(高清版)GBT 42113-2022 农产品中生氰糖苷的测定 液相色谱-串联质谱法

农产品中生氰糖苷的测定液相色谱-串联质谱法I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国标准化研究院提出并归口。本文件起草单位：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所、浙江大学、中国标准化研究院、北京林业大学。姚庆群。1农产品中生氰糖苷的测定液相色谱-串联质谱法1范围苷、蜀黍苷、苦杏仁苷、黑野樱苷的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于木薯、亚麻籽、高粱、竹笋、杏仁等农产品中生氰糖苷含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。试样中生氰糖苷，经80%甲醇水溶液提取，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。5试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂，以及符合GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.2试剂配制5.2.10.1%甲酸水溶液(体积分数):准确吸取1.00mL甲酸(5.1.3),用水定容至1L。5.2.280%甲醇水溶液(体积分数):量取80mL甲醇(5.1.1),加20mL水，混匀。5.2.310%甲醇水溶液(体积分数):量取10mL甲醇(5.1.1),加90mL水，混匀。5.2.430%甲醇乙腈溶液(体积分数):量取30mL甲醇(5.1.1),加70mL乙腈(5.1.2),混匀。25.3标准品8种生氰糖苷标准品：纯度≥95%,其基本信息见附录A。5.4标准溶液配制5.4.1标准储备溶液(100mg/L):分别准确称取生氰糖苷标准品约5mg(精确至0.01mg),用甲醇(5.1.1)溶解，转移至50mL容量瓶中，用甲醇(5.1.1)定容，配成质量浓度为100mg/L标准储备溶液，于一18℃保存，保存期2个月。5.4.2标准工作溶液(1mg/L):分别移取100μL的8种生氰糖苷标准储备溶液(5.4.1)于10mL棕色容量瓶中，用甲醇(5.1.1)定容，得1mg/L标准工作溶液。现配现用。5.5.1固相萃取柱：N-乙烯吡咯烷酮和二乙烯基苯共聚物填料柱(200mg/6mL),或其他等效柱。使用前用2mL甲醇和2mL水依次活化。5.5.2微孔滤膜：0.22μm有机系。6仪器和设备6.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。6.2分析天平：感量0.1mg和0.01mg。6.3分析研磨机。6.4涡旋振荡器。6.5离心机：转速≥4200r/min,带有15mL转子。6.6固相萃取装置。6.7超声波清洗器(总功率900W)。6.8氮吹仪。7试样制备与保存取500g左右样品，用水洗净表面附着的杂物，吸水纸擦干水分，切碎，装入样品入研磨杯，加入液氮冷冻，用研磨机粉碎至颗粒均匀，放入分装容器中，密封，按照第8章规定的顺序完成，或放于一18℃冻存1个月。8测定步骤8.1提取称取1g试样(精确到0.1mg)于15mL离心管中，加入3mL80%甲醇水溶液(5.2.2),涡旋振荡15s,超声提取15min,立即于4200r/min离心10min,取全部上清液；向残渣中再次加入3mL80%甲醇水溶液(5.2.2),按上述条件提取、离心，合并两次提取液于10mL容量瓶中，加水至刻度线，混匀，将活化好的固相萃取柱(5.5.1)连接到固相萃取装置(6.6),将8.1中制备的粗提液转移至萃取柱3中，待样液全部流过柱子后，弃去流出液。用2mL水淋洗柱子并彻底抽干，弃去淋洗液。用3mL30%甲醇乙腈溶液(5.2.4)洗脱柱子，分次洗脱，每次1mL,流速1mL/min,收集全部洗脱液。洗脱液氮气吹干(40℃)后，用1mL10%甲醇水溶液(5.2.3)复溶。过0.22μm滤膜(5.5.2),供液相色谱-串联质谱测定。8.3测定液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：C₁₈(50mm×2.1mm,1.8μm)色谱柱，或同等性能的色谱柱；b)流动相及洗脱条件见表1;表1流动相及梯度洗脱参考条件时间min流动相A(0.1%甲酸水溶液)%流动相B(乙腈)%22728.3.2质谱参考条件质谱参考条件如下：a)离子源：电喷雾离子源；b)扫描方式：正离子扫描模式；c)干燥气温度：325℃;d)干燥气流量：5L/min;e)鞘气温度：350℃;f)鞘气流速：11L/min;g)雾化气压力：45MPa;h)毛细管电压：3500V;i)检测方式：多反应监测模式；j)监测离子对、碰撞能量见表2。