氟乙酰胺检验方法(化学法)

编号：HSCDC/QCFF001-2009

黄石市疾病预防控制中心作业指导书

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第3版第0次修订

氟乙酰胺检验方法（化学法）

颁布日期：2009-9-16

1.目的

为规范和指导本实验室使用化学法对氟乙酰胺的检验，特制定本作业指导书。

2.范围

适用于本实验室使用化学法对氟乙酰胺的检验工作。

3.方法步骤

3.1检材处理

3.1.1固体或半固体检材，可用有机溶剂直接提取法，一般常用甲醇或乙醇浸泡，在50-60C水浴上温浸l-2h。

如用其它有机溶剂时，可在提取容器中充分振荡，然后过滤，滤液置60℃水浴上蒸发至近千，用适量甲醇

溶解残渣，溶液供检验用；

3.1.2液体检材，可直接用氯仿等有机溶剂提取或用透析法处理，也可用在水浴上蒸去水分后再用甲醇浸出；

3.1.3尿液相直接用扩散盒吸收法收集进行比色测定或用筑离子选择电极法直接测定氟含量；

3.1.4内脏组织检材，将组织绞碎捣乱，用碳酸钠和醋酸镁做固定剂，用灼烧法破坏，把有机氟转变成无机

氟，再测定氟的含量。

3.2检验方法

3.2.1异羟月亏酸铁反应：

［原理］:在碱性条件下，氟乙酰胺与羟胺反应，生成异羟月亏酸，进一步与高铁离子反应，生成紫色异羟肠

酸铁珞合物。

［试剂］:（1）100g/L盐酸羟胺溶液；（2）100g/L氢氧化钠溶液；（3）5%盐酸溶液；（4）10g/L三氯化

铁溶液。

［操作］:取检材提取液10mL浓缩成1mL于试管中，加100g/L盐酸羟胺0.5mL,再用100g/L氢氧化钠溶液

调成碱性，于酒精灯上缓缓加热至沸，放冷后，加5%盐酸调至pII3-4,再加一滴10g/L三氯化铁溶液，如

有氟乙酰胺存在，则显紫红色。

3.2.2纳氏试剂反应：

［原理］:氟乙酰胺在强碱性条件下，可水解生成氨，而与纳氏试剂反应，生成桔红色沉淀。

［试剂］:纳氏试剂

［操作］:取12社经处理后的检体水溶液于试管中，加纳氏试剂『2mL,如含氟乙酰胺，则会有下列呈色反

应：淡黄一亮黄一深黄一棕黄一桔红色沉淀。如含量较高，可立即变黄，短时间就出现红棕色沉淀。

编号：HSCDC/QCFF002-2009

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第3版第0次修订

毒鼠强的测定（化学法）

颁布日期：2009-9-16

1.目的

为规范和指导本实验室用化学法对毒鼠强的检验，特制定本作业指导书。

2.范围

适用于本实验室用化学法对毒鼠强的检验工作。

3.方法步骤

3.1性状毒鼠强，又名4,2,4,没鼠命。化学名：四次甲基二硼四胺。纯品呈正方形结晶，无臭无味，

溶点255〜260℃,不溶于水和乙醇，微溶于丙酮、苯、氯仿、乙酸乙酯。溶于二甲亚硼，化学性质稳定。

3.2剂型常用毒饵是0.5%粉剂。

3.3毒性

毒鼠强是一种神经性杀鼠剂，可通过呼吸道和消化道而导致中毒，可滞留体内，对所有温血动物都有剧毒，

口服6-12mg即为人的致死量，小白鼠致死量0.2mg/kg,人口服LDso为100U的kg,剂量大时3分钟可致死,

皮肤不吸收，二次中毒危险性大。

3.4毒理

为使神经递质甘氨酸选择性兴奋脊髓，较大剂量兴奋延脑中枢，对皮层有一定兴奋作用。

3.5中毒症状

中毒潜伏期很短，摄入后数分钟至数十分钟出现症状。主要特点为阵发性抽搐。一般表现为头昏、心悸、

恶心、腹痛、呕吐、四肢无力、牙关紧闭、烦躁不安、呼吸困难等，重症患者如不及时抢救，会出现强直

性抽搐，因呼吸停止而迅速死亡。

3.6试剂

3.6.1乙酸乙酯（分析纯）：

3.6.2浓硫酸（分析纯）：

3.6.33+7的硫酸水溶液：3份硫酸缓缓加入7份蒸储水中。

3.6.4400g/LNa0H溶液。

3.6.520g/L变色酸溶液：0.2g变色酸溶于适量水中，用水稀至10mL。

3.6.6纳氏试剂：称取10g碘化汞及7g碘化钾，溶于少量纯水中,将此溶液缓缓倾入已冷却的50mL（320g/L）

氢氧化钠溶液中，并不停搅拌，然后再加水稀释至100mL。

3.7检验操作：

3.7.1样品提取:

