药物分析仪器分析技术（药物分析检验课件）

紫外-可见分光光度法基本原理紫外-可见分光光度法光谱法(spectrometry)是基于物质与电磁辐射作用时，测量由物质内部发生量子化的能级跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。光谱法可分为发射光谱法、吸收光谱法、散射光谱法；或分为原子光谱法和分子光谱法；或分为能级谱，电子、振动、转动光谱，电子自旋及核自旋谱等。分光光度法是光谱法的重要组成部分，是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。常用的技术包括紫外-可见分光光度法、红外分光光度法、荧光分光光度法和原子吸收分光光度法等。前言紫外-可见分光光度法紫外-可见分光光度法，简称UV-Vis。是基于物质分子对190-800nm电磁波的吸收特性建立起来的定性、定量和结构分析的方法。仪器：紫外-可见分光光度计简介紫外-可见分光光度法基本原理当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。鉴别：通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值等方法来鉴别物质。定量：在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。朗伯比尔定律吸收谱图特征紫外-可见分光光度法特征吸收，与分子结构有关鉴别特点操作简单定量准确度高专属性不如红外紫外-可见分光光度计紫外-可见分光光度法光谱法(spectrometry)是基于物质与电磁辐射作用时，测量由物质内部发生量子化的能级跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。光谱法可分为发射光谱法、吸收光谱法、散射光谱法；或分为原子光谱法和分子光谱法；或分为能级谱，电子、振动、转动光谱，电子自旋及核自旋谱等。分光光度法是光谱法的重要组成部分，是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。常用的技术包括紫外-可见分光光度法、红外分光光度法、荧光分光光度法和原子吸收分光光度法等。前言紫外-可见分光光度法紫外-可见分光光度法，简称UV-Vis。是基于物质分子对190-800nm电磁波的吸收特性建立起来的定性、定量和结构分析的方法。仪器：紫外-可见分光光度计简介紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度计光源单色器吸收池检测器信号显示系统紫外-可见分光光度法

光源紫外光源---氘灯可见光源---钨灯

光源：提供符合要求的入射光。要求：在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。紫外-可见分光光度法紫外-可见分光光度法将光源发射的复合光分解成连续光谱并可从中选出任一波长单色光的光学系统。

单色器又叫比色皿，用于盛放待测溶液和决定透光液层厚度的器件

紫外区必须采用石英吸收池可见区一般用玻璃吸收池

吸收池紫外-可见分光光度法紫外-可见分光光度法

利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号。

常用的有光电池、光电管或光电倍增管。

检测器信号显示系统

以检流计或微安表指示仪表数字显示和自动记录型装置

紫外-可见分光光度法红外分光光度法应用红外分光光度法红外分光光度法又称“红外光谱法”。简称“IR”,分子吸收光谱的一种。利用物质对红外光区的电磁辐射的选择性吸收来进行结构分析及对各种吸收红外光的化合物的定性、定量分析方法。仪器：红外分光光度计（红外光谱仪）布鲁克TENSOR系列傅立叶变换红外光谱仪简介应用（一）已知化合物的鉴别对照图谱法（ChP）用本法鉴别药物时，中国药典要求按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱，与《药品红外光谱集》中的相应标准图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种药物。（二）药品的纯度检查（三）未知化合物的研究（四）含量测定红外分光光度法特点专属性强应用范围广主要用于组分单一或结构明确的原料药红外分光光度计红外分光光度法红外分光光度法又称“红外光谱法”。简称“IR”,分子吸收光谱的一种。利用物质对红外光区的电磁辐射的选择性吸收来进行结构分析及对各种吸收红外光的化合物的定性、定量分析方法。仪器：红外分光光度计（红外光谱仪）布鲁克TENSOR系列傅立叶变换红外光谱仪简介双光束红外分光光度计由光源发出的光，被分为能量均等对称的两束，一束为样品光通过样品，另一束为参比光作为基准。这两束光通过样品室进入光度计后，被扇形镜以一定的频率所调制，形成交变信号，然后两束光合为一束，并交替通过入射狭缝进入单色器中，经离轴抛物镜将光束平行地投射在光栅上，色散并通过出射狭缝之后，被滤光片滤除高级次光谱，再经椭球镜聚焦在检测器的接收面上。检测器将上述交变的信号转换为相应的电信号，经放大器进行电压放大后，转入A/D转换单位，计算机处理后得到从高波数到低波数的红外吸收光谱图。红外光谱仪基本原理红外分光光度法制备样品的要求红外分光光度法123试样应该是单一组分的纯物质，纯度应大于98%或符合商业标准。多组分样品应在测定前用分馏、萃取、重结晶、离子交换或其他方法进行分离提纯，否则各组分的红外光谱会相互重叠，难以辩析试样中应不含游离水。因水本身有红外吸收，会严重干扰样品谱图，还会浸蚀吸收池的盐窗试样的浓度和测试厚度应选择适当，以使光谱图中大多数峰的透射比在10%～80%范围内红外分光光度法固体试样液体试样气体试样压片法：样品粉末与KBr粉末研细，压片；糊状法：样品与氟化煤油研细，置于NaCl或KBr盐片上测定；可塑样品直接滚压成薄膜，置于两盐片间进行测定。在两片透明盐窗（NaCl、KBr）之间，注入液体样品，形成厚度约为0.001～0.05mm的液膜即可用于分析。首先使用真空系统抽掉样品槽中空气，再充入一定压力的气态样品；气体样品槽两端装有单晶，NaCl、KCl、LiF、AgCl等，制成的盐窗。常用样品制备方法红外分光光度法基本原理红外分光光度法红外分光光度法又称“红外光谱法”。简称“IR”,分子吸收光谱的一种。利用物质对红外光区的电磁辐射的选择性吸收来进行结构分析及对各种吸收红外光的化合物的定性、定量分析方法。仪器：红外分光光度计（红外光谱仪）布鲁克TENSOR系列傅立叶变换红外光谱仪简介基本原理物质是由不断振动的状态的原子构成，这些原子振动频率与红外光的振动频率相当。用红外光照射有机物时，分子吸收红外光会发生振动能级跃迁，不同的化学键或官能团吸收频率不同，每个有机物分子只吸收与其分子振动、转动频率相一致的红外光谱，所得到的吸收光谱通常称为红外吸收光谱，简称红外光谱。对红外光谱进行分析，可对物质进行定性分析。各个物质的含量也将反映在红外吸收光谱上，可根据峰位置、吸收强度进行定量分析。红外光谱图红外分光光度法指纹区

