革兰氏阳性产芽孢杆菌

关于革兰氏阳性产芽孢杆菌第一节芽孢杆菌属(Bacillus)

本属目前有34个正式种和200个位置不定的种，大多数为非病原菌。其中炭疽芽孢杆菌是人和动物的病原菌，蜡状芽孢杆菌可引致食物中毒，另还有一些种为条件致病菌。第2页,共67页，星期六，2024年，5月炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)

简称炭疽杆菌，是人类、各种家畜和野生动物炭疽病的病原体，该菌在兽医学和医学上均占有相当重要的地位。第3页,共67页，星期六，2024年，5月一、主要生物学特性（一）形态及染色G＋大杆菌（5～10μm），无鞭毛，不运动。动物体内常3～5个菌体连成短链，外有荚膜，不形成芽孢。培养基中

形成长链，形成芽孢。普通培养基中不形成荚膜，但在含血液、血清的培养基，CO2环境中培养则形成荚膜。第4页,共67页，星期六，2024年，5月炭疽杆菌典型形态第5页,共67页，星期六，2024年，5月炭疽杆菌培养物涂片第6页,共67页，星期六，2024年，5月炭疽杆菌的芽孢第7页,共67页，星期六，2024年，5月炭疽杆菌形成芽孢的条件：①有充分的O2②25～35℃③有一定的湿度④中性或弱碱性环境由于炭疽杆菌在体外可形成芽孢，所以，我国兽医法规定：禁止解剖死于炭疽的动物尸体。第8页,共67页，星期六，2024年，5月（二）生长要求及培养特性

1、生长要求37℃、有氧、普通培养基第9页,共67页，星期六，2024年，5月2、培养特性普通琼脂形成灰白色、不透明、大而扁平、表面干燥、边缘呈卷发状的菌落。血琼脂不溶血，个别菌株可轻微溶血。普通肉汤

24h后，上部液体透明，管底有白色絮状沉淀，轻摇试管，沉淀物徐徐上升，卷绕成团而不散开。明胶穿刺倒松树状生长，明胶上部逐渐液化呈漏斗状。青霉素培养基

0.5IU／ml，串珠反应第10页,共67页，星期六，2024年，5月炭疽杆菌在普通琼脂培养基上形成的卷发样菌落第11页,共67页，星期六，2024年，5月炭疽杆菌在血琼脂培养基上形成的菌落第12页,共67页，星期六，2024年，5月（三）抵抗力本菌繁殖体的抵抗力并不强，与一般细菌相似。75℃5～15min即可将其杀死。但该菌的芽孢抵抗力特别强。煮15min通常不能将其杀死，需高压或干烤方能将其杀死。干燥皮毛上的芽孢，可存活10年以上。土壤被其污染，传染性常可保持20～30年。第13页,共67页，星期六，2024年，5月（四）抗原结构1、荚膜抗原

为半抗原，成分为多肽，仅见于有毒菌株，与毒力有关。此抗原的抗体无保护作用，但其反应性较特异，可用于血清学鉴定，如荚膜肿胀试验及免疫荧光抗体法等检测的就是这种抗原。2、菌体抗原

成分为多糖，与毒力无关，但性质稳定，经腐败和高温处理不被破坏，可与炭疽阳性血清发生沉淀反应，故可用于皮毛等畜产品的检验。第14页,共67页，星期六，2024年，5月3、保护性抗原（PA）

是一种胞外蛋白质抗原，为炭疽毒素的组成成分之一，具有免疫原性，能使机体产生抗炭疽杆菌感染的保护力。4、芽孢抗原

是芽孢外膜层含有的抗原决定簇，它与皮质一起组成炭疽芽孢的特异性抗原，具有免疫原性和血清学诊断价值。第15页,共67页，星期六，2024年，5月二、致病性（一）毒力因子1、荚膜增强细菌的抗吞噬能力，有利于细菌扩散。2、炭疽毒素(anthraxtoxin)包括水肿毒素及致死毒素两种。毒性作用主要是损伤微血管的内皮，增强微血管的通透性，改变血液循环动力学，损害肾脏功能，干扰糖代谢，血液呈高凝状态，易形成感染性休克和弥漫性血管内凝血，最后导致动物死亡。第16页,共67页，星期六，2024年，5月炭疽毒素由三种亚单位构成。水肿因子（edemafactor,EF）致死因子（lethalfactor,LF）保护性抗原（protectiveantigen,PA）三者单独存在均无毒性，只有PA与EF或者LF结合才有毒性作用。第17页,共67页，星期六，2024年，5月（二）所致疾病