3.7.1.1固体检样（毒饵、粮食、面粉等）

毒饵：取0.5-2.0g,加乙酸乙酯15mL,浸泡5min,振摇提取20min,过滤，取滤液5mL,二份，

编号：HSCDC/QCFF002-2009

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毒鼠强的测定（化学法）

颁布日期：2009-9-16

分别置于二个10mL具塞比色管中，于90C水浴浓缩挥干，备检。

粮食、面粉等：取15g检样，加乙酸乙酯50mL,浸泡5min,振摇提取30min,上清液过滤，检样

再加20mL乙酸乙酯重提取一次，过滤，合并滤液，取20mL滤液，二份，分别置于二个10mL具蹇比色管

中，（20mL滤液，分批转入10mL比色管）在90℃水浴浓缩挥干，备检。

3.7.1.2半固体检样（胃内容物、呕吐物等）

取20-30g检样，置于研钵中，加适量无水硫酸钠与检材研磨成干沙状，转至具塞三角瓶中，加一定量乙酸

乙酯，振摇提出取15min,过滤，检材再用乙酸乙酯提出取2次，合并滤液，取20mL滤液二份，以下操作

同粮食。

3.7.1.3内脏检样：

取适量检样。切碎或捣碎于研钵中。少量多次加入无水硫酸钠研磨，直至呈干沙状，以下操作同半固体检

样。

3.7.1.4液体取样:

取检样适量，用等量乙酸乙酯直接提取，分离提取液，用无水硫酸钠脱水，过滤，取一定量滤液，二份，

分别置于二个10mL具塞比色管中，于90℃水浴挥干，备检。

3.7.2纯化处理：

检样经上述方法处理后，杂质少，颜色浅的即可直接定性分析，颜色较深的提取液需纯化处理，具体操作

是：20mL提取液中加活性炭0.1g,中性氧化铝0.2g,振摇30min,过滤，滤液置于10mL具塞比色管中，

于90'C水浴中挥干，备检。

3.7.3定性试验（含样品提取残渣的10mL比色管中进行）

在10mL比色管中，加3+7的硫酸水溶液0.5mL,湿润比色管中全部提取残渣，盖塞，置于80℃水浴lOmin,

冷却，沿管壁小心加水至L0mL,再加20g/L的变色酸水溶液0.1mL摇匀，然后，加浓硫酸1.0mL,摇匀，

盖塞，置于沸水浴15min,加热期间要注意密塞，观察试液颜色变化，同时做空白和阳性对照。阳性反应呈

淡紫红色至深紫红色，阴性为淡黄色。5ug毒鼠强即可得到明显的阳性反应。

3.7.4概略定量

检验操作程序同定性试验反应，仅需注意以下操作：1）、精确称取检样量、；2）、提取溶剂须经定容；3）、

精确吸取一定量提取液挥干后参与反应；4）、准确吸取毒鼠强070口g为标准系列，置于10mL比色管，

经挥干后测定，以1cm比色皿，在570nm波长处比色测定。

对于重大案件，除用本方法检验外，沿需用气相色谱法或气-质联用法进行对照，必要时应进一步确证。

编号：HSCDC/QCFF003-2009

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气相色谱法测定氟乙酰胺、毒鼠强

颁布日期：2009-9-16

1.目的

为规范和指导本实验室通过气相色谱法对氟乙酰胺、毒鼠强的检验，特制定本作'业指导书。

2.范围

适用于本实验室通过气相色谱法对氟乙酰胺、毒鼠强的检验工作。

3.方法步骤

3.1.检材处理：同氟乙酰胺的测定及毒鼠强的测定，检材用乙酸乙酯及无水磷酸氢二钾萃取，浓缩挥至近千，

用少量乙酸乙酯溶解残渣待试。

3.2测定：

3.2.1色谱条件:进样口温度:250℃,检测器温度：250℃,程序升温，氟乙酰胺:60℃保持5min,然后以15℃

/min升温至250℃并保持3min;毒鼠强：150'C保持Imin,然后以7℃/min升温至250c并保持3min;

FID:柱头压，12Kpa,空气:300mL/min,氢气:30mL/min,载气:30mL/min,分流器：开，分流比:30mL/min等

FPD（仅用于毒鼠强）：硫片,柱头压，12Kpa,Airi:80mL/min,Air2:170mL/min,4:140mL/min,补充

气：30mL/min,不分流,0.8分钟,分流，分流流量30mL/min,AT=1,RANGE:1010A/mV

色谱柱：氟乙酰胺、毒鼠强专用毛细管色谱柱（中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所提供，柱编号：

20030303）

3.2.2标准曲线的制作：用乙酸乙酯作溶剂配制标准系列：

FID:氟乙酰胺：100、200、400、800ug/mL

毒鼠强：50、100、200、400ug/mL

FPD:毒鼠强：2.5、5、10、20ug/mL

取1UL进样，测量保留时间及峰面积。以氟乙酰胺、毒鼠强的含量对峰面积作图，绘制标准曲线，保留

时间为定性指标.

