注射用醋酸去氨加压素制备工艺及质量考察

摘

要：目的：建立注射用醋酸去氨加压素的最佳制备工艺。方法：采用真空冷冻干燥法，对注射用醋酸去氨加压素的工艺条件，如药液装量、预冻温度、升华干燥温度、解吸干燥温度等进行考察。结果：最佳制备工艺为药液装量0.8mL/瓶，选取-40℃为本产品预冻温度，在真空状态下，以-40～-25℃进行升华干燥，在35℃下进行解吸干燥。结论：经验证，该注射用醋酸去氨加压素制备工艺适合批量生产，产品质量符合国家标准规定。关键词：注射用醋酸去氨加压素；制备工艺；稳定性0

引言醋酸去氨加压素（desmopressinacetate）为天然精氨盐加压素的结构类似物，系对天然激素的化学结构进行两处改动而得，即1-半胱氨酸脱去氨基，以8-D-精氨酸取代8-L-精氨酸，因此本品亦称去氨精氨酸加压素。其分子式为C46H64N14O12S2C2H4O2，分子量为1129.35，化学名为巯基丙酰-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-谷氨酰氨酰-L-天冬酰氨酰-L-半胱氨酰-L-脯氨酰-D-精氨酰-L-甘氨酰胺醋酸盐（1,6-二硫环）。在常温下，醋酸去氨加压素为一种白色无嗅粉末。醋酸去氨加压素是一种多肽类药物，是手术及相关科室的新型止血药，可有效减少出血量，并预防深静脉血栓；是轻中度甲型血友病、血管性血友病的一线用药，可用于治疗肝硬化、尿毒症及各种抗凝、抗血小板药物所致的出血；也是中枢性尿崩症及原发性遗尿症的首选用药。注射用醋酸去氨加压素系真空冷冻干燥产品，真空冷冻干燥是指将含水样品冻结到冰点以下，使样品中的水分冻结成小冰晶，然后在真空状态下通过加热使水分由固态直接升华成气态水蒸气而逸出，使样品中水分失去而得到的干燥样品。冻干工艺主要包括预冻、升华干燥、解吸干燥3个阶段，本文通过考察注射用醋酸去氨加压素冻干工艺中的各条件，得到最佳制备工艺，并经验证该工艺适合批量生产。

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材料与设备1.1

材料醋酸去氨加压素；甘露醇；醋酸；注射用冷冻干燥用溴化丁基胶塞；模制西林瓶；抗生素瓶用铝塑组合盖。1.2

主要设备LYO-7.5真空冷冻干燥机；RZGSB西林瓶灌装半加塞机；KSC-ⅡB隧道式超声波玻璃瓶洗瓶机；STE100/2/100洁净对开门灭菌烘箱；KGL250自动轧盖机。

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方法2.1

样品制备将醋酸去氨加压素用注射用水溶解后，与经超滤的甘露醇水溶液合并，用注射用水稀释至所需浓度，用RZGSB西林瓶灌装半加塞机按照所需的相应体积进行灌装，送入LYO-7.5真空冷冻干燥机，依据不同的冻干工艺条件进行冻干，冻干结束后充氮保护，压塞，取出西林瓶，轧盖。2.2

冷冻干燥方法将制备好的样品分装于2mL西林瓶中，放入冻干机干燥箱中进行预冻，并保证冻结完全。之后进行抽真空，在真空度为5～50Pa状态下加热升华干燥，使样品水分含量≤5%。2.3

扩大批量验证将3批注射用醋酸去氨加压素配制液，按照试验优化后的冻干工艺进行冷冻干燥。3批半成品批量为27000瓶。分别按2015版《中华人民共和国药典》二部及国家食品药品监督管理局《注射用醋酸去氨加压素药品标准》（YBH01702010）的相关规定，检定各批次制品的残余水分、细菌内毒素、酸碱度以及含量，统计结果，以验证该工艺的适用性。2.4

质量考察本次试验工艺生产的样品及3批验证工艺生产的产品，由深圳翰宇药业股份有限公司QC部进行抽样检测。2.4.1

水分测定取本品，按照2015版《中华人民共和国药典》四部通则（0832）中的容量滴定法进行检查，要求含水分不得超过5.0%。2.4.2

细菌内毒素测定取本品，按照2015版《中华人民共和国药典》四部通则（1143）中的细菌内毒素检测方法进行检查，要求细菌内毒素含量应小于0.6EU/μg。2.4.3

