染菌的表面（例如固体载体、粘性产品

或液体），芽孢分布方法，其他处理方法和干燥方法等。

5.3.3若染菌载体是从生物指示物初级包装中取出，或在内层包装外增加一层包装，用于周期开发、

周期确认研究或用于常规过程监测的过程挑战装置，使用者有责任提供此种应用的基本原理。宜考虑到，

染菌载体上微生物抗力可能与标签上所标示的生物指示物的抗力有所不同。

5.3.4由生物指示物制造商提供的某种染菌载体的抗力特性，可能与在产品直接染菌研究中得出的抗

力特性不符。

5.3.5宜当由生物指示物制造商或使用者采用针对生物指示物上的载体材料进行评估，以确定拟用生

物指示物的灭菌剂既不会残留也不会释放出抑制物质（例如灭菌剂残留物），从而抑制少数微生物的复

苏（见ISO11138-1:2017，5.2）

5.4自含式生物指示物

自含式生物指示物包括a）或b）。

a)在外层小瓶内装入一个有生长培养基的安瓿和一个已染菌试验微生物的载体，灭菌因子通过无

菌屏障或一条弯曲的通道才得以接触染菌载体。

经灭菌过程处理后，打破装有生长培养基的安瓿，使该生长培养基接触染菌载体，从而无需无

菌地将染菌载体转移到单独的生长介质容器中。自含式生物指示物的培养宜按生物指示物制造

商的建议。

注1：由于生长培养基的低容量和蒸发的可能性，延长暴露后的培养时间有时是不可能的。

从过程中产生的化学残留物例如环氧乙烷或气态过氧化氢，可能抑制存活微生物的生长。在培

养之前宜按生物指示物制造商的建议正确处理生物指示物（包括通风）(见8.2.4)。

b)一个装有生长培养基内的试验微生物悬液的密封安瓿。

这就是所谓密封安瓿生物指示物。经过程暴露后，密封安瓿就原封不动的培养，无需无菌转移。

注2：这种类型的生物指示物只对暴露温度和暴露时间敏感，主要用于监测液体的湿热灭菌。

自含式生物指示物与那些初级包装仅含一个染菌载体的生物指示物相比，体积大，很可能放不

进产品中能代表过程挑战点的位置。如果一种生物指示物不能在不使其变形或可能损害其初级

包装的情况下放入负载物，则宜使用不同的生物指示物。而且，使用者宜意识到，所要求的抗

力特性可能取决于灭菌周期采用的空气排除方法。

6供方的选择

6.1概述

6.1.1生物指示物的使用者宜尽可能作出购买决定，确保所选生物指示物符合标准规范。使用者宜将

特定的灭菌过程作为选择生物指示物的依据。

6.1.2当使用者有一个过程需要不同于生物指示物标签要求的性能特征时，使用者有责任验证生物指

示物是否具有所需的性能特征。

6.1.3生物指示物的使用者宜有一个系统，以保证所获得的生物指示物始终符合规定的特性。这种保

证可以通过以下一个或者多个提供：

a)从制造商处获得包括有关制备该批生物指示物性能特征的信息；

注：ISO11138规定了生物指示物制造商提供信息的要求。

b)生产商出具的声明，声明其生物指示物符合供方和使用者商定的规格；

7

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

c)如需要，使用者可对收到的每批生物指示物进行不同程度的检测，以验证性能特征是否符合商

定的规格。

6.1.4当使用者对供方建立了高度的信任时（见6.1.3），由使用者进行的检测便可减少到最少。最

低限度，使用者宜建立起一种机制，可以保证装运来的生物指示物包含商定的所有文件，如适用的标签

信息、插页和贮存及运输说明书等。宜有一种机制，保证供方持续保持预期的质量标准，如：由供方或

制造商申明符合标准。若使用者没有与供方建立能保证生物指示物性能不变的关系，则有必要进行附加

试验，直到建立好适当的保证，使得生物指示物满足BI制造商标签声称和/或使用者的要求。(对于文

件记录的信息，见附录D)