3.2.3样品测定：取1UL样品处理液注入色谱仪，用保留时间定性，峰面积定量。

编号：HSCDC/QCFF004-2009

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食品中甲醛次硫酸氢钠的测定

颁布日期：2009-9-16

1.目的

为规范和指导本实验室对食品中甲醛次硫酸氢钠的测定，特制定本作业指导书。

2.范围

适用于本实验室对食品中甲醛次硫酸氢钠的测定工作。

3.原理

在磷酸酸性条件下对样品进行蒸储，用水吸收，吸收液中的甲醛与乙酰内酮及钱离子反应生成黄色物质，

与标准系列比较定量。

4.仪器与试剂

4.1乙酰丙酮溶液：在100矶蒸储水中加入醋酸镂25g,冰醋酸3mL和乙酰丙酮0.40mL,振摇促溶，储备

于棕色瓶中，此液可保存1个月。

4.2分光光度计

4.310%(V/V)磷酸溶液

4.4液体石蜡

4.5甲醛标准储备液：取甲醛1g放入盛有5mL水的100疝容量瓶中精密称量后，加水至刻度，从该溶液

中吸取10.0mL放入碘量瓶中加0.Imol/L碘溶液50mL,Imol/LKOH溶液20mL，在室温放置15min后，加

10%H2S0415mL,用0.Imol/LNa2s2O3滴定(以1mL新配制的淀粉溶液为指示剂)。另取水10mL同样操作进行

空白实验。

4.6甲醛标准使用液：将标定后的甲醛标准储备液用水稀释至5ug/mLo

5.操作步骤

5.1样品处理：称取经粉碎的样品5T0g,置于蒸储瓶中，加入蒸阳水20mL,液体石蜡2.5mL和10%磷酸溶

液10mL,立即通水蒸气蒸储，冷凝管下口应事先插入盛有10mL蒸懦水且置于冰浴的容器中，准确收集蒸储

液至150mL,另作空白蒸僧。

5.2显色操作：视检品中吊白块含量高低，吸取样品蒸储液2T0mL,补充蒸播水至10mL,加入乙酰丙酮溶

液1mL混匀，置沸水浴中3min,取出冷却，然后以蒸储水调“0”，于波长435nm处，以1cm比色杯进行比

色，记录吸光度，查标准曲线计算结果。

5.3标准曲线的制备：吸取甲醛标准应用液0、0.05、1.00、3.00、5.00、7.00mL,补充蒸储水至10mL,

以下从加乙酰丙酮溶液起同样操作。减去0管吸光度后，绘制标准曲线。

编号：HSCDC/QCFF004-2009

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食品中甲醛次硫酸氢钠的测定

颁布日期:2009-9-16

5.4计算

吊白块含量=VM5.I33V3/W2V2

式中：V「样品管相当于标准管体积，mL

每ml甲醛标准含甲醛量，ug；

5-显色操作取蒸储液体积，mL；

V「蒸储液总体积，mL；

W2-样品重,g；

5.133-甲醛换算为吊白块系数。

注：1、样品蒸储液可用了二氧化硫含量的测定，可作为在甲醛存在下确定是否有吊白块的依据；

2、因食品中甲醛次硫酸氢钠为不得检出，故也可用于定性，样品管呈黄色即为甲醛次硫酸氢钠阳性。

编号：HSCDC/QCFF005-2009

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盐酸克伦特罗的测定

颁布日期:2009-9-16

1.目的

为规范和指导本实验室对盐酸克伦特罗的测定，特制定本作业指导书。

2.范围

适用于本实验室对盐酸克伦特罗的测定工作。

3.原理

本方法的检测依据是抗原-抗体反应。将克伦特罗特异性抗体吸附在固相载体表面，加入酶标克伦特罗

结合物、克伦特罗标准溶液或样液，游离的克伦特罗、酶标克伦特罗结合物与结合在固体表面的克伦特罗

特异性抗体竞争，未结合的酶标克伦特罗结合物洗涤除去。加入酶底物，在结合酶的催化作用下，无色底

物降解产生蓝色物质。加入终止剂后颜色转变为黄色。通过酶标检测仪，在450nm波长处测吸收值。吸光

强度与试样中的克伦特罗的浓度成反比。

4.试剂盒组成

试剂1（玻璃瓶）：克伦特罗标准溶液：62.5、12.5、2.5、0.5、0.1、0.0Ug/L的标准使用液

试剂2（玻璃瓶）：冻干酶标抗原。使用前加酶标抗原稀释液.200uL稀释成储备液，4°C保存14天。用时

再稀释300倍，即吸取10uL+3mL酶标抗原稀释液可用两条酶标条。

试剂3（绿盖）：酶标抗原稀释液.