酸度取本品，加水溶解并稀释制成每l

mL中含2.5

mg的溶液，按照2015版《中华人民共和国药典》四部通则（0631）中的pH值测定法进行检查，要求pH值应为5.0～7.0。2.4.4

溶液澄清度检查取本品，加水溶解并稀释制成每l

mL中含2.5

mg的溶液，按照2015版《中华人民共和国药典》四部通则（0902）中的溶液澄清度检查法进行检查，要求溶液应澄清无色。2.4.5

含量测定按照2015版《中华人民共和国药典》四部通则（0512）中的高效液相色谱法测定含量。色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐溶液（取0.O67

mol/L磷酸氢二钠与0.O67

mol/L磷酸二氢钾等混合，调节pH值至7.0）-乙腈（80:20)为流动相；检测波长为220

nm。取醋酸去氨加压素、杂质A与缩宫素对照品适量，加水溶解并稀释制成每lmL中各约含20

μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。理论板数按醋酸去氨加压素峰计算不低于2

000。测定方法：取本品10支，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每l

mL中约含8μg的溶液，精密量取50

μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取醋酸去氨加压素对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

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结果3.1

装量的确定将稀释好的醋酸去氨加压素溶液分别装入2mL西林瓶中，每瓶装量分别为0.5

mL、0.8

mL、1.1

mL、1.4mL，每瓶含量都是15μg，进行冻干试验，对样品进行性状、饼状物外观、溶液澄清度检查，结果如表1所示。从表1结果对比可知：装量规格为0.8mL/瓶和1.1mL/瓶时，样品性状、饼状物外观最好；0.5

mL/瓶装量规格的样品饼状物出现萎缩；1.4mL/瓶装量规格的样品饼状物过于疏松，容易散开。4种装量规格的冻干样品的溶液澄清度没有明显差异，均符合质量要求。综合考虑，本试验确定0.8mL/瓶为本产品最适宜的冻干装量，既节约物料，装在2mL西林瓶中又显得美观。3.2

预冻温度的确定设置好相应的板层温度，开动压缩机对前箱制冷，使制品温度迅速降温（降温时间≤2h），制品温度分别在-20℃、-30℃、-40℃、-45℃以下保持2h以上，对样品进行性状、饼状物外观、溶液澄清度检查，结果如2所示。从表2结果对比可知：-20℃和-30

℃预冻温度的样品均出现不同程度的饼状物外观萎缩，可能是由于温度较高，样品没有完全冻结，在真空升华阶段极易溶解周围样品所致。而-40

℃和-45

℃预冻温度的样品试验结果没有明显差别，均符合质量要求。由于过低的预冻温度会使能耗增加，因此本试验选择-40

℃为本产品最适宜的预冻温度。3.3

升华温度的确定在真空度为5～50Pa状态下加热升华干燥，使制品最终温度分别控制在-15℃、-20℃、-25℃、-30℃，整个升华干燥阶段需要8h，对样品进行性状、饼状物外观、溶液澄清度检查，结果如表3所示。从表3结果对比可知：当升华温度为-15℃时，冻干样品性状为类白色结晶，冻干饼状物有萎缩现象，溶解后溶液浑浊。这是因为该温度在其共晶点附近时，冰晶部分溶解成液态，吸热蒸发，使样品颜色加深、饼状物出现萎缩。升华温度过低，制冷能耗增加，成本提高。真空冷冻干燥是通过升高板层温度，相应地使干燥物表面温度升高，用以加快升华速度。但是，板层温度并非越高越好，必须考虑样品的性状因素。综合表明，-25℃为本产品最适宜的冻干升华温度。3.4

解吸温度的确定在真空度为1～10Pa状态下加热进行解吸干燥，使制品最终温度分别控制在25℃、30℃、35℃、40℃，整个解吸干燥阶段需要5h，对样品进行性状、饼状物外观、溶液澄清度、水分检查，结果如表4所示。从表4结果对比可知：解吸干燥温度为30

℃时，虽然样品各方面指标基本合格，但水分接近标准规定的上限。解吸干燥温度为25℃时，样品水分不合格。解吸干燥温度为40℃时，样品饼状物外观、性状不合格。故选择35℃为本产品最适宜的解吸干燥温度。3.5

扩大批量验证为了验证优选的冻干工艺的稳定性，车间连续生产了20120301、20120302、20120303这3批注射用醋酸去氨加压素配制液，按照上述试验优选后的冻干工艺进行冷冻干燥工艺的验证。3批半成品的装量均为0.8mL/瓶，批量为27000瓶，结果如表5所示。从表5结果可以看出：这3批冻干制品的检定结果均符合国家标准，表明该冻干工艺符合生产要求，稳定性良好。

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结语冻干制剂主要存在产品萎缩、自溶、分层等缺陷。其主要原因是：预冻温度高，制品尚未完全冻结；升华干燥温度高、速度快，使部分制品融化。本试验中，注射用醋酸去氨加压素溶液的共晶点为-14℃，溶液共晶点在冻干工艺中很重要，它是制定冻干工艺的主要依据。预冻时，必须冷冻到共晶点以下，为了确保产品在预冻时完全冻结，本试验选择-40

℃为其预冻温度。在升华干