6.1.5如认为有必要，由使用者进行的试验可以包括对收到的每一批新的生物指示物样本（亦见8.6

和第11章）进行菌数检测和明确的抗力测试，如：D值或存活与杀灭时间。测试宜在制造商规定的准

确条件下进行。假如生物指示物的制造商是按照详细的标准规格（即ISO11138）进行生产，且使用者

按照制造商拟用的方法使用生物指示物时，就不必亲自进行抗力特性的测试。

制造商标签声称的抗力，例如D值，z值（若有）和存活与杀灭结果采用抗力仪（见ISO18472）进

行测定。

6.2文件

6.2.1概述

6.2.1.1生物指示物标签的要求，见ISO11138-1:2017，4.3的要求。

6.2.1.2标签包括了呈现在生物指示物初级包装和次级包装上的信息，以及可以印刷在包装上的信息

以外的其他使用散页说明书提供的信息。使用者可能需要或希望将符合产品标准和/或质量体系标准的

证据包括在适当的文档文件中。

6.2.1.3当制造商提供性能或符合标准的声明作为证书时，使用者宜按6.2.2.1第二句所示，确认制

造商的能力。

6.2.1.4假如是由一个独立的检测实验室（第三方）来查证生物指示物的性能特征，则该检测实验室

所采用的特定测试方法宜经过认可（见ISO/IEC17025和ISO/IEC17011）。

6.2.1.5宜验证生物指示物制造商的状态是否符合合适的质量标准，如ISO13485或其他质量保证计

划。如果能够证明符合合适的标准，则可能不需要进行审核。

6.2.2制造商审核

6.2.2.1若有必要，使用者宜证实有资格的审核机构，对生物指示物制造商进行了审核。或者，使用

者可自己进行审核。

注：有关审核的标准ISO19011对审核过程，质量体系审核员的资格和审核计划的管理均提出了要求指南。

6.2.2.2由有资格的审核员进行审核，这是买方质量体系规定的一部分。对生物指示物制造商进行审

核时，宜考虑以下内容：

a)试验微生物:

1)菌株选择和保存；

2)试验微生物繁殖条件，包括生长培养基及各种成份，培养温度和培养时间；

3)试验微生物的采集，纯度和洁净度；

4)活的试验微生物计数和试验微生物的生物化学特性。

b)生物指示物:

1)鉴定用于制备生物指示物的成分，如载体材料和初级包装，并考虑这些材料对试验微生物

的任何潜在毒性影响；

2)生物指示物生产过程中试验微生物的数量；

3)与生物指示物一起提供的生长培养基的一致性（如生长促进、PH值、稳定性等）及装填

量；

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4)试验微生物抗力，包括测试设备类型及其校准，所采用的复苏培养基和培养条件；

5)有效期截止前，试验微生物存放的稳定性和持续抗力。

c)质控:

