《水环境监测》课件-学习情景43 粪大肠菌群的测定

室内环境检测与控制技术专业资源库ProfessionalResourceBaseofIndoorEnvironmentalInspectionandControlTechnology粪大肠菌群的测定——多管发酵法一

预备知识粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便，与大肠菌群相比，粪大肠菌群在人和动物粪便中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。在44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群成为粪大肠菌群。卫生学概念，又称为耐热大肠菌群，主要是大肠杆菌，但也包括克雷伯氏菌属等。用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。粪大肠菌群的测定可以用多管发酵法或滤膜法。一

预备知识多管发酵法是以最可能数简称MPN来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显阳性又显阴性的稀释度。因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。二实训准备准备事宜名称方法样品的采集和保存

水样采集在经灭菌的玻璃瓶内，要尽快分析，一般不宜超过2h，否则应4℃保存，可保存12h。准备事宜名称方法实训试剂水新制备的去离子水。单倍乳糖蛋白胨培养液成分：蛋白胨10g，牛肉浸膏3g，乳糖5g，氯化钠5g，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，蒸馏水1000ml。制法：将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000ml蒸馏水中，调节pH为7.2~7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。二实训准备准备事宜名称方法实训试剂三倍乳糖蛋白胨培养液按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，制法同上。EC培养液成分：胰胨20g，乳糖5g，胆盐三号1.5g，磷酸氢二钾（K2HPO4）4g，磷酸二氢钾（KH2PO4）1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃导管的试管中。置高压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌20min，灭菌后pH应为6~9。培养基的存放在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化或体积变化明显时废弃不用。二实训准备于各装有5ml三倍乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），各加10ml水样于各装有10ml单倍乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），各加1ml水样于各装有10ml单倍乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），各加1ml1∶10稀释的水样各管充分混匀，在37℃±0.5℃下培养24h±2h。复发酵试验初发酵试验产酸和产气的发酵管表明为试验阳性三分析步骤轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用3mm接种环或灭菌棒将培养物转接到EC培养液中。在44.5℃±0.5℃下培养24h±2h（水浴箱的水面应高于试管中培养基的液面，接种后所有发酵管必须在30min内放进水浴中）。培养后立即观察，发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从教材中表2或表3中查得每升水样中的粪大肠菌群。接种水样为100ml2份、10ml10份、总量300ml时，查表2可得每升水样中的粪大肠菌群；接种5份10ml水样、5份1ml水样、5份0.1ml水样时，查表3求得MPN指数，MPN值再乘10，即为1L水样中的粪大肠菌群。如果接种的水样不是10ml、1ml、0.1ml，而是较低的或较高的三个浓度的水样量，也可查表3求得MPN值，再经式

计算成每100ml的MPN值，MPN值再乘以10，即为1L水样中的粪大肠菌群。复发酵试验三分析步骤分析人

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样品编号接种水量（ml）初发酵时水样呈阳性数复发酵时水样呈阳性数MPN值（个/100ml）粪大肠菌群（个/L）备注