1330～670cm-1密，高度敏感特征区

4000～1330cm-1疏，易辨认红外光谱图红外分光光度法特点专属性强应用范围广主要用于组分单一或结构明确的原料药色谱法认知色谱法认知色谱法（chromatography）又称色谱分析、色谱分析法、层析法，是一种分析化学中常用的分离分析方法。其中，它英文名的词根——Chrom，在古希腊语中是“颜色”的意思。色谱的本意是：印有标准颜色和名称的色表。那它究竟是如何被应用到分析化学领域的呢？这得从色谱技术的起源说起了。色谱法认知1906年，俄国的植物学家茨维特利用碳酸钙作为“固定相”，石油醚作为“流动相”，成功分离了多种植物色素，它们分离后呈现出不同的颜色条带，因此茨维特把这种分离技术称为“色谱”。色谱法的起源固定相流动相分离后的色素条带色谱法认知色谱法的发展1357246茨维特实验起源分配色谱气相色谱色谱理论联用技术……高效液相色谱HPLC纸色谱法吸附色谱色谱法认知色谱法的分类色谱法利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。根据物质的分离机制，可以分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等类别。根据固定相的几何形式，又可以分为柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法。根据两相状态，可分为气相色谱法和液相色谱法。123色谱法认知吸附色谱分配色谱利用固定相吸附中心对物质分子吸附能力的差异实现对混合物的分离，吸附色谱的色谱过程是流动相分子与物质分子竞争固定相吸附中心的过程。利用固定相与流动相之间对待分离组分溶解度的差异来实现分离。分配色谱过程本质上是组分分子在固定相和流动相之间不断达到溶解平衡的过程。交换色谱离子交换色谱利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力诧异来实现分离。4凝胶色谱待分离组分中分子量大的不能进入凝胶孔隙，很快随流动相洗脱；分子量小的进入凝胶孔隙，保留时间长，从而实现了根据分子量差异对各组分的分离。色谱法认知薄层色谱，也叫薄层层析（thinlayerchromatography，TLC），是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。薄层板固定相色谱法认知气相色谱液相色谱气相色谱是通过温度和载气的作用，将样品变为气态，在色谱柱中运动起来。但有的样品沸点太高或加热易分解，气相就不合适了，这时候可以选择用液相色谱来分析。气相色谱的推动力来自载气，而液相色谱的样品是被流动相溶解和推动的，较之气相，有了更多的选择。薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱，也叫薄层层析（thinlayerchromatography，TLC），是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法，从20世纪50年代发展起来至今，仍被广泛采用。TLC脂肪酸核苷酸氨基酸生物碱类固醇简介薄层色谱法基本原理薄层色谱是一种吸附分离法，利用试样中的各组分极性的不同，被固定相吸附的能力不同，因而各组分在固定相和流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配过程。反复多次，不同组分不断的进行差速迁移，上升的距离不一样而形成相互分开的斑点从而达到分离。差速迁移微小差异积累→较大差异→吸附能力弱的组分先流出；吸附能力强的组分后流出各组分在固定相和流动相之间不断地发生：溶解吸附再溶解再吸附薄层色谱法薄层色谱法操作——准备薄层板首先，根据被分析样品的性质选择合适的薄层板，可以手工铺板，也可以直接购买商品化的板子。商品薄层板手工铺板薄层色谱法薄层色谱法操作——点样接下来，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm左右，点样时必须注意勿损伤薄层板表面。薄层板试样原点2.0

