(高清版)GBT 40176-2021 植物源性产品中木二糖的测定 亲水保留色谱法

GB/T40176—2021植物源性产品中木二糖的测定亲水保留色谱法国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会IGB/T40176—2021本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)归口。1GB/T40176—2021植物源性产品中木二糖的测定亲水保留色谱法本文件规定了植物源性产品中木二糖的高效液相亲水保留色谱测定方法。本文件适用于植物源性产品中的木二糖的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。啉酮(PMP)发生衍生反应，生成具有强紫外吸收的稳定产物，对其采用高效液相亲水保留色谱紫外检5试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.1.2无水乙醇(CH₃CH₂OH)。5.1.9磷酸(H₃PO₄):色谱纯。5.1.10木二糖(C₁₀H₁₈Og,CAS号：6860-47-5):纯度≥99.0%。2GB/T40176—20215.2.4磷酸水溶液(0.1%):量取1mL磷酸，加水溶解并定容至1L。5.3标准溶液配制称取0.1g木二糖，精确至0.0001g,用水溶解并定容至100mL,配制成质量浓度约为1000μg/mL的标准储备液，储存于4℃条件下，在1个月内使用。移取2.5mL标准储备液(5.3.1)用水定容至25mL容量瓶，分别从容量瓶中移取0.1mL、现用现配。易变质试样置于0℃~4℃保存。3GB/T40176—20218分析步骤取1g(精确至0.0001g)混匀后的样品于烧杯中，用水分散，转移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度；混匀后，25℃下360W超声10min,静置30min,取5mL上清液于20mL容量瓶中，加入无水乙醇定容至刻度，取5mL溶液于离心管中，25℃下360W超声10min,10000g高速离心10min;取2mL上清液，氮吹除去乙醇；余渣加水充分溶解，转移至5mL容量瓶中，用水定容至刻取1g(精确至0.0001g)混匀后的样品于烧杯中，用50mL水溶解，混匀后转移至2氢氧化钠溶液(5.2.2)各400μL,混匀，70℃水浴反应100min。再加入0.3mol/L的盐酸溶液(5.2.3)a)液相色谱柱：亲水保留色谱柱(基质键合两性离子或中性酰胺官能团),柱长150mm,内径4GB/T40176—2021表1梯度洗脱程序时间min%%0520.18.4标准曲线的制作将系列标准工作液按从低到高的浓度依次注入液相色谱仪中，测定相应的响应值(峰面积),以标准工作液中木二糖的浓度为横坐标，以响应值(峰面积)为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液色谱图参见附8.5样品溶液的测定将待测样品液上机测定。若待测样品液中木二糖含量超出标准工作曲线1.0μg/mL～100μg/mL范围，应稀释合适倍数后重新测定，记录色谱图。根据保留时间定性，记录峰面积，根据标准曲线计算待测样品液中木二糖的浓度。样品溶液色谱图参见附录B中图B.2、图B.3和图B.4。9分析结果的表述试样中木二糖含量按照式(1)计算：式中：w——试样中木二糖的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);p——根据样液的峰面积由直线回归方程计算出的木二糖的质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);V——试样定容体积，单位为毫升(mL);f——试样溶液稀释倍数；m——试样称样量，单位为克(g)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。10精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。本方法中植物源产品中木二糖的检出限分别是：高蛋白类产品为0.6mg/g,高淀粉类产品为0.6mg/g,非淀粉糖类产品为0.3mg/g;定量限分别是：高蛋白类产品为2mg/g,高淀粉类产品为2mg/g,非淀粉糖类产品为1mg/g。5GB/T40176—2021(资料性)样品分类说明植物源性样品分类举例参见表A.1。表A.1样品分类举例样品分类举例高蛋白质类样品豆浆粉、植物蛋白粉高淀粉类样品烘焙用小麦粉非淀粉糖类样品速溶功能饮料、固体饮料6Al!GB/TAl!(资料性)B.1木二糖标准品亲水保留色谱图木二糖标准品亲水保留色谱图参见图B.1。0.60-0.500.400.300.200.100.000.002,004.006.008.0010.0012.0022.0024.0026.0028.0030.00图B.1木二糖标准品亲水保留色谱图B.2试样(高蛋白质类产品)中木二糖亲水保留色谱图试样(高蛋白质产品)中木二糖色谱图参见图B.2。280.00210.00mAl.mAl.70.000.00-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.00图B.2试样(高蛋白质类产品)中木二糖亲水保留色谱图B.3试样(非淀粉糖类产品)中木二糖亲水保留色谱图试样(非淀粉糖类产品)中木二糖色谱图参见图B.3。mAUmAU0.1000.0900.0800.0700.0600.0500.0400.0300.0200.0100.000-0.0100.002.004.006.008.00GB/T40176—202110.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.00图B.3试样(非淀粉糖类产品)中木二糖亲水保留色谱图B.4试样(高淀粉类产品)中木二糖亲水保留色谱图试样(高淀粉类产品)中木二糖色谱图参见图B.4。280.00