GB∕T 43240-2023 毛发中55种滥用药物及代谢物检验 液相色谱-质谱法（正式版）

毛发中55种滥用药物及代谢物检验液相色谱-质谱法2023-09-07发布国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国公安部提出。本文件由全国刑事技术标准化技术委员会(SAC/TC179)归口。本文件起草单位：公安部鉴定中心、泰安市公安局、公安部禁毒情报技术中心、浙江警察学院、上海市公安局、德州市公安局、呼伦贝尔市公安局。1毛发中55种滥用药物及代谢物检验液相色谱-质谱法本文件描述了人体毛发中55种滥用药物及代谢物的液相色谱-质谱(LC-MS)定性和定量检验方法。本文件适用于人体毛发中55种滥用药物及代谢物的定性分析和定量分析。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GA/T122毒物分析名词术语3术语和定义GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。4原理以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对毛发中甲基苯丙胺等55种滥用药物及代谢物(具体信息见附录A)进行提取。采用液相色谱-质谱法检测，以保留时间、质谱特征离子对和离子对丰度比作为定性判断依据；以色谱峰面积(或峰面积比值)作为定量依据，采用外标法或内标法进行定量分析。5试剂和材料5.1试剂5.1.5含0.01%甲酸的2mmol/L甲酸铵溶液(以配制1000mL为例):称取甲酸铵0.126g,加水溶解后，再加入0.1mL甲酸，用水稀释至1000mL,混匀。5.1.6标准物质储备液：根据甲基苯丙胺等55种标准物质的纯度和盐型换算后，各称取适量，用乙腈分别配制成1.0mg/mL单一标准物质储备液，一18℃以下保存，有效期12个月。或采用市售单一标2一标准工作溶液。一18℃以下保存，有效期6个月。试验中所需其他质量浓度的单一标准物质工作溶液均由10μg/mL的单一标准工作溶液用乙腈稀释得到。5.1.8100ng/mL混合标准物质工作溶液：分别移取10μg/mL单一标准工作溶液适量，用乙腈配制成100ng/mL的混合标准工作溶液。一18℃以下保存，有效期2个月。试验中所需其他质量浓度的混合标准物质工作溶液均由100ng/mL混合标准物质工作溶液用乙腈稀释得到。5.1.9内标储备液：根据甲基苯丙胺-ds等内标物质的纯度和盐型换算后，各称取适量，用乙腈分别配制成1.0mg/mL内标储备液，-18℃以下保存，有效期12个物可选择附录B中表B.1给出的组内同位素内标，或选择目标物对应的同位素内标。5.1.1020ng/mL内标工作溶液：准确移取内标储备液适量，分别用甲醇配制成20ng/mL的内标工作溶液。现用现配。试验中所需其他质量浓度的内标工作溶液均由内标储备液用甲醇稀释得到。内标工作溶液的质量浓度可根据实际情况调整。5.2.2具盖研磨管。6仪器和设备6.2研磨仪。6.3振荡器。6.4电子天平：定性分析用电子天平实际分度值(d)小于或等于0.1mg,定量分析用电子天平实际分度值(d)小于或等于0.01mg。7操作方法7.1定性分析取适量毛发置于具盖离心管中，加入20mL水，振荡1min,弃去水液，加入20mL丙酮，振荡1min,弃去丙酮液，重复使用水和丙酮各清洗一次，清洗后的毛发晾干备用。清洗用水和丙酮体积可根据实际情况调整。将7.1.1.1.1中晾干后的毛发剪碎至长度约为1mm,称取20mg置于具盖研磨管中，加入1mL甲3醇，将毛发研磨至粉末状，静置5min,上清液经有机系微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器取空白毛发样品，按照7.1.1.1.1清洗、晾干，剪碎至长度约为1mm后，平行称取两份，每份约作溶液，作为添加样品(添加样品的质量分数为0.05ng/mg),与检材样品平行操作，得到空白样品提取空白毛发样品应选择未经染色、涂抹发胶、喷洒定型摩丝等人工处理过的健康志愿者的黑色毛发。以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整a)色谱柱：双苯基色谱柱(100mm×2.1mm,1.7μm)或其他等效柱；d)流动相A:含0.01%甲酸的2mmol/L甲酸铵溶液；e)流动相B:甲醇；g)洗脱方式：梯度洗脱，梯度洗脱条件见表1:j)检测方式：多反应离子监测(MRM);k)气帘气(CUR):0.21MPa;1)喷雾气(GS1):0.34MPa;m)辅助气(GS2):0.38MPa;p)定性、定量离子和锥孔电压、碰撞能量等MS参考条件见附录B。