试剂4（蓝盖）：底物溶液a。

试剂5（黑盖）：显色剂溶液b。

试剂6（黄盖）：终止液。

试剂7（大瓶）：洗涤液。

包被抗体的聚苯乙烯微量反应板24孔或48孔或96孔。

5.仪器与设备

5.1酶标检测仪（带450nm波长）。

5.2小型粉碎机。

5.350uL,100uL、1000uL微量移液器。

5.4振荡器。

6.分析步骤

6.1试样处理

6.1.1尿样

尿样不用处理，取清亮尿样直接测定，如尿样内含量高可适当稀释（如果尿样混浊一定要过滤或离心直至得

到清亮尿样），若尿样不清可离心或过滤。

6.1.2肉类组织

称取5.0g粉碎的样品于刻度试管中，加25mL50mmol/LHC1溶液，混合，超声波振荡提取1小

编号：HSCDC/QCFF005-2009

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盐酸克伦特罗的测定

颁布日期:2009-9-16

时。冷至室温后过滤（必要时离心），取滤液10mL,加0.5mLImol/LNaOH,混均，再加7mL

0.50mol/L磷酸二氢钾溶液，4℃放置1小时，过滤，取滤液8.75mL（相当于1g样品）上C18固相小柱。C18

柱纯化步骤如下：用3mL甲醇洗涤柱子，流速为1滴/每秒：用3mL50nlmol/l磷酸二氢钾溶液洗涤柱子，样

品溶液上柱；用4mL50mmol/L磷酸二氢钾溶液洗涤柱子；用正压去除残留的流体；用2mL甲醇洗脱样品，

流速为15滴/分钟；水浴蒸发洗脱液；用1mL蒸储水溶解干燥的残留物，混均待测。

6.1.3饲料样品

称取2.0g研碎的饲料样品，加入2mLImol/LHCL,再加16mL蒸储水。旋流混匀，超声波振荡提取30

分钟。静置，转移出上清液，取上清液9mL,用Imol/LNaOH溶液调pH值在6.5-7.5之间，用水补至体积为

lOmLo以2000rpm离心20分钟，转移出上清液.（如果上清液仍然浑浊可提高转速或用滤纸过滤）。用蒸储

水10倍稀释上清液，待测。此时样品总的稀释倍数为100倍.

6.2分析前注意事项

分析前将所有试剂平衡至室温；按要求将有关试剂稀释至使用浓度；分析后立即将所有试剂放回4℃--

8℃冰箱；在所有培育中，避光，盖上微孔板盖.