本菌可致各种家畜、野兽和人类的炭疽病。主要通过消化道传染，但也可经呼吸道及皮肤创伤或通过吸血昆虫传播。草食动物急性败血症肉食动物胃肠炎、咽炎杂食动物慢性咽喉肿胀或隐性感染人肠炭疽、肺炭疽或皮肤炭疽实验动物小白鼠、豚鼠、家兔均易感第18页,共67页，星期六，2024年，5月死于炭疽的牛瘤胃鼓气，天然孔流血，肛门突出第19页,共67页，星期六，2024年，5月病猪咽喉部肿大第20页,共67页，星期六，2024年，5月死于炭疽的牛脾脏显著肿大第21页,共67页，星期六，2024年，5月人的皮肤炭疽第22页,共67页，星期六，2024年，5月

人的皮肤炭疽第23页,共67页，星期六，2024年，5月三、微生物学诊断死于炭疽的病畜尸体严禁剖检。炭疽尸体特征变化：天然孔出血、血凝不良、尸僵不全、腹部鼓胀、可视粘膜发绀、皮下结缔组织呈黄色胶样浸润。确诊可作细菌学检查和血清学检查。第24页,共67页，星期六，2024年，5月（一）细菌学检查1、病料采集生前：水肿液或血液死后：耳朵肠炭疽：粪便若已错剖畜尸，可采取脾、肝等进行检验，尸体就地深埋2米以下，表面用20%的石灰乳消毒。第25页,共67页，星期六，2024年，5月2、镜检病料涂片干燥后，在10%的福尔马林溶液或在0.1%升汞中浸泡10～15分钟，然后用美蓝或瑞氏染色法染色镜检，如发现有荚膜的竹节状大杆菌，即可作出初步诊断。第26页,共67页，星期六，2024年，5月

3、分离培养可用普通琼脂或血琼脂平板，得到的纯培养物可作以下鉴定：①噬菌体裂解试验②青霉素抑菌试验③荚膜形成试验④串珠试验⑤溶血试验第27页,共67页，星期六，2024年，5月4、动物试验将被检材料制成1：5悬液，皮下注射小鼠、豚鼠或家兔。动物通常于注射后24～72h死于败血症。剖检可见注射部位胶样浸润及脾脏肿大等病理变化。取血液、脏器涂片镜检，当发现竹节状有荚膜的大杆菌时，即可诊断。第28页,共67页，星期六，2024年，5月（二）血清学检查多用已知抗体检查被检的抗原。如：炭疽环状沉淀反应（Ascoli氏反应）协同凝集试验串珠荧光抗体检查琼脂扩散试验酶标SPA间接染色法第29页,共67页，星期六，2024年，5月四、免疫防治1、Ⅱ号炭疽芽孢苗用于牛、马、驴、骡、骆驼、绵羊、山羊和猪。注射后14d即可产生坚强免疫力，免疫期一年。2、无毒炭疽芽孢苗

适用于牛、马、驴、骡、绵羊和猪，免疫期一年。此苗对山羊反应强烈，可引起严重局部反应，有的甚至发生死亡，故禁用于山羊。3、抗炭疽血清

可用于治疗，或在发生炭疽的疫区作紧急预防。第30页,共67页，星期六，2024年，5月第二节梭菌属(Clostridium)梭菌是一群G＋大杆菌，均能形成芽孢，芽孢直径多超过菌体横经，芽孢位于菌体中央时，使菌体膨胀变形呈梭形，故名梭状芽孢杆菌，简称梭菌。本属细菌均为厌氧菌，绝大多数严格厌氧，少数可在微氧环境生长。第31页,共67页，星期六，2024年，5月本属有74个正式种和100多个位置不定的种。分布于土壤、污水、海洋沉积物、腐烂的植物、动植物产品、人和其他动物及昆虫的肠道、人与动物的伤口及软组织感染灶。多数为非病原菌，约有30梭菌具有弱致病性，约有10种梭菌具有强致病性，多为人兽共患病病原。第32页,共67页，星期六，2024年，5月常见病原梭菌及其所致疾病