表1梯度洗脱条件时间min4分别吸取空白样品提取液、添加样品提取液、检材样品提取液、1.0ng/mL混合标准物质工作溶液，按7.1.2.1仪器条件进样检测。进样顺序和进样次数应确保结果有效。7.2定量分析当毛发空白样品和毛发检材样品的基质比较接近时，如毛发空白样品和毛发检材样品提取液均为无色透明液体，或毛发检材样品不存在明显的染色、涂抹发胶、喷洒定型摩丝等情况，可任意选用外标法或内标法进行定量分析。当毛发空白样品和毛发检材样品的基质差异较大时，如毛发空白样品提取液为无色透明液体但毛发检材样品提取液呈现不同颜色，或毛发检材样品存在明显的染色、涂抹发胶、喷洒定型摩丝等情况，宜选用内标法进行定量分析。取按照7.1.1.1.1清洗、晾干后的毛发检材样品，剪碎至长度约为1mm后，平行称取两份，每份20mg,分别置于具盖研磨管中，按照7.1.1.1.2操作，得到检材样品提取液，供仪器检测。取按照7.1.1.1.1清洗、晾干后的空白毛发样品，剪碎至长度约为1mm后，平行称取两份，每份20mg,添加目标物标准工作溶液，与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供仪器检测。检材样品中目标物含量应为添加样品中目标物含量的(100±50)%。取按照7.1.1.1.1清洗、晾干后的毛发检材样品，剪碎至长度约为1mm后，平行称取两份，每份20mg,分别置于具盖研磨管中，按照7.1.1.1.2操作，得到检材样品提取液，供仪器检测。取按照7.1.1.1.1清洗、晾干后的空白毛发样品，剪碎至长度约为1mm后，平行称取多份，每份20mg,添加目标物标准工作溶液，配制成系列质量浓度的添加样品，与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供仪器检测。校准曲线应不少于5个质量浓度点，呈良好线性关系(r²≥0.99)。检材样品中目标物的含量应在线性范围内。取按照7.1.1.1.1清洗、晾干后的毛发检材样品，剪碎至长度约为1mm后，平行称取两份，每份20mg,分别置于具盖研磨管中，加入内标工作溶液1mL,将毛发研磨至粉末状，上清液经有机系微孔滤膜过滤，得到检材样品提取液，供仪器检测。取按照7.1.1.1.1清洗、晾干后的空白毛发样品，剪碎至长度约为1mm后，平行称取两份，每份20mg,添加目标物标准工作溶液，加入内标工作溶液1mL,与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供仪器检测。检材样品中目标物含量应为添加样品中目标物含量的(100±50)%。取按照7.1.1.1.1清洗、晾干后的毛发检材样品，剪碎至长度约为1mm后，平行称取两份，每份20mg,分别置于具盖研磨管中，加入内标工作溶液1mL,将毛发研磨至粉末状，上清液经有机系微孔滤膜过滤，得到检材样品提取液，供仪器检测。5GB/T43240—2023取按照7.1.1.1.1清洗、晾干后的空白毛发样品，剪碎至长度约为1mm后，平行称取多份，每份20mg,添加目标物标准工作溶液，配制成系列质量浓度的添加样品，加入内标工作溶液1mL,与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供仪器检测。校准曲线应不少于5个质量浓度点，呈良好线性关系(r²≥0.99)。检材样品中目标物的含量应在线性范围内。7.2.3仪器检测分别吸取检材样品提取液、添加样品提取液，按7.1.2.1仪器条件进样分析。每份检材样品提取液和添加样品提取液各进样分析2～3次。记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物的保留时间和峰面积值，按公式(1)计算检材样品中目标物的含量。w——检材样品中目标物的含量，单位为纳克每毫克(ng/mg);A——检材样品提取液中目标物的峰面积；A′—-添加样品提取液中目标物的峰面积；o’—-添加样品中目标物的含量，单位为纳克每毫克(ng/mg)。记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物的保留时间和峰面积值，以添加样品提取液中目标物的峰面积的平均值为纵坐标、添加样品中目标物的含量为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据检材样品提取液中目标物的峰面积值，按公式(2)计算出检材样品中目标物的含量。…(2)w——检材样品中目标物的含量，单位为纳克每毫克(ng/mg);y——检材样品提取液中目标物的峰面积；a——线性方程的斜率；b——线性方程的截距。记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物和内标的保留时间和峰面积值，按公式(3)计算检材样品中目标物的含量。