6.3定位

根据需要设定限量法（见表1）和定量法（见表2）。取足够数量的微孔置微孔架上，记录标准品孔和试样

孔的位置。限量法时控制标准孔号中的浓度为限量值/稀释因子，并通过调节稀释因子使之浓度在0-62.5

ug/L范围内。

表1限量法微孔定位

零标准孔号样品孔号标准孔号

12345678

表2定量法微孔定位

标准孔浓度（ug/L）样品孔号

C0.10.52.512.562.5123456

6.4加试剂

在每孔中依次加入试剂，加入20uL标准溶液或试样提取液至相应微孔中；再加入100uL稀释好的酶标抗

原溶液到每个微孔中。

6.5反应摇匀，将酶标板置喑处室温（20℃—30℃）反应1小时：

6.6洗涤将微孔中液体倾倒到水池内，倒置微孔支架，在干净纸巾上轻拍，除去所有残留的液体，加

洗涤液约250PL到每个微孔中洗板，再排空液体，重复洗涤4次。

编号：HSCDC/QCFF005-2009

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盐酸克伦特罗的测定

颁布日期:2009-9-16

6.7显色每孔分别加入底物溶液a（蓝盖）和显色溶液b（黑盖）各50uL（相当于一滴），充分摇

匀，置暗处，室温（20C-30C）反应15min（每次滴溶液前先挤去2-3滴再滴入微孔。）

6.8终止加50uL（相当于一滴）终止剂（黄盖）到每孔中，摇匀。（每次滴溶液前先挤去2-3滴再

滴入微孔。）

6.9测定在450nm处，以空气为空白调零，测定吸收值。在60min内读数。

7.结果计算和表述

7.1限量法

若试样孔的吸收值小于标准孔的吸收值，即A试样孔＜A标准孔，超过限量值，为阳性。若试样孔的吸收

值大于标准孔的吸收值，即A试样QA标准扎，则小于所设限量值，为阴性。

7.2定量法

标准曲线的绘制：所测标准晶的吸收值对应克伦特罗浓度（ug/L）的半对数坐标作标准曲线图，曲线在

0.lug/L—62.5ug/L范围内应当成线性。根据试样的百分吸收值，通过标准曲线，查得相对应浓度。试

样中克伦特罗的含量X值以微克每千克（ug/kg）表示，按下式计算。

CVn

X=------

m

式中：

c-从标准曲线上查得相对应提取液中克伦特罗浓度，单位为微克每升（ug/L）：

V一试样提取液体积，单位为毫升（mL）；

n一试样稀释倍数；

m一试样质量，单位为克（g）;

计算结果表示到小数点后一位有效数字。

编号：HSCDC/QCFF006-2009

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黄曲霉毒素B1的测定

颁布日期:2009-9-16

1.目的

为规范和指导本实验室对黄曲霉毒素B.的测定，特制定本作业指导书。

2.范围

适用于本实验室对黄曲霉毒素R的的测定工作。

3.原理

本法利用固相酶联免疫吸附(ELISA)原理，通过抗黄曲霉毒素R抗体与酶标抗原、待测抗原的竞争免疫反应

以及酶的催化显色反应相结合来检测AFB”适用于食品、饲料及相关原料中AFBi含量的检测。

4.测试盒组成

4.1包被抗体的反应板：48孔或24孔

4.2A试剂：样品稀释液1瓶

4.3B试剂:AFBi标准溶液(Ing/mL)1瓶

4.4C试剂：酶标抗原2瓶或1瓶

4.5D试剂：酶标抗原稀释液1瓶

4.6E试剂：浓缩洗涤液.1瓶

4.7F试剂：显色底物液a1瓶

4.8G试剂：显色底物液b1瓶

4.9H试剂：终止液1瓶

4.10反应板支架：1块

5.实验准备

5.1样品处理：

5.1.1食品：

5.1.1.1脂肪含量小的固体样品(如大米、玉米、小米等)

表一：样品稀释表

样品允许量(Ug/kg)样品提取液(mL)A试剂(mL)样品稀释系数(K)

W50.105

W100.10.110

W150.10.215

(200.050.1520

W3()0.050.2530

W500.050.4550

称取5.0g样品(己粉碎)于100mL具塞三角瓶中，准确加入25.0mL甲醇水(1+1)溶液，振摇15min,过滤，

弃去1/4初滤液，收集试样滤液，用A试剂将一定量的滤液按表一进行稀释，摇匀，即为待测样品稀释液。

编号：HSCDC/QCFF006-2009

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第3版第0次修订

黄曲霉毒素B1的测定

颁布日期:2009-9-16

5.1.1.2酱油、醋

称取5.0g样品于251nL小烧杯中,用5mL蒸储水将试样转移至250mL分液漏斗中,加入20mL三氯甲烷，振

摇3min,静置分层，放出三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水NazSO」过滤器过滤于100mL;

蒸发皿中，再加5mL三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量

三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。挥干后冷却，准确加入25.0mL甲醇水（1+1）,

将凝结物充分溶解。此即为待测样品提取液。

5.1.1.3食用油（如菜油、色拉油、麻油、花生油等）

称取5.0g油样于25mL小烧杯中，用20mL石油酸或正己烷将试样转移至250mL分液漏斗中，准

确加入25.0mL甲醇水（1+1）溶液，加塞振摇5min,静置分层，放出下层甲醇水提取液。将甲醇水提取液按

表一稀释。将稀释后的溶液摇匀，即为待测样品稀释液。

5.1.1.4葡萄酒

准确吸取5.0mL葡萄酒，移入125mL分液漏斗中，加入20mL三氯甲烷，振摇3min,静置分层，放出三氯甲

烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水NazSO,过滤器过滤于100mL蒸发皿中，再加5mL三氯甲烷于

分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于

蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。挥干后冷却，准确加入25.0mL甲醇水（1+1）,将凝结物充分溶解。此即为