细菌种型所致疾病

产气荚膜梭菌A型(C.PerfringenstypeA)恶性水肿，人食物中毒产气荚膜梭菌B型(C.PerfringenstypeB)羔羊痢，驹、绵羊、山羊肠毒血症产气荚膜梭菌C型(C.PerfringenstypeC)羊猝狙，犊牛、羔羊、仔猪肠毒血症，人、禽类坏死性肠炎产气荚膜梭菌D型(C.PerfringenstypeD)绵羊、山羊、牛肠毒血症产气荚膜梭菌E型(C.PerfringenstypeE)犊牛、羔羊痢疾气肿疽梭菌(C.chauvoei)气肿疽腐败梭菌(C.septiccum)恶性水肿、羊快疫诺维梭菌A型(C.novyitypeA)恶性水肿诺维梭菌B型(C.novyitypeB)黑疫诺维梭菌C型(C.novyitypeC)水牛骨髓炎溶血梭菌(C.haemoiyticum)牛、羊细菌性血红素尿肉毒梭菌A～F型(C.BotulinumtypeA～F)动物和人肉毒中毒症阿根廷梭菌(C.argentinense)人肉毒中毒症（阿根廷）破伤风梭菌(C.tetani)破伤风艰难梭菌(C.difficiie)人、犬、猪、驹肠炎、腹泻第33页,共67页，星期六，2024年，5月梭菌病的分类及诊断梭菌病，按性质和症状大致可分为5类。①气肿疽与恶性水肿②快疫与类快疫③痢疾与肠炎④食物中毒⑤破伤风除第一类外，其余主要是由细菌毒素所致，所以诊断重点应是毒素检查。而气肿疽与恶性水肿是由细菌感染引起，诊断应进行细菌学检查。第34页,共67页，星期六，2024年，5月一、产气荚膜梭菌(Cl.perfringens)

又名魏氏梭菌、产气荚膜杆菌。该菌是羔羊痢、羊猝狙和羊肠毒血症的病原体，也可引起人恶性水肿。第35页,共67页，星期六，2024年，5月（一）形态及染色

G＋大杆菌，长约l.3～19.0μm，单独散在。无鞭毛。芽孢位于菌体中央，使菌体膨胀呈梭形。多数菌株可形成荚膜。第36页,共67页，星期六，2024年，5月（二）生长要求及培养特性生长要求在厌氧，加葡萄糖、血液或血清的培养基中培养。第37页,共67页，星期六，2024年，5月培养特性生长迅速，8min繁殖一代。血琼脂形成灰白色、边缘整齐的圆顶状菌落或边缘呈锯齿状的大菌落。大多数菌株可产生双层溶血环。葡萄糖血清琼脂灰白色，半透明，“勋章”样的大菌落。厌氧肝汤培养5～6h即呈均匀浑浊，并产生大量气体。第38页,共67页，星期六，2024年，5月（三）生化特性最突出的是对牛乳培养基的“暴烈发酵”。第39页,共67页，星期六，2024年，5月（四）分型该菌至少可产生20种外毒素，毒素以小写希腊字母表示，其中α、β、ε和ι是主要致死毒素，其余为次要致死毒素和非致死性毒素。根据主要致死毒素与其抗毒素的中和试验可将此菌分为A、B、C、D和E5个型。第40页,共67页，星期六，2024年，5月（五）致病性本菌致病的主要物质是其产生的毒素。A型菌人气性坏疽和食物中毒B型菌羔羊痢C型菌羊猝狙(struck)D型菌羊、牛的肠毒血症E型菌犊牛、羔羊肠毒血症第41页,共67页，星期六，2024年，5月羊肠毒血症:肠道浆膜、粘膜充血、出血第42页,共67页，星期六，2024年，5月仔猪梭菌性肠炎，小肠严重出血第43页,共67页，星期六，2024年，5月（六）微生物学诊断A型所致气性坏疽的微生物学诊断，主要依靠细菌分离鉴定。其余各型所致的疾病，均系细菌在肠道内产生毒素所致，诊断重点是作肠毒素检查。第44页,共67页，星期六，2024年，5月毒素检查方法取回肠内容物，加5～10倍灭菌生理盐水稀释，离心沉淀取上清液，即检样。检样分成两份，一份不加热，一份煮沸30min，然后分别静脉注射家兔(1～2m1)或小鼠(0.1～0.3m1)。如不加热组动物死亡，加热组动物不死亡，证明有毒素存在。确定毒素的型，须进一步做毒素中和保护试验。第45页,共67页，星期六，2024年，5月中和试验方法将未煮沸的上清液分为4份，每份1ml，分别加入B、C、D型抗毒素及生理盐水1ml，混合均匀后在37℃下作用40min，然后分别静脉注射小鼠或家兔一组，观察24h，记录各组动物的死亡及存活情况，判定菌型。此外，毒素检查亦可用PCR技术。第46页,共67页，星期六，2024年，5月（七）免疫防治