6GB/T43240—2023式中：……w——检材样品中目标物的含量，单位为纳克每毫克(ng/mg);A——检材样品提取液中目标物的峰面积；A'——添加样品提取液中目标物的峰面积；A;——检材样品提取液中内标物的峰面积；A’——添加样品提取液中内标物的峰面积；o’——添加样品中目标物的含量，单位为纳克每毫克(ng/mg)。7.2.4.1.4内标-校准曲线法记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物和内标的保留时间和峰面积值，以添加样品提取液中目标物与内标物的峰面积比为纵坐标、添加样品中目标物的含量为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据检材样品提取液中目标物及内标的峰面积值，按公式(4)计算出检材样品中目标物的含量。式中：w——检材样品中目标物的含量，单位为纳克每毫克(ng/mg);y——检材样品提取液中目标物与内标物的峰面积比值；a——线性方程的斜率；b线性方程的截距。……………7.2.4.2相对相差计算记录7.2.3.1中计算得到的检材样品中目标物的含量，按公式(5)计算相对相差：…(5)式中：RD——相对相差；w₁、w₂——两份检材样品中目标物的含量；——两份检材样品中目标物含量的平均值。8结果评价8.1定性结果评价8.1.1阳性结果评价在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致(相对误差在±2.5%之内)、目标物的定性离子对(至少两对)与标准工作溶液一致，且离子对丰度比与质量浓度接近的标准工作溶液相比，相对偏差不超过表2规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。7GB/T43240—2023表2离子对丰度比的最大允许相对偏差范围离子对丰度比最大允许相对偏差8.1.2阴性结果评价检材样品未出现与目标物标准工作溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准工作溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。8.2定量结果评价如果检材样品中目标物含量的RD小于或等于20%,定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中目标物含量的RD大于20%,定量数据不可靠，应按7.2重新提取检验。相关谱图及检出限、线性范围见附录C。8(资料性)滥用药物及代谢物具体信息甲基苯丙胺等55种滥用药物及代谢物相关信息见表A.1。表A.155种滥用药物及代谢物相关信息序号中文名称CAS号英文简称或缩写化学式1甲基苯丙胺Methamphetamine(MA)C₀H₁₅N2苯丙胺Amphetamine(AM)C₉H₁₃N3替苯丙胺4764-17-4Tenamfetamine(MDA)C₀H₁₃NO₂4二亚甲基双氧安非他明42542-10-9(±)-N,alpha-dimethyl-3,4-(methylenedioxy)phenethylamine(MDMA)C₁H₁₅NO₂53,4-亚甲二氧基-N-乙基安非他明82801-81-83,4-Methylenedioxy-N-Ethylamphetamine(MDEA)C₂H₁₇NO₂64-甲氧基甲基苯丙胺22331-70-0N-Methyl-1-(4-methoxyphenyl)propan-2-amine(PMMA)C₁H₇NO74-甲氧基苯丙胺1-(4-methoxyphenyl)propan-2-amine(PMA)C₀H₅NO8安非拉酮90-84-6AmfepramoneCi₃H₉NO9海洛因HeroinC₂₁H₂₃NO₅乙酰可待因6703-27-1AcetylcodeineC₂₀H₂₃NO₄可待因CodeineC₈H₂₁NO₃吗啡MorphineC₇H₁₉NO₃O⁶-单乙酰吗啡2784-73-86-AcetylmorphineCgH₂₁NO₄双氢可待因DihydrocodeineC₈H₂₃NO₃蒂巴因ThebaineCgH₂₁NO₃哌替啶Meperdine/PethidineC₁₅H₂₁NO₂丁丙诺啡52485-79-7Buprenorphine美沙酮MethadoneC₂₁H₂₇NO地芬诺酯915-30-0DiphenoxylateC₃₀H₃₂N₂O₂曲马多27203-92-5TramadolC₁₆H₂₅NO₂羟考酮OxycodoneC₈H₂₁NO₄9GB/T43240—2023表A.155种滥用药物及代谢物相关信息(续)序号中文名称CAS号英文简称或缩写