待测样品提取液。

5.1.1.5啤酒、黄酒

准确移取5.0mL样品于25mL容量瓶，准确加入12.5mL甲醇，再用蒸储水定容至25mL。振摇lOmin,此即

为待测样品液。若结果为阳性，则采用葡萄酒中AFBi的提取方法进行测定和确证。

5.1.1.6花生

样品去皮粉碎（刀切或剪切），檄5.0g于100mL具塞三角瓶中。加入25.0mL甲醇水（1+1）和20mL正己烷（或

石油酸），振摇10nlin,过滤于分液漏斗中，静置分层，放出下层液，按表一用A试剂进行稀释，摇匀，此

即为待测样品稀释液。

5.1.1.7月饼、桃酥、花生酱等

取10.0g试样于250mL具塞锥形瓶中，加入50.0mL甲醇水（1+1）提取液和20mL正己烷（或石油酸），加塞振

荡15min,过滤，收集滤液于分液漏斗中，静置分层。待下层甲醇水溶液澄清后，放出甲醇水溶液于另一锥

形瓶中。

准确吸取10.0mL下层甲醉水提取液（相当于2.0g样品）于125mL分液漏斗中，加入20mL三氯甲

烷，加塞振摇3min,静置分层（如有乳化现象可滴加甲醇促使分层）。放出三氯甲烷层，经盛有约5g预先用

三氯甲烷湿润的无水硫酸钠过滤器过滤于100mL蒸发皿中，再加5mL三氯甲烷于分液漏斗

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黄曲霉毒素B1的测定

颁布日期:2009-9-16

中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗过滤器，洗液并于蒸发皿中。

将蒸发皿放入通风橱，65℃水浴通风挥干，冷却。准确加入10.0mL甲醇水（1+1）,将凝结物充分溶解。此

即为待测样品提取液。

5.1.1.8面粉

称取5.0g面粉样于100mL具塞三角瓶中，准确加入25.0mL甲醇水（1+1）溶液，振荡15min,过滤，弃去1

/4初滤液，收集试样滤液，即为待测样品提取液。

若出现假阳性结果，则用三氯甲烷法提取，方法如下：

移取10.0g面粉样于100mL具塞三角瓶中，加少量水湿润，准确加入50.0mL三氯甲烷，塞后滴水封严。

振荡15min.静置，过滤于100mL三角瓶中。立即吸取25.0mL滤液（相当于5.0g样品）于100mL蒸发皿中,

65℃水浴通风挥干。冷却，准确加入25.0mL甲醉水（1+1）溶液，充分溶解凝结物，即为待测样品提取液。

5.1.2饲料

5.1.2.1一般饲料及原料.

称取5.0g样品于100mL具塞三角瓶中，准确加入25.0mL甲醇水（1+1）溶液，振荡15min,过滤，弃去初

滤液。收集滤液。滤液按样品稀释表用A试剂适当稀释，摇匀，即为待测样品稀释液。

5.1.2.2饲料浓缩料

称取5.0g样品于100mL具塞三角瓶中，准确加入25.0mL甲醇水（1+1）溶液，振荡15min,过滤，弃去初

滤液。收集滤液于试管中，准确吸取5.0mL滤液（相当于1.0g样品）于125mL分液漏斗中，加入20mL三氯

甲烷，加塞振摇5min,静置分层，放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na£0,过

滤器过滤于100mL蒸皿中，再加入5mL三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷一并滤于蒸发皿

中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并入蒸发皿中。将蒸发皿放入通风橱，65℃水浴通风挥干，冷

却。准确加入5.0mL甲醇水（1+1）溶液，充分溶解凝结物。此溶液按样品稀释表用A试剂适当稀释，摇匀即

为待测样品稀释液。

5.2试剂的配制

5.2.1每瓶C试剂中准确加入1.5mLD试剂，充分溶解，配成实验用酶标抗原溶液，2〜8℃保存。

5.2.2E试剂用300mL蒸储水配制成洗涤液。

6.实验步骤

6.1将测试盒平衡至室温。

6.2小孔编号：根据需要截取相当孔数放置反应板支架上。13号孔为标准对照孔，其余孔为样品孔。

6.3洗涤：每孔加入250uL左右洗涤液，洗液不得溢出，放置一分钟后，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，