1)生物指示物标签的声明；

2)生物指示物的存放稳定性和持续符合其标签声明。

6.2.2.3制造商宜提供充分的、与生产生物指示物相关的质量体系文件，及提供产品符合所申明技术

规格的文件。

7过程开发中的生物指示物

7.1概述

7.1.1对于过程开发的附加信息，参考这些过程的灭菌标准（如ISO11135、ISO14937、ISO17665-1

和ISO20857）。

7.1.2如果某个生物指示物用于过程开发，该指示物的适应性宜确定。

7.1.3灭菌过程因其操作特性和灭菌产品类型而异。虽然每个应用程序都是独特的，但为了开发、确

认和常规监视灭菌过程，可以将类似产品分组到同一产品系列中。认真考虑被灭菌产品的设计或包装的

各个方面，这些可对灭菌过程赋予更多的挑战。生物指示物可用于确定产品上对工艺构成严格挑战的位

置，同样也可用于确定不同类型的产品与灭菌过程挑战相关的程度。这可能导致要选择特殊的产品构形

做进一步分析。

7.1.4生物指示物宜与合适的物理和/或化学的过程参数监测手段配合一起使用，以证明灭菌过程的有

效性。

7.1.5对于每一种灭菌器的容积该用多少个生物指示物，无法提出通用性的建议，因为这要取决于周

期重现性和灭菌过程整个装载中存在过程参数差异的可能性。然而，其他灭菌标准可能提供使用生物指

示物的建议数量，例如：ISO11135。可通过使用生物指示物和/或生物负载研究收集的数据，以及关于

灭菌剂在整个装载中分布的文件，确定要使用的生物指示物的正确数量。

7.1.6生物指示物/生物负载组合法的实施需要考虑5.4和7.2中提到的许多相同因素，关于生物指示

物在产品和装载中的位置，这些位置对灭菌过程构成了严峻挑战。只有当数据足以进行有效的统计分析，

并且生物负载数据具有很高的可信度，可以代表“最不利条件”时，该方法才适用。引起变化的原因很

多，如原材料，过程控制和季节变化。生物负载在产品中的分布状态和存在性质宜考虑到。由于生物负

载在产品中的分布可明显不同，宜确定分布如何影响到产品对灭菌过程呈现的挑战，因而影响到生物指

示物的选择，这一点极其重要。

产品生物负载及其种类和抗性分布的测定需要考虑ISO11737系列中的因素。所选择的方法宜根

据这些标准的要求进行确认，并建立生物负载估计的统计置信度。

7.2过度杀灭处理

7.2.1本方法通常是指“半周期法”、“过度杀灭灭菌法”，在ISO14937中有详细论述。本方法依

据下述假设：

a)生物指示物（参考微生物）比生物负载更具挑战性；

b)整个灭菌过程至少达到10-6无菌保证水平（见ISO11135-1和ISO14937）；

c)在半周期时，使用者一般可以证实至少6个对数减少值（见图A.1）。

注：ISO11138允许抗力特性，而不是供监测用的最低要求。

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7.2.2这些杀灭标准可能提出，要在整个装载的产品PCL处，放置例如含试验微生物总数为106、符合