化学式可卡因CocaineC₇H₂₁NO₄苯甲酰爱康宁BenzoylecognineC₆H₉NO₄氯胺酮6740-88-1KetamineC₃H₁CINO去甲氯胺酮79499-59-5NorketamineC₁H₁CINO氟胺酮2-(2-fluorophenyl)-2-(methylamino)cyclohexan-1-one(2-FDCK)Ci₃H₆FNO去甲氟胺酮2-amino-2-(2-fluorophenyl)cyclohexan-1-oneC₁₂H₄FNO替来他明TiletamineC₁₂H₁₇NOS甲卡西酮5650-44-2Methcathinone(MC)C₀H₃NO卡西酮5265-18-9CathinoneC₉H₁NO4-甲基甲卡西酮4-Methylmethcathinone(4-MMC)C₁H₁₅NO4-甲氧基甲卡西酮MethedroneC₁H₁₅NO₂4-氯甲卡西酮4-Chloromethcathinone(4-CMC)C₀H₁₂CINO3,4-亚甲二氧基甲卡西酮MethyloneCH₃NO₃3,4-亚甲二氧基乙卡西酮EthyloneC₂H₁₅NO₃芬太尼437-38-7FentanylC₂₂H₂₈N₂O乙酰芬太尼3258-84-2AcetylfentanylC₂₁H₂₆N₂O呋喃芬太尼FuranylfentanylC₂₄H₂₆N₂O₂奥芬太尼OcfentanylC₂₂H₂₇FN₂O₂地西泮439-14-5DiazepamC₁₆H₁₃CIN₂O劳拉西泮846-49-1LorazepamC₁₅H₀Cl₂N₂O₂氯硝西泮ClonazepamC₁₅H₀ClN₃O₃7-氨基氯硝西泮4959-17-57-AminoclonazepamC₁₅H₁₂CIN₃O去甲西泮NordiazepamC₅H₁ClN₂O替马西泮846-50-4TemazepamC₁₆H₁₃CIN₂O₂2'-氯地西泮2894-68-0DiclazepamC₁H₁₂Cl₂N₂O氯噻西泮33671-46-4ClotiazepamC₁₆H₁₅ClN₂OS阿普唑仑28981-97-7AlprazolamC₇H₃ClN表A.155种滥用药物及代谢物相关信息(续)序号中文名称CAS号英文简称或缩写化学式三唑仑28911-01-5TriazolamC₇H₁₂Cl₂N₄咪达唑仑59467-70-8MidazolamC₁₈H₁₃CIFN₃氟阿普唑仑28910-91-0FlualprazolamC₇H₁₂CIFN艾司唑仑29975-16-4EstazolamCi₆H₁₁ClN₄氯氮平5786-21-0ClozapineCi₈H₁₉ClN₄氯丙嗪ChlorpromazineCrH₄CIN.S异丙嗪PromethazineC₇H₂₀N₂S(资料性)MS参考条件甲基苯丙胺等55种滥用药物及代谢物的分组情况、参考保留时间和MS参考条件(定性定量离子分组检测目标物参考保留时间min定性定量离子对锥孔电压V碰撞能量甲基苯丙胺苯丙胺替苯丙胺二亚甲基双氧安非他明3,4-亚甲二氧基-N-乙基安非他明208.2>163.0*208.2>133.04-甲氧基甲基苯丙胺4-甲氧基苯丙胺安非拉酮206.1>133.0*206.1>105.0甲基苯丙胺-ds(内标)海洛因370.2>268.2*370.2>165.0乙酰可待因342.2>225.2*342.2>165.3可待因300.2>199.2*300.2>165.3吗啡286.1>201.2*286.1>165.3GB/T43240—2023分组检测目标物参考保留时间min定性定量离子对锥孔电压碰撞能量O⁶-单乙酰吗啡328.1>165.0*328.1>192.0双氢可待因302.5>199.3*302.5>201.2蒂巴因312.2>58.2312.2>266.2*哌替啶6.71248.1>220.1*248.1>174.0丁丙诺啡468.1>396.0*468.1>414.0美沙酮8.92310.2>265.2310.2>105.1地芬诺酯9.35453.3>425.1*453.3>187.4曲马多6.47264.2>58.0*264.2>246.2羟考酮316.2>298.1*316.2>241.1O⁶-单乙酰吗啡-d₃(内标)331.2>165.1331.2>211.1可卡因6.88304.1>182.2*304.1>150.2苯甲酰爱康宁6.68290.2>168.3*290.2>105.2可卡因-d₃(内标)6.88307.2>185.2*307.2>153.2氯胺酮238.1>125.1*238.1>207.1去甲氯胺酮6.39224.1>207.1*224.1>125.1氟胺酮6.25222.2>163.0*222.2>191.0GB/T43240—2023分组检测目标物参考保留时间min定性定