液相色谱仪保留时间漂移处理方法 液相色谱解决方案

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保留时间是指溶质通过色谱柱所需时间，即待测组分从进样到显现峰大值所需的时间。保留时间是由色谱过程中的热力学因素所决议，在确定的色谱操作条件下，任何一种物质都有一确定的保留时间，有着仿佛于比移值相同的作用，可作为色谱定性分析的依据。换言之，假如保留时间显现漂移问题，那么检测结果也会随之受到影响。

保留时间重现是液相性能好坏的一个紧要标志，同一种东西，两次的保留时间相差不要超过15s，超过了半分钟可看做保留时间漂移，就无法进行定性。这里我就列举几个保留时间漂移的的原因和解决方法。

1色谱柱平衡

假如察看到保留时间漂移,首先应考虑色谱柱是否已经平衡。在每一次运行之前予以充分的时间平衡色谱柱。通常平衡需要10～20个柱体积的流动相,但假如在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。流动相污染也可能是原因之一、溶于流动相中的少量污染物可能渐渐富集到色谱柱上,从而造成保留时间的漂移。应注意:水是很简单污染的流动相成分。

2固定相稳定性

固定相的稳定性都是有限的,即使在推举的pH范围内使用,固定相也会渐渐水解。例如,硅胶基质在pH4时水解稳定性好,水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。常常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解,如氨基键合相等。

3色谱柱污染

保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是特别有效的吸附性过滤器,它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是:流动相本身,流动相容器,连接管、泵、进样器和仪器密封垫,以及样品等。通常通过试验可判定污染的来源。样品中假如存在色谱柱上保留很强的组分,就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质,如:配药中的赋形剂,生化样品（如血清）中的蛋白及类脂类化合物,食品样品中的淀粉,环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量,在此情况下,保留时间漂移的同时或其后会有反压的加添,可以通过使用固相提取（SPE）等样品前处理方法来去除样品基质的影响,避开色谱柱污染简单的方法是防患于未然。相比之下,找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂,但并非全部污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的很多污染物,但蛋白在THF中就不能溶解,DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。使用保护柱是个特别有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时接受的方法。

4流动相构成

流动相构成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等,应防止流动相由于蒸发、反应等等原因造成的变化。

气相色谱和液相色谱微型化中的关键问题

在器微型化过程中,尺寸的缩小不仅要考虑材料的性质和制造上的可能,还要从原理上考虑尺寸缩小后所带来的一系列问题。这些问题包括：

（1）分别系统中被调配的分子个数是否大于106,由于只有大于106才能得到符合统计结果的数据；

（2）因分别通道尺寸缩小,自然提高了单位柱长的效率,但是总长度的削减可能使总分别效能远低于常规；

（3）对于质量敏感型检测器,经过分别柱后单位时间内到达检测器的分子个数是否充分检测原理所要求的最小数目；

（4）对于浓度型检测器,到达检测池的分子数目是否能充分符合统计规律的分子数目；

（5）检测微区内的外加能量密度是否超过被检测分子所能承受的极限；

（6）微量流动相的输送与掌控；

（7）因材料尺寸的缩小,表面层氧化或腐蚀对器件功能的影响。最后,色谱仪器微型化所带来的好处不仅仅是单位长度分别效率的提高,而是总分别本领的保持甚至提高；不仅仅是分别系统或某个部件的微型化,而是整体的微型化；不仅仅是质量灵敏度的提高,而是浓度灵敏度的保持或提高；不仅仅是能量和物质的低消耗,而是使用的便利和友好；不仅仅是整体尺寸的缩小,更紧要的是整机的稳定性和牢靠性的提高!

下面分别讨论上述7个问题。

（1）色谱分别的基本原理是有符合统计规律数目的分子群经过不断的两相调配和分子碰撞,利用其调配系数的差异来达到分别的目的。这是一个宏观参数。当分子数目低于这个数目时,就会偏离统计规律而显现所谓的涨落现象。分子数目越少,涨落现象越严重。当分子数目低于103个时,已没有精准的色谱保留规律,因此也就失去了宏观意义下的分别规律。一般地,保证符合统计规律的分子数目是106个。

例如内径30μm的填充毛细管液相色谱（μ2HPLC）柱或毛细管电泳柱,若分别保持10万/m和40万/m的分别柱效,直接进样时不过载的进样量分别为40pL（1pL=10—12L）和115pL,分子总数分别是112×1012～112×1014和415×1010～415×1012、样品中含量低至1～0.01μL/L（对μ2HPLC）或低至20～0.2μL/L（对CE）的组分就不能充分106个分子的数目要求,分别过程中就会显现上述问题。所以,上述分别系统对浓度高于这个指标的样品分别时可以有重复的保留时间。假如考虑检测方面的限制[参见下述的（3）和（4）,痕量分析中用粗内径的填充色谱柱总是优于微型色谱柱。

为了能进行痕量分析,微型分别分析系统往往接受样品预浓缩技术以补偿浓度灵敏度的不足。但为此而进展的技术也同样适用于常规分别分析系统,同样可以提高常规仪器的灵敏度,除非样品量受到严格限制。

（2）45年前的色谱柱理论已经指出,毛细管开口柱的内径越小,或填充柱的填料粒度越小,色谱柱的分别效率就越高。毛细管电泳亦然,只是理论上有些不同,如有散热问题和塞子流型的特点。微型化中普遍接受的细内径分别柱并不是微型仪器的专利,所能达到的高柱效也不是近来才认得到的。假如在现有常规仪器中使用这种等效内径的色谱柱,再适当改进进样技术和检测器,就会有与微型色谱或芯片电泳同样的单