最小限度抗力要求的生物指示物或染菌载体。装载物内的这些位置以前宜被证明对灭菌过程提出了挑

战，并与“最难灭菌”位置相关联，因此选择这些位置将确保整个产品装载的合适的对数减少。当所

有生物指示物都是统计上等效的样本时，宜在待验证灭菌过程的正常保持时间或剂量的一半内证明微生

物数量至少6个对数减少值。显示生长的生物指示物百分比可以与所达到的对数减少值相关联[见注

11.3.1c]。如果在半周期条件下进行的测试表明，试验微生物的数量减少了6个对数值，则根据样本

大小，可能不会导致测试微生物的生长。如图A.1所示，在半周期区间的上端，芽孢对数减少（SLR）

值为8时，阳性生长的概率为1%。

7.2.3与生物指示物标签上注明的抗力相比，生物指示物放置在产品内或装载内可能会改变其表面抗

力特性。这可能需要调整半周期暴露时间，以补偿生物指示物在产品或装载中放置引起的额外抗力。当

使用试验菌悬液制备染菌产品时，可能需要进行类似的调整（见5.2）。

7.2.4宜使用合适的物理测量来确定整个装载中的过程挑战位置，以帮助确定生物指示物的放置位置。

宜准备足够数量的探头，并将生物指示物放置在产品内先前确定的位置。

注：对于湿热灭菌来说，生物指示物的z值未必就是10℃的z值，后者通常假设以温度测量为基础的过程致死性。这

可能导致使用生物指示物确定的综合过程致死率与直接温度测量确定的致死率之间的差异。

7.3生物指示物和生物负载组合法

7.3.1生物指示物和生物负载组合法要求产品生物负载的总数和微生物抗力是已知。这种方法的优点

是可以缩短周期暴露时间，并将产品暴露于灭菌剂的程度降至最低，此方法在ISO14937中有详细论述。

7.3.2生物指示物/生物负载组合方法要求选择能够提供足以将生物负载灭活至标明的产品无菌保证

水平（SAL）的过程致死率的过程条件。证明合适功效所需的重复周期数取决于生物负载评估中确定生

物负载灭活重现性的准确性和程度。图A.1显示了生物指示物失活与产品生物负载失活之间的一般关系。

由于生物负载通常比生物指示物对杀菌剂的抗性低，因此通常可以通过比使用过度杀灭方法时建议的更

少的处理来实现所需的SAL。

7.3.3对于这一程序，只要能够证明所需的SAL，就可以使用每个载体上的试验微生物数量少于106

CFU（菌落形成单位）的合适的生物指示物。在确定用于确认灭菌过程的最低生物指示物的菌数，够证

明所要的无菌保证水平能够达到，可采用每个载体上试验微生物数量少于106CFU的生物指示物。在确

定灭菌过程确认所需最小生物指示物数量时，宜考虑生物负载的变化。生物指示物含菌总数不宜少于每

个载体含试验微生物103（见图A.1）。

7.3.4在ISO11737-1中推荐了测定产品生物负载的方法。由于生物负载变化，有必要对生物负载和

生物负载抗性进行常规表征。可能需要对总生物负载种群的抗力进行研究，以确保挑战小于生物指示物

的挑战。为此，一种可能采用的方法将是运行亚致死灭菌周期，以证实生物负载菌落若承受了生物指示

物所承受的暴露，就不能存活。

7.3.5生物指示物和生物负载组合法的基本准则要求，所选的加工条件能把生物负载的总数降到100。

与产品标签一致的附加安全系数宜适用于保存期（参见图A.1）。持续时间需外加一个与产品标签相符

的安全系数（见图A.1）。在灭菌周期开发过程中宜证明重复周期数取决于生物负载估计的准确性和置

信区间。

7.3.6如果微生物菌株的灭菌动力学满足生物指示物的标准（杀灭曲线对数线性的系数在0.8以内），

则其抗力大于产品生物负载抗力的微生物菌株可以用作生物指示物。大于产品生物负载抗力的微生物菌

株，如果它们的灭菌活力满足生物指示物的基本原则，这些菌株可以用作生物指示物。但是，这些指示

物微生物的抗力可能小于ISO11138规定的过程抗力（见图A.2）。

7.3.7如果生物负载的抗力大于市售生物指示物的抗力，则宜考虑将从生物负载中分离出的抗性菌株

纳入过程开发研究（见ISO11135和ISO17665-1）。或者，宜增加保持时间或剂量，可根据由生物负

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载和生物指示物的相对抗性所决定的因素，或可以使用具有更高菌数的生物指示物产生的挑战大于或等

