高效液相色谱分析原理 液相色谱工作原理

第第页高效液相色谱分析原理液相色谱工作原理高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显着不同，它们之间的重点差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。高效液相色谱分析原理：一、高效液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分别后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。碰到多而杂的混合物分别极性范围比较宽、还可用梯度掌控器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温仿佛，不同的是气相色谱更改温度，而HPLC更改的是流动相极性，使样品各组分在较佳条件下得以分别。二、高效液相色谱的分别过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间调配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分别。二、高效液相色谱的分别过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间调配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分别。开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行调配。调配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流杰出谱柱。调配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流杰出谱柱。组分B的调配系数介于A，C之间，第二个流杰出谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间调配系数的不同先后流杰出谱柱，达到分别之目的。不同组分在色谱过程中的分别情况，首先取决于各组分在两相间的调配系数、吸附本领、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分别的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分别情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分别最后效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。高效液相色谱之色谱柱的清洗方法

高效液相色谱是20世纪60时代后期进展起来的分别分析技术，是现代分别测定的紧要手段。问世以来，因其具有分别效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析高沸点但不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析。高效液相色谱柱是消耗品，会随使用时间或进样的次数加添，显现色谱峰高降低，峰宽加大或显现肩峰，柱效下降。需要定期进行彻底清洗和再生，不同的色谱柱清洗方法各不相同比如：

1、反相柱

分别用甲醇:水=90:10，纯甲醇（HPLC级），异丙醇（HPLC级），二氯甲烷（HPLC级）等溶剂作为流动相，依次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积.然后再以相反的次序冲洗。

2、正相柱

分别用正己烷（HPLC级），异丙醇（HPLC级），二氯甲烷（HPLC级），甲醇（HPLC级）等溶剂做流动相，顺次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积（异丙醇粘度大，可降低流速，避开压力过高）.注意使用溶剂的次序不要颠倒，用甲醇冲洗完后，再以相反的次序冲洗至正己烷，全部的流动相必需严格脱水。

3、离子交换柱

长时间在缓冲溶液中使用和进样，将导致色谱柱离子交换本领下降，用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生，反之，用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。

另外，还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向