动物细胞融合与单克隆抗体

受精作用1动物细胞融合的概念一、动物细胞融合动物细胞融合也称细胞杂交，是指

动物细胞结合形成

细胞的过程。融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的

，称为杂交细胞。两个或多个一个单核细胞融合完成标志：细胞核融合成一个核原理：细胞膜的流动性诱导的方法：物理法：化学法：生物法：电激、振动、离心聚乙二醇（PEG）灭活的病毒2动物细胞融合过程为什么灭活的病毒能作诱导剂？病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂交细胞不灭活的病毒能作为诱导剂吗？不能，因为不灭活的病毒会感染细胞。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。3动物细胞融合技术的意义和应用意义：突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。最重要的用途是制备单克隆抗体4植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导方法用途获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性植物细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理法（离心、振动、电激）化学法（聚乙二醇）物理法、化学法（同左）灭活的病毒获得杂种细胞，重要用途制备单克隆抗体强调：浆细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞抗体：能够与抗原发生_____结合的__________。主要分布在

。能产生抗体的细胞是___________________温故知新二、单克隆抗体B细胞浆细胞记忆B细胞分化免疫球蛋白浆细胞（即效应B细胞）特异性血清自主阅读P52：用传统的方法如何获得抗体？抗体的传统生产方法从血清中分离抗体该法制备抗体的缺陷：

产量

、

，且抗体的

。多种B淋巴细胞动物体内多种抗体抗原反复注射如何解决这个问题呢？单克隆抗体！低纯度低特异性差读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念人们发现，动物在免疫反应的过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B淋巴细胞进行无性繁殖，即克隆。1单克隆抗体的概念单克隆抗体：单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞群，产生的化学性质单一，特异性强的抗体。提示1：对B淋巴细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。2单克隆抗体的制备

提示3：有什么方法能使B淋巴细胞也具有这样的能力呢？一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验①为什么给小鼠注射羊的红细胞？②细胞两两融合后，产生几种融合细胞？③杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？④如何得到大量杂交瘤细胞？⑤是否所有的杂交瘤细胞都能产生所需专一性抗体？⑥利用杂交瘤细胞得到大量单克隆抗体的两条途径？阅读课本p53-54已经免疫几种类型？（一选）即要在选择性培养基上筛选出杂交瘤细胞淘汰克隆化培养和抗体检测专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性在具有筛选作用的培养基上培养骨髓瘤细胞免疫小鼠注射特定的抗原蛋白培养骨髓瘤细胞单克隆抗体单克隆抗体体外培养使其数量增殖：动物细胞培养体外培养小鼠腹腔内培养◆涉及技术：动物细胞培养动物细胞融合方法：用专一抗原与这些细胞产生的抗体结合注意：两种筛选的方法和目的不同单克隆抗体的制备获得产生相应抗体的B淋巴细胞BB

、B瘤、瘤瘤（融合的细胞有3种）√细胞培养液小鼠腹水(二选)筛选出能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞3单克隆抗体的应用（1）作为诊断试剂——最广泛应用单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。单克隆抗体的应用：准确、高效、简易、快速（如同位素标记单克隆抗体，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等）小知识：单克隆抗体的应用“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物

（2）治疗疾病和运载药物主要用于癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。利用抗原和抗体的特异性结合单克隆抗体导向，药物为弹药本节小结一、动物细胞融合二、单克隆抗体概念：原理：应用：概念：单克隆抗体是由单一

细胞增殖产生的高度

的抗体。制备：应用：是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。细胞膜的流动性。最重要的用途制备单克隆抗体杂交瘤专一单克隆抗体的制备抗原小鼠B淋巴细胞（能产生抗体）骨髓瘤细胞（能无限增殖）融合选择性培养基（第一次筛选）杂交瘤细胞克隆化培养和抗体检测（第二次筛选）特异性杂交瘤细胞小鼠体内培养体外培养单克隆抗体俺很可怜！本节小结一、动物细胞融合二、单克隆抗体概念：原理：应用：概念：单克隆抗体是由单一

细胞增殖产生的高度

的抗体。制备：应用：是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。细胞膜的流动性。最重要的用途制备单克隆抗体杂交瘤专一两次筛选作为诊断试剂；用于治疗疾病和运载药物1.（2013重庆卷第2题）下图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述，正确的是（）A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性D．④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群D反馈练习2.在制备X单克隆抗体的过程中，如果用a表示骨髓瘤细胞，b表示产生X抗体的浆细胞，c为产生Y抗体的浆细胞，促进细胞两两融合后，对融合细胞进行了两次筛选，其目的分别为（）A．从aa、bb、cc、ab、ac、bc中选出ab、bc；从ab、be中选出abB．从aa、bb、cc、ab、ac、bc中选出ab、bb;从ab、bb中选出bbC．从aa、bb、cc、ab、ac、bc中选出ab、ac；从ab、ac中选出abD．从aa、bb、cc、ab、ac、bc中选出ab、bc;从ab、bc中选出abC反馈练习3.由单克隆抗体研制而成的“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是杀伤性“弹头”，下列对此描述不正确的是()A.“瞄准装置”是由识别肿瘤的单克隆抗体构成B.“弹头”是由放射性同位素、化学药物和毒素等物质构成C.“弹头”中的药物有选择杀伤肿瘤细胞的功能D.“生物导弹”是利用细胞工程制出来的C反馈练习4.正常细胞合成DNA有两条途径：a通路(主通路)和b通路(旁路)。用于进行单克隆抗体制备的骨髓瘤细胞是DNA合成的b通路缺陷型细胞，让B淋巴细胞与这种缺陷型细胞融合，再在加入DNA合成的a通路阻断剂(氨基嘌呤)的培养液中培养，这种培养会产生哪些效果(

)①促进细胞融合②淘汰B淋巴细胞③淘汰骨髓瘤细胞④选择杂交瘤细胞⑤淘汰骨髓瘤细胞相互融合的细胞⑥淘汰B淋巴细胞相互融合的细胞A．①②⑤B．②③④⑤⑥C．②③④ D．④⑤⑥B练习5.(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的

细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）d过程是一个___________的过程，该过程的进行常用_____________或_____________诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成

种类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是

，其特点是_________________________________________。B淋巴

抗原

细胞融合

聚乙二醇灭活病毒

选择性3既能无限增殖又能产生特异性抗体

杂交瘤细胞(