DB34T 1839-2013 水产品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法 高效液相色谱荧光法

67.120X

04DB34

Determination

of

of

安徽省质量技术监督局

DB34/T

1839—2013前言本标准按照

GB/T

1.1-2009

给出的规则起草。本标准由安徽省质量技术监督局、安徽省食品质量安全检验方法标准化技术委员会提出。本标准由安徽省食品质量安全检验方法标准化技术委员会归口。本标准起草单位：阜阳师范学院、亳州市产品质量监督检验所。本标准主要起草人：盛良全、陈明明、徐华杰、孙春蕾、黄艳梅、杜娜娜、胡晓娟。IDB34/T

1839—2013水产品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法高效液相色谱荧光法1

范围本标准规定了水产品中硝基呋喃类药物代谢物3-氨基2-唑烷基酮（AOZ）、5-吗啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-乙内酰脲（AHD）和氨基脲（SEM）残留量的高效液相色谱荧光测定方法。本标准适用于水产品中硝基呋喃类药物代谢物3-氨基-2-唑烷基酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲和氨基脲残留量的测定。本标准适用于该产品的风险预警监测及相关科学研究。2

规范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T

6682 分析实验室用水规格和试验方法3

原理样品经稀盐酸水解，在

50℃水浴下用

2-羟基-1-萘甲醛衍生

2

h，然后，用乙酸乙酯提取。净化后用高效液相色谱法（荧光检测器）测定，外标法定量。4

试剂和材料4.1 试剂：除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合

GB/T

规定的一级水。4.2 甲醇：色谱纯。4.3 乙腈：色谱纯。4.4 乙酸乙酯：色谱纯。4.5 浓盐酸：优级纯。4.6 氢氧化钠：优级纯。4.7 硼酸。4.8 2-羟基-1-萘甲醛（2-NAH）：含量≥4.9 氯化钾。4.10 0.40

mol/L

盐酸溶液：准确量取

33.30

mL

1

4.11 0.50

mol/L

氢氧化钠溶液：准确称取

5

g

250

mL。4.12 0.025

mol/L

2-羟基-1-萘甲醛溶液：准确称取

g

2-羟基-1-萘甲醛（4.7)，用甲醇溶解并定容至

mL。4.13 标准物质：3-氨基-2-恶唑酮、5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮、1-氨基-乙内酰脲、氨基脲，纯度≥99％。1DB34/T

1839—20134.14

mg/L的标准储备溶液，-18℃冷冻避光保存，有效期

3

4.15 混合中间标准溶液：准确移取标准储备液(4.13)各

1

mL

于

10

容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为

40

mg/L

1

4.16 混合标准工作溶液：准确移取

0.5

10

mL

容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为

2

的混合标准工作溶液，4℃冷藏避光保存，有效期

1

周。建议现配现用。4.17 微孔滤膜：0.45

μm

的有机系和水系滤膜。4.18 氮气：纯度≥5

仪器和设备5.1

高效液相色谱仪：配备多波长荧光检测器。5.2

组织捣碎机。5.3

分析天平：感量

g。5.4

数显恒温水浴锅。5.5

pH

计：测量精度

±0.02

pH

5.6

高速冷冻离心机：10000

5.7

台式离心机：4000

5.8

氮吹仪。5.9

超声波清洗机。5.10

容量瓶：

l

L、100

5.11

具塞塑料离心管：

50

mL。5.12

刻度试管：l0

mL。5.13

微量进样器

100

µL、50

µµL。6

试样制备与保存从原始样品取出有代表性样品约

500

封，并标明标记，将试样置于

-18℃冷冻避光保存。注：7

样品处理7.1 水解和衍生化称取约

5.00

g

试样（精确至

0.0l

50

mL

塑料离心管中，加入

10

mL

甲醇

-0.40

mol/L

40

min

0.20

g

30

min，然后，以

r/min

40

min，倾倒上清液于

mL

玻璃试管中，再加入

2-羟基-1-萘甲醛溶液(4.

7)200

μL，振荡摇匀后超声

10

min，置

50℃恒温水浴锅中反应

2

7.2 提取和净化2时间

min流动相

A:0.01

mol/L硼酸缓冲液（pH=10.30）流动相

mol/L硼酸缓冲液

（pH=9.40，体积比

50:50）0.0070％30％3.0050％50％8.0015％85％35.0015％85％40.0070％30％45.0070％30％DB34/T

1839—2013

60℃下用氮气吹至

1

4

5

mL

乙酸乙酯，振荡提取

5

10000

r/min

离心

5

5

mL

一次，合并乙酸乙酯层。收集液在

40℃下用

N2

吹至近干后用

1

mL

乙腈:V水=

8:2)重新复溶，用

μm

转移入进样瓶待进样。7.3 工作曲线移取适量

AMOZ、AHD、AOZ、SEM

混合标准工作溶液，添加到

10

mL

甲醇

mol/L

盐酸混合

0.5

ng/mL

和

20.0

ng/mL，按

7.1～7.2

标样进行单点测定。8

测定8.1 液相色谱条件8.1.1 色谱柱：YMC-Pack

×4.6

µm，或相当者；8.1.2 柱温：40℃；8.1.3 流速；0.7

mL/min；8.1.4 进样量：20

μL；荧光检测条件：灵敏度（EUFS）：500，增益（Gain）:10；通道1：激发波长(Ex):395

nm

发射波长(Em)：463

；通道2：激发波长(Ex):260

nm

发射波长(Em)：463

8.1.5 流动相及洗脱条件见表

1。表1 流动相及梯度洗脱条件8.2 8.2 平行试验8.3 空白试验除不称取试样外，均按照以上步骤进行。9

结果计算按式(1)进行计算：3ACSACS

VC

.....................................

(1)AS

m式中：C

——

μg／kg)；Cs

——

A

——

被测试样的峰面积；As

——

Cs

V

——

样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；m

——

注：计算结果需将空白值扣除。10

方法灵敏度、回收率和精密度10.1 灵敏度本方法

AMOZ、AOZ、AHD、SEM

的检出限（LOD）低于

0.5

μg／kg；最低定量限

(

均<0.5μ

,AHD、SEM

均<1.0μ10.2 回收率添加浓度在

1

μg／kg、5

μg／kg、10

μg／kg

回收率在

80％～110％之间。10.3 精密度本方法批内和批间相