重复洗板一次。

6.4反应物组成：按下表所列，依次加入配制好的溶液及待测样品稀糅液。

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黄曲霉毒素B1的测定

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孔号

探什久什

12345678910

150uLABA.....稀释后样品液

250uLDCCCCCCCCC

3摇匀

6.5反应：将反应板放入37℃恒温培养箱中孵育30mino

6.6洗涤：取出反应板，用力甩掉反应液，拍干。每孔加入250HL左右洗涤液，洗液不得溢出，放置2分

钟后，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，重复洗板4次。

6.7显色：每孔分别加入显色底物液a（F试剂）和显色底物液b（G试剂）各50uL,摇匀，将反应板放入37℃

恒温培养箱中显色15分钟，目视法测定。（注：可适当延长显色时间，使颜色加深，以利目视。）

6.8目视法测定：先比较「3号孔颜色。若3号孔（阴性孔）颜色最深，2号孔（阳性孔）次之，1号孔（空白孔）

接近无色，说明试剂有效及操作无误。比较样品孔与2号孔（阳性孔）颜色，若浅者，则为阳性，若深者，

则为阴性，若颜色接近，则用仪器法或国标法验证。

6.9仪器法测定：每孔分别加入终止液（H试剂）50uL,然后用酶标测定仪（或黄曲霉毒素B,专用测定仪）在

450nm波长处测定各孔的吸光度A值，若A样品〈A阳性孔，（ing/mL）为阳性，若

A样品2A阳性孔（lng/心为阴性。

6.10结果判断

6.10.1限量测定：

如样品显阳性，则其AFBi含量为：

AFBi含量（ug/kg）＞KXlug/kg•

K：为样品稀释系数；

6.10.2定量测定:

6.10.2.1标准曲线法:

将浓度为50ng/mL的AFBi标准溶液用A试剂稀释成0,0.1,0.5,1,5,10ng/mL的标准工作溶液，设定

标准孔位，按上述实

验步骤测定相应的吸光度A值，并绘制标准曲线。

横坐标为标准液浓度的常用对数值，纵坐标为各标准液孔A值与标准浓度为Ong/ml的A值的比值（A标准液

/Agg/m）。通过查标准曲线可得C值，按下列公式计算出样品中AFBi的含量：••

AFBi含量（ug/kg）=CXK

编号：HSCDC/QCFF006-2009

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黄曲霉毒素B1的测定

颁布日期:2009-9-16

式中：C：稀释后样品提取液中AFBl,含量(ng/ml.)；

K：样品稀释系数；

6.10.2.2经验公式法(两点定量)：

用A试剂将适量B试剂稀释10倍，配制成0.Ing/mL标准溶液，加入3号孔，其余按上述实验步骤测

定相应的吸光度A值。按下列公式计算样品中AFB,的含量：

编号：HSCDC/QCFF007-2009

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芝麻油掺伪检验程序

颁布日期：2009-9-16

1.目的

为规范和指导本实验室对芝麻油掺伪的检验，特制定本作业指导书。

2.范围

适用于本实验室对芝麻油掺伪的检验工作。

3.原理

用氯仿溶解的油样与硫酸反应，经振摇后生成•种稳定的桔红色化合物，颜色的深浅与香油的浓度成正比，

根据硫酸层的颜色即可比色定量。

4.试剂

4.1氯仿;

4.2浓硫酸：

4.3香油参考溶液：精确称取纯香油1.0g于100mL容量瓶内加氯仿至刻度，此液每mL含0.01g纯香油。

5.操作

51香油标准色列的制备:精确吸取香油参考溶液0、0.50、0.75、1.0、1.25、1.5、1.75、2.0、2.5mL（分

别含。0.005>0.0075、0.01、0.0125、0.015、0.0175、0.02、0.025g香油）于10mL干燥的比色管中，

加氯仿至5mL,混匀，沿管壁加硫酸2mL,室温下振摇Imin,静置2min,待分层后硫酸层置于明亮（或日

光灯下）处作目视比色。

5.2样品测定：准确称取油样（约0.2g）于10mL比色管中。加氯仿至刻度，混匀，吸取1.0mL于10mL比

色管中，加氯钻至5mL,以下按方法操作，并与香油标准色列进行比色，计算香油的百分含量。

5.3现场测定：将油样存放在室温下，用事先经分析天平标定的取样管吸取油样10滴（约0.2g）［取样管

的标定方法：将油的温度固定与现场取样的温度相同（室温23±2℃）,用取样管吸取油样于分析天平称

量每10滴油的重量，每支吸管连续称量5次，取其平均值的重量于10mL比色管内，加氯仿至刻度，混匀，

吸取1.0mL按方法操作及比色定量。

5.4计算

香汕小）=样品相当于标准管香油的含量（g）+取样量（g）X吸取稀释后样品量（mL）/样品稀释总体

积（mL）X100%

编号：HSCDC/QCYQ001-2009

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DDB-303A型便携式电导率仪操作规程

颁布日期:2009-9-16

1.目的

为规范和指导DDB-303A型便携式电导率仪操作和使用，特制定本作业指导书。

2.范围

适用于用DDB-303A型便携式电导率仪进行分析测试及仪器的维护。

3.授权使用人：程胜

4.工作原理

在外电场作用下，电解质溶液的正负离子以相反的方向移动，产生导电现象，遵循欧姆定律，在

一定温度下，电解质的导电能力与电解质的浓度成正比。

5.基本资料：

本仪器用于测量溶液的电导率。

6.性能参数：

6.1测量范围为0-105us/cm

6.2电子单元基本误差：±1.0%(fs)±1个字；仪器基本误差：1.5%(fs)±1个字；电子单元基本补偿

误差：±1.0/(fs)土1个字；手动温度补偿范围：15-35C,基准温度25℃;电子单元稳定性误差：土0.66%

(fs)±1个字/3h;电子单元重复性误差：±0.33%(fs)±1个字.