cm薄层色谱法操作——展开将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度一般为距薄层板底边0.5-1.0cm，注意：切勿将样点浸入展开剂中，密封室盖，待展开至规定距离，取出薄层板，晾干。0.5~1.0cm薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法操作——显色待分析成分颜色不明显时，需要进行显色处理才可以检视出斑点。123光学检出法蒸汽显色法a自然光(400~800nm)；b紫外光(254nm或365nm)；c荧光数有机化合物吸附碘蒸气后显示不同程度的黄褐色斑点物理显色法用紫外照射分离后薄层后，化合物产生光加成，光分解、光氧化还原及光异构等光化学反应，导致物质结构发生某些变化，如形成荧光发射功能团。4试剂显色法a喷雾显色:显色剂溶液以气溶胶的形式均匀的喷洒在薄层；b浸渍显色:挥去展开剂的薄层板，垂直插入盛有显色剂的浸渍槽中。薄层色谱法薄层色谱法操作——测定比移值展开完毕后，测定化合物的比移值。在一定的色谱条件下，特定化合物的比移值是一个常数，因此有可能根据化合物的比移值对化合物进行鉴定。溶剂

前沿起始线ABabcfABAB薄层色谱法操作——薄层扫描薄层扫描法指用一定波长的光照射在经薄层层析后的层析板上，对具有吸收或能产生荧光的层析斑点进行扫描，用反射法或透射法测定吸收的强度，以检测层析谱。使用仪器为薄层扫描仪。薄层色谱法气相色谱法认知气相色谱法简介气相色谱仪气相色谱法（Gaschromatography，GC）是一种在有机化学中对易于挥发而不发生分解的化合物进行分离与分析的色谱技术。气相色谱是通过温度和载气的作用，将样品变为气态，在色谱柱中运动起来。气相色谱的典型用途包括测试某一特定化合物的纯度，对混合物中的各组分进行分离，同时还可以测定各组分的相对含量。仪器：气相色谱仪应用抗癫痫药中成药中的挥发成分生物碱类药物气相色谱仪气相色谱法认识气相色谱仪气相色谱仪，是指用气体作为流动相的色谱分析仪器。其原理主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异实现混合物的分离。气相色谱仪主要由五大系统组成；载气系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。气相色谱法载气系统气相色谱仪中的气路是一个载气连续运行的密闭管路系统。整个载气系统要求载气纯净、密闭性好、流速稳定及流速测量准确。典型的载气包括氦气、氮气、氩气、氢气和空气。载气的选择与纯化的要求取决于所用的色谱柱、检测器和分析项目的要求，如对有些固定相不能与微量氧气接触，又如对热传导池检测器宜用氢气作载气。（图片来自：色谱学堂）气相色谱法进样系统进样就是把气体或液体样品匀速而定量地加到色谱柱上端。样品气化室有加热线圈，以使液体样品气化。如果待分析样品是气体，气化室便不必加热。进样后，载气从进样口带着注入的样品进入色谱柱。随着现在仪器自动化程度越来越高，自动进样器已基本取代了传统的手动进样，能够帮助我们更加快速准确的将样品注入到气相色谱系统。手动进样器自动进样器气相色谱法分离系统分离系统的核心是色谱柱，它的作用是将多组分样品分离为单个组分，分为填充柱和毛细管柱两类。色谱柱放置于温度由电子电路精确控制的恒温箱内。柱温越高，样品越快通过色谱柱，但是相应地，它与固定相之间的相互作用就越少，因此分离效果越差。通常来说，柱温的选择是综合考虑分离时间与分离度的结果。气相色谱毛细管柱气相色谱法检测系统气相色谱常见的检测器有：热导检测器（TCD）、氢火焰离子化检测器（FID）、电子捕获检测器（ECD）、火焰光度检测器（FPD）、质谱检测器（MSD）等。12通用型选择型TCD（热导池检测器）、FID（氢火焰离子化检测器）、PID（光离子化检测器）、MSD（质谱检测器）FPD（火焰光度检测器）、ECD（电子捕获检测器）、NPD（氮磷检测器）高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。仪器：高效液相色谱仪简介高效液相色谱法认识高效液相色谱仪高效液相色谱仪主要由五大系统组成，分别是：高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统以及数据获取与处理系统。高效液相色谱法高压输液系统高压输液泵是HPLC的关键部件，在它的作用下，流动相以稳定的流速或压力被输送至色谱仪整个流路中。高压输液泵一般可分为恒压泵或恒流泵，恒流泵又分为串联泵和并联泵，目前普遍采用的是串联式双柱塞泵。高效液相色谱法进样系统进样系统的功能是将待分析样品引入色谱