于抗性菌株。

7.4生物负载法

7.4.1宜按照ISO11737系列中适合的微生物学方法来评估生物负载。有些生物负载的抗力可能大于

ISO11138所描述的生物指示物，具有更大抗力的生物负载微生物可作为模型生物指示物（见7.3）。

此方法在ISO14937中有详细论述。

7.4.2特定灭菌过程的相关标准中给出了有关确认和常规监测以及绝对生物负载方法适用性的信息。

对与生物指示物无关的完全生物负载法的详细规定在ISO11737中给出。

8灭菌确认的生物指示物

8.1概述

若在确认灭菌过程时使用生物指示物，亦宜考虑到常规监测中可能使用的生物指示物类型。各类不

同的生物指示物可为灭菌过程提供不同程度的挑战（见图A.2）。若在确认和常规监测中使用不同的生

物指示物，宜将两者都列入确认研究中，以便建立并记录两者的抗力关系。

确认灭菌过程时要求提供文件，说明该过程能够始终如一地生产出符合预定规格的产品。（见ISO

11135,ISO14937,IS17665-1,ISO20857）

8.2生物指示物的放置和处理

8.2.1在产品或产品装载中生物指示物的数目宜形成文件。

8.2.2使用者宜对所选的生物指示物在灭菌器的腔室、产品装载或某个过程挑战装置中的位置形成文

件（见附录B）。在产品负载内放置生物指示物时需要考虑的其他因素包括装载模式、装载密度和几何

形状、PCL、物理和/或化学传感器或探针的放置、物理元素的潜在分层、包装的影响等。

8.2.3过程结束后，宜立即把生物指示物从灭菌器的装载中取出，但不宜危及人员安全。宜在对该产

品和过程已建立的规定时间间隔内，对生物指示物进行测试。指示物的准备及其在灭菌过程中的使用之

间的时间间隔，和在过程结束和生物指示物培养之间，宜证明这些间隔没有对灭菌器或灭菌过程的生物

指示物测试结果的影响。不能超过这些经确认的时间间隔。若处理生物指示物的方式不同于制造商的规

定，宜验证程序，以确定其是否影响生物指示物的性能。宜遵循任何确定的时间间隔。

8.2.4把生物指示物从灭菌器中取出时，宜遵守适用的人员安全要求。

8.3灭菌器鉴定

8.3.1进行IQ和OQ以获得书面证明，证实灭菌器、灭菌器的服务和辅助设备按招其规范提供和安装，

并且灭菌器按使用说明书操作，能在预定范围内运行（见ISO11135，ISO17665-1和ISO20857）。

在OQ或PQ中可使用生物指示物，例如用于证实灭菌剂分布的均匀性。

8.3.2灭菌器制造商可能已为特定类型装载（见附录B）使用生物指示物进行过型式测试。

8.4性能鉴定

灭菌器鉴定（见8.3）完成后，随即进行性能鉴定（PQ）测试，将灭菌过程的重现性和有效性形成

文件，包括其可生产出符合预定质量规格产品的能力。确认建立的过程符合预定规范。可采用相应的

标准，例如ISO11135，ISO14937，ISO17665-1和ISO20857。各类不同的生物指示物可为灭菌过程提

供不同程度的挑战（见图A.2）。对灭菌周期的开发和确认，以及常规监测中所用的生物指示物间的关

联宜予以建立，并形成文件。

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8.5确认的审核和批准

顺利完成各项鉴定后，开始投入生产之前必须审核确认文件，包括生物指示物的性能，以验证灭菌

过程是否符合要求。

8.6再鉴定

8.6.1进行再鉴定时，所采用的抗力特性，生物指示物的数目，在产品装载中的位点等，均宜与原来

一样。若过程采用的是经确认过的新的生物指示物，则需建立和将新的生物指示物与原来的指示物的相

互关系形成文件，这一点极为重要。

8.6.2采用湿热和环氧乙烷灭菌时，ISO17665-1或ISO11135-1适用。

8.6.3宜建立评估批生物指示物抗力特性的最低频率。可把季节变化、产品和材料的变化和设备的变

更等因素都考虑到，这些情况会影响再次鉴定生物指示物时采用不同的时间间隔。若生物指示物的抗力

特性变化超过预定的极限，则宜进行再鉴定。若复苏培养基改变，则新的生长培养基宜与先前采用的生