4中文名称英文名称保留时间min定量离子对m/z定性离子对m/z碰撞能量裂解电压V亚麻苦苷Linamarin270.0/243.2270.0/185.1270.0/243.2β-龙胆二糖丙酮氰醇Linustatin2.097432.2/405.1432.2/347.1432.2/405.1百脉根苷Lotaustralin3.340284.1/257.1284.1/185.1284.1/257.1β-龙胆二糖甲乙酮氰醇Neolinustatin3.366446.2/419.1446.2/347.1446.2/419.1紫杉氰苷Taxiphyllin3.471334.1/185.1334.1/145.08334.1/185.1蜀黍苷Dhurrin3.635334.1/185.1334.1/145.08334.1/185.1苦杏仁苷Amygdalin4.824480.2/347.1480.2/374.1480.2/347.1黑野樱苷Prunasin5.221318.0/185.1318.0/185.1318.0/79.08.3.3标准曲线制作取适量标准工作溶液(5.4.2),用10%甲醇水溶液(5.2.3)稀释成5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L、黍苷、苦杏仁苷标准溶液，以及25μg/L、50μg/L、100μg/L、150μg/L、200μg/L的黑野樱苷标准溶液，用液相色谱-串联质谱联用仪测定，以待测物的特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横用液相色谱-串联质谱仪测定样品和标准溶液。在相同实验条件下，待测物在样品中的保留时间与在标准工作溶液中的保留时间偏差在士2.5%以内，并且色谱图中各组分定性离子对的相对丰度，与浓度接近的标准工作液中相应定性离子对的相对丰度相比，偏差不超过表3规定的范围，则可判断为样品中存在对应的待测物。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度最大允许偏差士25%58.3.5定量测定用液相色谱-串联质谱仪测定样品和标准溶液，以色谱峰面积按外标法定量，根据标准曲线得到化合物浓度，平行测定不少于两次。当样品中化合物浓度超过标准溶液浓度范围时，用10%甲醇水溶液(5.2.3)适当稀释。在上述色谱和质谱条件下，8种生氰糖苷的特征离子质量色谱图见附录B。9结果计算与表述试样中生氰糖苷化合物含量w;按式(1)计算： (1)式中：p——由标准曲线求得试样溶液中生氰糖苷化合物的质量浓度，单位为微克每升(μg/L);V——样品溶液定容体积，单位为毫升(mL);m——试样质量，单位为克(g);f——稀释倍数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果算术平均值表示，结果保留三位有效数字。10精密度在重复性条件下获得的两次独立的测试结果的绝对差值不大于算术平均值的20%11检出限与定量限生氰糖苷化合物的检出限和定量限见表4。表4生氰糖苷化合物检出限与定量限单位为微克每千克化合物名称检出限定量限亚麻苦苷5β-龙胆二糖丙酮氰醇5百脉根苷15β-龙胆二糖甲乙酮氰醇5紫杉氰苷5蜀黍苷苦杏仁苷2黑野樱苷6(资料性)中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量主要农产品亚麻苦苷LinamarinC₀H₇NO₆木薯β-龙胆二糖丙酮氰醇Linustatin72229-40-4C₆H₂₇NO₁409.388木薯百脉根苷LotaustralinC₁H₁₉NO₅亚麻籽β-龙胆二糖甲乙酮氰醇Neolinustatin72229-42-6C₇H₂₉NO₁423.415亚麻籽紫杉氰苷Taxiphyllin21401-21-8C₁H₇NO₇竹笋蜀黍苷Dhurrin499-20-7C₄H₇NO₇高粱苦杏仁苷Amygdalin29883-15-6C₂₀H₂₇NO₁457.432杏仁黑野樱苷Prunasin99-18-3C₄H₇NO杏仁7响应值响应值(资料性)8种生氰糖苷特征离子质量色谱图保留时间/min保留时间/mina)亚麻苦苷定量离子色谱图c)β-龙胆二糖丙酮氰醇定量离子色谱图b)亚麻苦苷定性离子色谱图保留时问/mind)β-龙胆二糖丙酮氰醇定性离子色谱图图B.18种生氰糖苷的特征离子质量色谱图8响应值响应值保留时间/min保留时间/minf)百脉根苷定性离子色谱图保留时间/min保留时间/ming)β-龙胆二糖甲乙酮氰醇定量离子色谱图保留时问/mini)紫杉