量离子对锥孔电压V碰撞能量去甲氟胺酮208.1>191.0208.1>163.0替来他明6.50224.0>151.1*224.0>96.9氯胺酮-d₁(内标)242.1>129.1*242.1>211.1甲卡西酮164.0>146.0*164.0>130.0卡西酮4.76150.0>132.0*150.0>117.0"4-甲基甲卡西酮178.1>160.1*178.1>145.14-甲氧基甲卡西酮194.1>176.0*194.1>161.14-氯甲卡西酮6.01198.1>145.1*198.1>180.03,4-亚甲二氧基甲卡西酮208.0>160.0*208.0>190.13,4-亚甲二氧基乙卡西酮222.1>174.1*222.1>204.1卡西酮-d₅(内标)4.76155.3>137.0*155.3>122.0芬太尼337.2>188.3*337.2>105.2乙酰芬太尼323.2>188.1*323.2>105.1呋喃芬太尼375.2>188.1*375.2>105.1奥芬太尼371.2>188.1*371.2>105.1芬太尼-d₅(内标)342.2>193.3*342.2>110.2地西泮9.60285.1>154.1*285.1>193.3劳拉西泮8.39321.1>275.1*321.1>303.1氯硝西泮8.58316.1>270.0*316.1>214.0GB/T43240—2023分组检测目标物参考保留时间min定性定量离子对锥孔电压V碰撞能量7-氨基氯硝西泮286.1>222.2*286.1>250.1去甲西泮8.95271.2>140.2*271.2>208.1替马西泮9.18301.2>255.2*301.2>283.12'-氯地西泮9.38319.1>291.1*319.1>154.2氯噻西泮9.73319.1>291.0*319.1>154.2阿普唑仑9.31309.1>281.1*309.1>274.2三唑仑9.14343.2>308.2*343.2>315.2咪达唑仑8.87326.2>291.4*326.2>244.2氟阿普唑仑9.04327.1>292.1*327.1>1223.1艾司唑仑9.18295.2>267.3*295.2>205.2氯氮平327.3>270.1*327.3>296.3氯丙嗪8.80319.3>86.2*319.3>246.2异丙嗪8.27285.2>86.1*285.2>198.1地西泮-dg(内标)9.60293.1>157.1*293.1>196.3(资料性)C.1甲基苯丙胺等55种滥用药物及代谢物的LC-MS/MS相关谱图甲基苯丙胺等55种滥用药物及代谢物的LC-MS/MS相关谱图见图C.1～图C.55。xic1rom方?上wt2isanple63}-41-1,+MHM11sdra1stsns)A-Ilaf121:3.05.1864.1eGimincrin=runGB/T43240—2023图C.4MDMA的LC-MS/MS图寸二/nn图C.6PMMA的LC-MS/MS图ept:.E1.5cTI.lle!图C.8安非拉酮的LC-MS/MS图图C.9海洛因的LC-MS/MSGB/T43240—2023r图C.10乙酰可待因的LC-MS/MS图rf:mln图C.11可待因的LC-MS/MS色谱图图C.12吗啡的LC-MS/MS图se;密t3se;密t3图C.13O⁶-单乙酰吗啡的LC-MS/MS图xIC110m方245T"2esmpeS2-0.1-1,1MRM1150snallbns;双=r、:1-21302.5:201.2)?rir图C.14双氢可待因的LC-MS/MS图图C.16哌替啶的LC-MS/MS色谱图图C.17丁丙诺啡的LC-MS/MS图图C.18美沙酮的LC-MS/MS图1;工.sps;。:玉GBsps;。:玉F}Fmn图C.22可卡因的LC-MS/MS图-1.mlnxCftom认÷:T.wi2sanple621-2.1-1,WTM:58:ransdmej.苯+te?+-2(290.2;1352)μ.l:min图C.23苯甲酰爱康宁的LC-MS/MS色谱图FJlirinll.l:min图C.24氯胺酮的LC-MS/MS色谱图GB/T43240—2023图C.25去甲氯胺酮的LC-MS/MS色谱图i.牛：T.wif2;gairpk62)-2.1-1,+M3M(50.iuvs;FKCT2(2222;131.3)u.F:ri图C.26氟胺酮的LC-MS/MS图GB/T43240—2023XIC10m方2²32i2t3mpe5Z;-0.1-1.+RW1150rsnsllbrsi:公共-1;224.3:151.1)Gsuslansnos:1edi1.0polnts)rir图C.28替来他明的LC-MS/MS图图C.