长培养基相关联，而且，选用新的生长培养基宜经确认（亦见12.4）。

注：如从合格供应商处购买生物指示物，其抗力特性，如按标签所示进行储存，可在标示的有效期内维持在规定公差内（ISO

11138-1）。

9常规监测中的生物指示物

9.1概述

9.1.1生物指示物提供了证实灭菌过程微生物致死性的一种方法，然而，为了定量评估致死率，在灭

菌确认中可是实施部分阴性法（如：半周期法）。对于开发完善、经过确认的过程，可能可使用参数放

行（例如：环氧乙烷灭菌见ISO11135或干热灭菌见ISO20857），但当地监管机构也可能要求使用生

物指示物作为过程监控和批放行的一部分。对于不能可靠测量过程变量，因此批参数放行无法实现的过

程，生物指示物为证明灭菌过程中微生物的致死性提供了最佳替代方案。环氧乙烷见ISO11135，干热

见ISO20857。

9.1.2生物指示物的类型及其在产品或产品装载中的位置，宜与灭菌过程开发或确认中已确定的产品

装载位置相一致。若用于灭菌过程常规监测的微生物挑战系统与用于确认过程的微生物挑战不同，确认

系统和日常监控系统之间的关系宜形成文件。

9.1.3准备生物指示物和灭菌之间的规定的时间间隔，以及过程结束和指示物培养之间规定的时间间

隔宜是合理的，以证明这些间隔对生物指示物的性能没有影响（见8.2.3）。

9.1.4用于生物指示物/生物负载组合法中常规监测所用的生物指示物（见7.3），如果菌数和/或抗

力低于各部分的最低要求时（见ISO11138-1:2017，6.1.3），可不必与ISO11138全部相符。

9.2生物指示物的放置和处理

9.2.1在周期开发和确认时，生物指示物在产品和装载中的放置位置，宜是对灭菌过程最严格挑战的

地方。在常规监测中，使用一个PCD将生物指示物放在更便捷的位置是可取的（见9.3）。在这些情况

下，生物指示物的放置宜与周期设定时采用的位置相关联，以保证灭菌过程的完整性不受影响。还宜保

证常规监测采用的生物指示物的放置位置始终如一。

9.2.2灭菌后生物指示物的妥善处理宜遵照生物指示物供应商的指示。通常，宜在不影响人员安全的

情况下，在合理的规定时间内，从负载上取出生物指示物（见第11章）。然后，宜在规定的时间内通

过无菌技术把生物指示物转种到合适的生长培养基上，并在恰当的温度下进行培养（见第12章）。如

使用自含式生物指示物，则无需采用无菌技术。

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9.2.3除了对培养基的生长促进和生物指示物的活性鉴定要求外，使用者在灭菌过程的常规监测中也

可以简化的实施这些检查。对生物指示物的这些特性进行简化的检查，例如，可采用未经灭菌处理的生

物指示物放在培养集中培养，以显示生物指示物活力和生长条件适用性两方面的情况。

注：国家指南文件可对未暴露的控制因素的使用进行要求。

9.2.4只有当需要的物理和/或化学参数经过审核，微生物学结果得到解释，而且两者均符合所需指标，

灭菌过程才可以接受。。

9.3过程挑战装置（PCD）

9.3.1过程挑战装置与生物指示物组合用于灭菌周期的确认和常规监测。过程挑战装置可设计成让生

物指示物放在过程挑战装置中的适当严格挑战的位置。过程挑战装置的设计可根据被挑战产品性质而变

化（见附录B给出的各种不同过程挑战装置示例）。

9.3.2过程挑战装置的设计宜考虑影响灭菌过程的各种工艺参数。过程挑战装置的构成要取决于被监

测的周期类型，以及被灭菌产品的类型。

9.3.3过程挑战装置可以是市售的预制器件，通常叫做“生物测试包”。过程挑战装置及在产品装载

中的位置宜代表对过程的挑战，相当于或者超过产品装载所代表的挑战。

10解释和接受标准

10.1概述

10.1.1通过使用相关标准进行灭菌过程的确认和控制，在灭菌过程开发期间确定灭菌过程合格的验收

标准，

10.1.2为了取得可靠的结果，宜建立并维护常规程序，并由训练有素的技术人员使用合适的设备实施。

10.2结果解释

10.2.1一个经过确认、符合各项预设参数的灭菌