预防羔羊痢、猝狙、肠毒血症以及仔猪肠毒血症等，可用厌氧菌三联苗或五联苗。三联苗（快疫-猝狙-肠毒血症）五联苗（羊快疫-猝狙-肠毒血症-羔羊痢疾-黑疫）五联菌苗免疫期，除对羊快疫较短外，对其它四病可达一年。第47页,共67页，星期六，2024年，5月二、肉毒梭菌(C1.botulinum)肉毒梭菌是一种腐生性的G＋大杆菌，专性厌氧。该菌分布于土壤，海洋和湖泊的沉积物，哺乳动物、鸟类和鱼的肠道，饲料以及食品中。当有适宜营养且获得厌氧环境时，即可生长繁殖并产生肉毒毒素。人畜食入含此毒素的食品、饲料时即可发生肉毒中毒症(botulism)。第48页,共67页，星期六，2024年，5月（一）主要特性

1、形态染色革兰氏阳性大杆状，形成芽孢，有周鞭毛。

2、培养专性厌氧，产毒最适温度25～30℃。

血琼脂：直径1～6mm不规则菌落，β溶血第49页,共67页，星期六，2024年，5月第50页,共67页，星期六，2024年，5月3、肉毒毒素肉毒毒素是一类锌结合蛋白质，具蛋白酶活性，性质稳定，是毒性最强的神经麻痹毒素之一。该毒素可作用于胆碱能神经末梢，阻断乙酰胆碱的释放，导致肌肉麻痹。第51页,共67页，星期六，2024年，5月（二）细菌分型及所产毒素

菌型毒素类型最易感动物毒素来源

AA人、鸡、貂蔬菜、水果、肉、鱼

BB人肉及肉制品、蔬菜、鱼

CαC1、D水禽无脊椎动物

CβC2、D牛、马、貂、犬尸体、青贮饲料

DC2、D牛、绵羊小动物尸体

EE人、鱼类、野鸟鱼及鱼制品、鱼塘污泥

FF人肝酱、鱼根据毒素抗原性的差异，分为7个型。第52页,共67页，星期六，2024年，5月（三）致病性

A、B型毒素：引起马、牛、水貂等动物饲料中毒和鸡软颈病。

C型毒素：主要引起禽类、马、牛、羊以及水貂肉毒中毒症。

D型毒素：是南非和澳大利亚牛、绵羊肉毒中毒的病因。

A、B、E及F型毒素引起人的食物中毒。第53页,共67页，星期六，2024年，5月（四）微生物学诊断主要是检查肉毒毒素，定型用毒素中和试验。此外，也可用间接血凝试验或琼脂扩散试验检测毒素。第54页,共67页，星期六，2024年，5月（五）免疫防治在动物肉毒中毒症常发地区，可用明矾沉淀类毒素作预防注射，有效免疫期可持续半年至一年，也可用氢氧化铝或明矾菌苗接种。第55页,共67页，星期六，2024年，5月三、气肿疽梭菌(C1.chauvoei)

（一）病原性又名费氏梭菌(Cl.feseri)，俗称黑腿病杆菌，为气肿疽的病原体。此病主要发生于幼牛(6个月～3岁)，通过消化道或创伤感染而发病，症状主要是在肌肉丰满部位发生气性水肿，触诊时有捻发音。受害肌肉常呈暗红色到黑色，并常伴有跛行，故又称为黑腿病(Blackleg)。第56页,共67页，星期六，2024年，5月（二）诊断主要根据镜检、分离培养、生化反应及动物试验等。要注意与腐败梭菌鉴别。（三）免疫防治菌苗有氢氧化铝甲醛菌苗和明矾甲醛菌苗两种。注射后14d能产生可靠免疫力，免疫期均为半年。第57页,共67页，星期六，2024年，5月四、腐败梭菌(CI.septicum)

又名腐败杆菌、腐败弧菌、恶性水肿杆菌（一）病原性该菌经创伤侵入动物体内可引起动物和人的恶性水肿，经消化道感染可引起羊快疫。（二）诊断主要是细菌学诊断，注意与气肿疽梭菌及其它梭菌鉴别。（三）免疫防治对羊快疫的免疫预防，我国现用厌氧菌三联苗或五联苗。第58页,共67页，星期六，2024年，5月腐败梭菌与气肿疽梭菌的鉴别要点

项目腐败梭菌气肿疽梭菌动物肝触片菌体呈长丝状散在、带芽孢大杆菌血琼脂平板菌落呈花边状呈钮扣状杨苷发酵＋－蔗