7.仪器使用条件

7.1环境温度：5-40℃

7.2相对湿度：不大于85%

7.3使用电源：6F229V干电池一节

7.4无强磁场干扰

7.5无腐蚀性气体

8.所用试剂：优级纯KCL

9.操作步骤：

9.1根据被测介质电导率的高低选用求同常数的电极和不同的测量方式；

9.2装入9V干电池,按下开关按钮，预热10分钟；

9.3用温度计测量溶液温度，调节“温度”补偿电位器,使温度指示与被测溶液温度一致；

9.4根据使用电极的电极常数，按下“校准”键，调节“校准”电位器，使数字显示与电极常数标示

编号：HSCDC/QCYQ001-2009

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DDB-3O3A型便携式电导率仪操作规程

颁布日期：2009-9-16

值相对应；

9.5校准完毕后,按下“测量”键,把电极浸入待测溶液中，根据显示屏上的读数记录被测溶液的电导率值；

9.6测量完毕,关闭电源开关,用高纯水清洗电极。

10.维护保养：

用高纯水清洗电极，电极插头座防潮，仪器长期不用取出电池.

11.检定及校准：

本仪器每年检定一次.

12.期间核查

12.1核查步骤:

依以上步骤，测定电导率质控标样6次，计算平均值，相对标准偏差，及相对误差。相对标准偏差不得大

于1%,相对误差不得大于3%,否则须重新核查。

12.2核查频次：每年1次。

编号：HSCDC/QCYQ002-2009

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723可见分光光度计操作程序

颁布日期:2009-9-16

1.目的

为规范和指导723可见分光光度计操作和使用，特制定本作业指导书。

2.范围

适用于用723可见分光光度计进行分析测试及仪器的维护。

3.授权使用人：程胜、陈静、江需、梅强正、樊敏皓

4.工作原理

由光源发出连续光线,经滤光片和球面发射镜至单色器的入射狭缝聚焦成象后经平面反射镜至准直镜,产生

平行光射至光栅,色散后又经准直镜聚焦在出射狭缝上成一连续光谱，由出射狭缝射出一定波长单色光,通

过溶液再射到光电管上,通过光电信号的转换将结果送至LED数码管显示.

5.基本资料：

本仪器用于无机分析,金属分析等.

6.性能参数：

6.1波长范围：330-800nm,波长准确度：±1.Onm,波长重复性:0.5nm,带宽:6nm

6.2杂光:0.5%（360nm）,透射比测定范围：0-100%,吸光度测定范围：0T.999（A）

6.3透射比准确度：±0.透,透射比/吸光度转换误差:±0.002A（在0.5A处）,±0.透4A（在1A处）

6.4漂移:0.5%（亮电流）0.2%（暗电流）

7.仪器使用条件

7.1环境温度：5-35℃

7.2相对湿度：不大于85%

7.3使用电源：220±22V,50±lHz之间，良好接地

7.4无强磁场干扰

7.5无腐蚀性气体

8.所用试剂:干燥剂

9.操作步骤：

9.1准备工作：

9.1.1通电试验：开启电源开关，“电源”指示灯亮，仪器进入自测程序，当数字自动返回至今500.00

时表示通过自测试；

9.1.2波长设定:按“入/GOTO”键,设定测定波长；

9.1.3选择比色皿：

9.1.4仪器预热30分钟左右。

编号：HSCDC/QCYQ002-2009

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第3版第0次修订

723可见分光光度计操作程序

颁布日期:2009-9-16

9.2测量:

9.2.1调零,0%T.

9.2.2调整参比，100%Te

9.2.3比色皿误差校正。

9.2.4测量。

比色完毕，切断电源，清洗比色皿，做好使用登记。

10.维护保养：

保持仪器清洁干燥,定期波长校正,长时间不用应定期通电.

11.检定及校准：

本仪器每年检定一次.

12.期间核查：

12.1核查步骤：

依照《生活饮用水标准检验方法》（GB/T5750-2006）配制铝（六价）标准系列溶液，测定铭（六价）

质控样，连续测定6次，计算平均值，相对标准偏差及相对误差。相对标准偏差不得大于1%,相对误差不

得大于3%,否则须重新核查。

12.2核查频次：每年1次。

编号：HSCDC/QCYQ003-2009

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AB204电